一种湖州百合组培快繁方法技术

本发明专利技术公开了一种湖州百合组培快繁方法，包括：将洗净的湖州百合的鳞片置于200~300mg/L甲基托布津中震荡0.3~1h后，于70~75%酒精中浸泡20~30s，再浸入质量体积浓度为0.1%~0.2%升汞中15~25min，冲洗干净；将冲洗干净的鳞片接至诱导培养基进行诱导培养；诱导出芽后，转移到增殖培养基进行增殖培养，获得丛生芽；将丛生芽接至壮球生根培养基，获得无菌苗。本发明专利技术的方法有效解决了湖州百合外植体在初代培养过程中易出现真菌、细菌污染的情况，将污染率控制在25%以下，此外死亡率也较低，且建立了一整套完整的初代、继代、壮球、生根培养过程，具有高诱导率及增殖倍数。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物组织培养
，尤其涉及ー种湖州百合组培快繁方法。
技术介绍
食用百合是野生百合经过多年良种驯化、品种筛选及人工栽培后，可供食用、安全无毒的食品，是我国经济价值较高的上等蔬菜，具较好的药用价值和保健功能。食用百合可分为甜百合和苦百合两大类，兰州百合、龙牙百合、卷丹、川百合即为国内主要的食用百合。卷丹又名虎皮百合、南京百合，属于苦百合类食用百合，野生种在我国分布广泛，而以食用作为栽培目的则主要集中在江浙地区。湖州百合(Lilium Iancifolium)是卷丹的一个生态型，已有五六百年的栽培历史，主要分布在湖州市的太湖、漾西、塘甸等乡镇，是浙江省的传统特产。湖州百合栽培种鳞茎个大，肉质细嫩，营养(蛋白质、糖、矿物质及多种维生素)丰富，味甘中带微苦，风味独特，且含微量秋水仙碱等多种药理成分，有润肺化痰、安心宁神、清热利尿、健胃益脾、补中益气等功效，并具一定抗癌作用，被誉为“百合之王”。湖州百合除鲜食外，还被加工成百合干、百合粉、百合罐头、百合饮料等加以出售。随着我国人民生活水平的提高和饮食结构的改变，清凉滋补的百合，作为药膳被人们所青睐，需求量逐年増加。然而，湖州百合虽种植历史悠久，但由于该地农民长期使用当地老品种，不注意提纯复壮，而小鱗茎、珠芽、鳞片扦插的无性繁殖方法，均导致后代容易积累病毒，使得百合病毒病频发，加之新种质缺乏，导致品种退化现象严重。此外，传统繁殖方式主要是去大留小,周期长，占有耕地且降低产量,大大增加了种植成本。目前， 植物快繁技术在以无性繁殖为主的园艺作物上应用广泛，技术也相对成熟。利用组织培养繁殖湖州百合，可在短期内获得保持原有品种优良性状的大量种苗，大大提高其产量和品质。因此，若能推行组培エ厂化育苗方式，不仅能使一些优良株系得到迅速推广，且能大大节约留种成本，产生显著经济效益。目前，针对兰州百合、细叶百合、野百合及东方系百合等的组培育苗的已有很多研究，但是不同种百合，因基因型等遗传背景差异，其所需的技术条件差别很大。而对湖州百合组培快繁技术进行系统研究还未见报道，特别是百合的鱗茎生长于地下，带菌多，使得组培快繁过程中的消毒过程难度加大，始終存在着污染率较高的问题。
技术实现思路
本专利技术提供了ー种湖州百合组培快繁方法，具有高诱导率及増殖倍数，且在获取无菌苗的过程中污染率及死亡率均较低。ー种湖州百合组培快繁方法，包括:(I)将洗净的湖州百合的鱗片置于20(T300mg/L甲基托布津中震荡0.3 Ih后，于70 75%酒精中浸泡20 30s，再浸入质量体积浓度为0.1% 0.2%升汞中15 25min，冲洗干净；(2)将冲洗干净的鱗片接至诱导培养基进行诱导培养；(3)诱导出芽后，转移到増殖培养基进行増殖培养，获得丛生芽；(4)将丛生芽接至壮球生根培养基，获得无菌苗；其中，所述诱导培养基为:琼脂，6 8g/L ;蔗糖，30 35g/L ；MS粉，4 5g/L ;6_BA，0.5 1.0mg/L ；NAA,0.1 0.5mg/L ；所述增殖培养基为:琼脂，6 8g/L ；蔗糖，6(T65g/L ；MS粉，4 5g/L ;6_BA，1.