以黏土为载体的固定化脂肪酶的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种以黏土为载体的固定化脂肪酶的制备方法，首先将黏土与水和絮凝剂混匀，将得到的料浆注入模具内成型，干燥后将黏土在一定温度下煅烧，然后粉碎、分筛，再对分筛好的黏土分别进行羟基化和硅烷化处理，将处理好的黏土载体加入用缓冲液配好的脂肪酶溶液中，经摇床振荡吸附，吸附完成后，用缓冲液清洗黏土，直到没有蛋白洗脱下来，冷冻干燥得到固定化脂肪酶；本方法采用的黏土具有原料易得，价格低廉的特点，同时也具有很好的物理吸附性和表面化学活性，经过改性处理后，能显著提升载体的吸附性能，制得的固定化酶不仅反应酶活高，而且比游离脂肪酶有着更好的催化活性。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种以黏土为载体的固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）黏土载体的预处理：将黏土与水以质量比为5:2?4的比例混匀，在恒速搅拌下，逐渐加入絮凝剂，加入比例为每克黏土添加0.3?0.7g絮凝剂，混匀后料浆成型、阴凉处干燥48?72h，干燥后的黏土在500?700℃下煅烧2?4h，粉碎，分筛成粒度为20?120目的颗粒；?（2）黏土载体的羟基化处理：按每克预处理黏土添加10?15ml盐酸的比例，在预处理后的黏土中加入盐酸，并在60?80℃的水浴中充分搅拌10?30min后，抽滤，将得到的黏土用去离子水洗涤至洗涤液的pH=7，烘干；（3）黏土载体的硅烷化处理：按每克羟基化处理的黏土添加3?4ml石油醚和0.03?0.04?mL硅烷化试剂的比例，在羟基化处理的黏土中加入石油醚和硅烷化试剂，充分混匀后，常温下放置于摇床中反应1?3?h，待反应结束后，过滤，滤渣分别用石油醚和无水乙醇洗涤3?5次，烘干；（4）脂肪酶的固定化：按给酶量为20?60mg/g的比例向脂肪酶溶液中加入20?120目硅烷化黏土，密封，在20?40℃下振荡固定0.5?4h后，抽滤，滤渣用缓冲液洗涤直至没有蛋白洗脱下来，然后冷冻干燥，即得到固定化脂肪酶。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：余旭亚，邓涛，游金坤，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：