以赤石脂为载体的固定化脂肪酶的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种以赤石脂为载体的固定化脂肪酶的制备方法，首先对赤石脂分别进行羟基化和硅烷化处理，然后将处理好的赤石脂载体加入到肪酶溶液中，经摇床振荡吸附固定后，用海藻酸盐凝胶对吸附了脂肪酶的赤石脂进行包埋，最后冷冻干燥得到赤石脂固定化脂肪酶。本方法采用的赤石脂具有原料易得，价格低廉的特点，同时也具有很好的物理吸附性和表面化学活性，经过改性以及包埋处理后，能显著提升载体的稳定性，制得的固定化酶酶活力回收率高，稳定性好，而且本发明专利技术的工艺简单，操作成本低，有望推动酶法制备生物柴油的工业化进程。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及固定化脂肪酶
，特别涉及。
技术介绍
脂肪酶(lipase，EC3.1.1.3)是一类特殊的酰基水解酶，能够在油-水界面上催化酯水解、酯合成、酯交换等化学反应及高聚物合成和立体异构拆分等有机合成反应，并且在强烈脱水和有机体系中能保持高活性、高稳定性和高区域、立体选择性，因此被广泛应用于油脂水解、油脂改性、皮革加工、造纸工业、洗涤剂工业、制药工业、食品加工、生物能源等方面有着很大的应用潜力，是目前被广泛研究的一种酶催化剂。然而，在实际使用过程中，游离酶即使在最适反应条件下也存在易失活、催化反应不稳定、与产物分离困难或分离成本高等缺点。另外，脂肪酶酶制剂一般是通过微生物发酵产生，或者是从动物、植物体内提取的，分离纯化成本高，导致酶的生产价格较高，加上游离酶很难重复利用，导致酶制剂的使用成本提高，从而限制了游离酶在工业生产中大规模的应用。固定化酶指经物理或化学方法处理后，使酶变成不易随水流失即运动受限制，而又能发挥催化作用的酶制剂。与游离酶相比，固定化酶的优点有:可多次使用，且酶的稳定性提高；反应完成后，固定化酶易与底物和产物分离，而且酶活力降低较少，这样就降低了生产本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以赤石脂为载体的固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：?（1）赤石脂载体的羟基化处理：按每克赤石脂加入6?8ml盐酸的比例，将赤石脂浸渍于盐酸溶液中，并于35?40℃振荡反应过夜，然后用去离子水洗涤至中性，烘干；（2）赤石脂载体的硅烷化处理：按每克羟基化处理的赤石脂添加2?4ml石油醚和0.02?0.04?mL硅烷化试剂的比例，在羟基化处理的赤石脂中加入石油醚和硅烷化试剂，充分混匀后，常温下放置于摇床中反应3?5h，待反应结束后，过滤，滤渣分别用石油醚和无水乙醇洗涤3?5次，烘干；（3）脂肪酶的固定化：按给酶量为40?90mg/g的比例向脂肪酶溶液中加入硅烷化赤石脂，密封，在20...

【技术特征摘要】
1.一种以赤石脂为载体的固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤: (1)赤石脂载体的羟基化处理:按每克赤石脂加入6-8ml盐酸的比例，将赤石脂浸溃于盐酸溶液中，并于35-40°C振荡反应过夜，然后用去离子水洗涤至中性，烘干； (2)赤石脂载体的硅烷化处理:按每克羟基化处理的赤石脂添加2-4ml石油醚和0.02-0.04 mL硅烷化试剂的比例，在羟基化处理的赤石脂中加入石油醚和硅烷化试剂，充分混匀后，常温下放置于摇床中反应3-5h，待反应结束后，过滤，滤渣分别用石油醚和无水乙醇洗涤3-5次，烘干； (3)脂肪酶的固定化:按给酶量为40-90mg/g的比例向脂肪酶溶液中加入硅烷化赤石月旨，密封，在20-40°C下振荡固定l_5h后，抽滤，滤渣用缓冲液洗涤直至没有蛋白洗脱下来，冷冻干燥后备用； (4)赤石脂固定化酶的包埋:按每克赤石脂固定化酶添加10-20ml海藻酸盐溶液的比例，在赤石脂固定化酶中加入质量百...

【专利技术属性】
技术研发人员：余旭亚，邓涛，游金坤，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：