(Tl.5mg/L ；NAA,0.1 0.2mg/L ；所述壮球生根培养基为:琼脂，6 8g/L ；蔗糖，7(T80g/L ；MS粉，4 5g/L ；NAA,0.r0.2mg/L;活性炭，2 3g/L。所述湖州百合的鱗片在洗浄消毒前置于2 4°C处理f 4周。将外植体材料进行一段时间的低温处理，不仅可以减少组织褐化现象的发生，提高诱导率，还能有效降低外植体的带菌率。但低温时间过长过短均不适宜，时间过长易滋生真菌，过短则达不到降低污染率的作用，优选的，所述处理的时间为2 4周，更优选为2周。将甲基托布津、酒精和升汞配合使用，可进行深度灭菌，达到比単一消毒剂更好的消毒效果。另外，需严格控制消毒剂的浓度和消毒时间，防止杀死外植体细胞，影响诱导率。甲基托布津是ー种广谱性的高效、低毒、低残留的内吸杀菌剂，被植物吸收后转化为多菌灵，干扰真菌有丝分裂中纺锤体的形成，影响细菌细胞分裂，使细胞壁中毒，孢子萌发长出的芽管畸形，从而杀死病菌。优选的，所述甲基托布津的浓度为25(T300mg/L，震荡时间为0.3 0.45h ;更优选的，所述甲基托布津的浓度为250mg/L，震荡时间为0.3h。7(T75%的酒精具有强渗透性，可进入细菌的细胞内使蛋白变性，但是在杀死细菌的同时易损伤植物细胞，故将酒精消毒时间控制在30s以内。优选的，所述酒精的浓度为75%，浸泡时间为30s。升汞可以使病菌的蛋白变性，且对细菌的消毒能力比真菌強。优选的，所述升汞的质量体积浓度为0.1%，浸泡时间为2(T25min ;更优选的，所述升汞的浓度为0.1%，浸泡时间为20min。优选的，所述升汞中含有体积比为f 2%的表面活性剤。表面活性剂可以使升汞更好的与外植体的表面接触，增强消毒效果，所述的表面活性剂通常为聚山梨醇酯类表面活性剤，具体可以为吐温-20，价格低廉，且能显著增强附着作用。在培养基中添加外源激素可以诱导外植体出芽、生根，这主要是外源激素与植物外植体内源激素互作的结果，而不同种植物外植体内源激素的错综复杂及内源激素与外源激素作用机理不同，导致了不同种植物外植体所需添加的激素种类、激素含量、激素配比都有很大差别。 优选的，所述诱导培养基为:琼脂，6^8g/L ;蔗糖，30g/L ；MS粉，4^5g/L ;6_BA，1.0mg/L ；NAA, 0.5mg/L。优选的，所述增殖培养基为:琼脂，6^8g/L ；蔗糖，60g/L ；MS粉，4^5g/L ;6_BA，1.5mg/L ；NAA, 0.lmg/し优选的，所述壮球生根培养基为:琼脂，6 8g/L ;蔗糖，80g/L ；MS粉，4 5g/L ；NAA,0.lmg/L ;活性炭，3g/L。百合的组培苗生长势弱，根叶细长柔软，移栽过程中成活率低，容易重新感染病毒，是我国百合种球エ厂化生产中遇到的突出问题。因此，通过组织培养条件，培养膨大的试管鳞茎，可促进壮苗、改善试管苗质量、缩短组培苗在大田生长周期、提高移栽成活率，且有利于种球的贮藏、运输和种质保存。本专利技术专设壮球生根培养基，为获得成活率更高的组培苗提供保障。适宜的培养条件有利于湖州百合的鱗片出芽，快速生长增殖及生根。所述诱导培养和增殖培养的条件为:光照强度150(T20001ux，光照时间为10 12小吋/天，温度为25±2°C。将丛生芽接至壮球生根培养基吋，于黑暗条件下培养3(T35d后转至弱光条件(光照強度一般为8001ux，光照时间一般为12小时/天)培养3飞d，再调整成与所述诱导培养和増殖培养相同的条件下进行培养，即可获得无菌苗。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为:本专利技术的方法有效解决了湖州百合外植体在初代培养过程中易出现真菌、细菌污染的情况，将污染率控制在25%以下，此外，死亡率也较低。本专利技术建立了一整套完整的初代、继代、壮球、生根培养过程，尤其是针对外植体消毒灭菌及不同培养阶段的培养基配方，从而可满足湖州百合离体条件下不同时期的生长发育需求，在较短时间内获得大量増殖，繁殖系数高达15，且无菌苗小鱗茎可达直径Icm以上，在一定程度上可进行エ厂化组培苗生产。附图说本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种湖州百合组培快繁方法，包括：（1）将洗净的湖州百合的鳞片置于200~300mg/L甲基托布津中震荡0.3~1h后，于70~75%酒精中浸泡20~30s，再浸入质量体积浓度为0.1%~0.2%升汞中15~25min，冲洗干净；（2）将冲洗干净的鳞片接至诱导培养基进行诱导培养；（3）诱导出芽后，转移到增殖培养基进行增殖培养，获得丛生芽；（4）将丛生芽接至壮球生根培养基，获得无菌苗；其中，所述诱导培养基为：琼脂，6~8g/L；蔗糖，30~35g/L；MS粉，4~5g/L；6?BA，0.5~1.0mg/L；NAA，0.1~0.5mg/L；所述增殖培养基为：琼脂，6~8g/L；蔗糖，60~65g/L；MS粉，4~5g/L；6?BA，1.0~1.5mg/L；NAA，0.1~0.2mg/L；所述壮球生根培养基为：琼脂，6~8g/L；蔗糖，70~80g/L；MS粉，4~5g/L；NAA，0.1~0.2mg/L；活性炭，2~3g/L。

【技术特征摘要】
1.ー种湖州百合组培快繁方法，包括: (1)将洗净的湖州百合的鱗片置于20(T300mg/L甲基托布津中震荡0.3 lh后，于70 75%酒精中浸泡20 30s，再浸入质量体积浓度为0.1% 0.2%升汞中15 25min，冲洗干净; (2)将冲洗干净的鱗片接至诱导培养基进行诱导培养； (3)诱导出芽后，转移到増殖培养基进行増殖培养，获得丛生芽； (4)将丛生芽接至壮球生根培养基，获得无菌苗； 其中，所述诱导培养基为:琼脂，6 8g/L ；蔗糖，30 35g/L ；MS粉，4 5g/L ;6_BA，0.5 1.0mg/L ；NAA,0.1 0.5mg/L ； 所述增殖培养基为:琼脂，6 8g/L ;蔗糖，6(T65g/L ；MS粉，4 5g/L ;6_BA，1.(Tl.5mg/L ；NAA,0.r0.2mg/L ； 所述壮球生根培养基为:琼脂，6 8g/L ；蔗糖，7(T80g/L ；MS粉，4 5g/L ；NAA,0.2mg/L;活性炭，2 3g/L。2.如权利要求1所述的ー种湖州百合组培快繁方法，其特征在于，所述湖州百合的鳞片在洗浄消毒前置于2 4°C处理f 4周。3.如权利要求1所述的湖 州百合组培快繁方法，其特征在于，所述甲基托布津的浓度为25(T300m...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴昀，常乐，夏宜平，张琳，马怡迪，张佳平，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：