靶向气体填充微囊制造技术

靶向气体填充微囊与包含氨基酸序列的多肽结合，所述序列显示出对于选择素特别是p-选择素的结合亲和力。气体填充微囊可以用于超声成像中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】靶向气体填充微囊
本专利技术一般而言涉及特别用于在诊断方法中使用的靶向气体填充微囊和含有所述微泡的水混悬液。专利技术背景近年来造影剂的快速发展已生成许多不同制剂，其在人或动物体的器官和组织的对比增强成像中是有用的。最近以来，已关注了所谓的“分子成像”，其中合适的靶特异性组分用于造影剂的制剂中，用于允许器官或组织的选择性对比增强成像。此外，任选与分子成像组合的造影剂制剂的治疗用途也已得到描述。特别对于超声对比成像有用的造影剂类别包括在水介质中分散的纳米和/或微米大小的气泡悬液。特别有利的是其中气泡例如通过使用乳化剂、油、增稠剂或糖，或者通过在多种系统中诱陷或封装气体或其前体得到稳定化的那些制剂。这些稳定化的气泡一般在本领域中由多种术语提及，一般取决于用于其制备的稳定化材料；这些术语包括例如“微球体”、“微泡”、“微胶囊”或“微球”。如本文使用的术语“气体填充微囊”或简短地“微囊”包括上述术语中的任何。气体填充微囊的制剂可以适当地进行修饰，用于改善诊断效应（例如通过分子成像）和/或用于治疗目的，例如药物递送和/或血栓溶解。例如，微囊可以与治疗剂和/或特异性组分结合（例如通过包括在其边界外壳中），所述特异性组分能够连接至在患者体内的确定靶（称为“靶向配体”）。靶向配体的例子包括例如肽、蛋白质、抗体、适体或碳水化合物，其能够与在致病过程例如血管生成、炎症或血栓形成期间由器官或组织表达的特异性受体结合。选择素（特别是P-、L-和E-选择素）是在炎症过程期间尤其通过血管内皮表达的细胞粘附分子。选择素配体且特别是P-选择素糖蛋白配体-1（PSGL-1：GenBank登记号Q14242.1）在所有白细胞（嗜中性细胞、单核细胞和大多数淋巴细胞）和髓样细胞上组成性表达。像这样，它在这些细胞与表达P-选择素以及E和L-选择素（尽管具有更低亲和力）的活化血小板或内皮的栓系中起关键作用。P-选择素配体的例子例如公开于美国专利号5,840,679中。国际专利申请公开号WO2008/131217公开了包含针对P-选择素的靶向配体的微泡组合物。特别地，靶向配体是包含P-选择素配体和二聚结构域的融合蛋白。在特定实施方案中，该申请公开了重组P-选择素配体的用途，其由在融合至人IgG1（rPSGL-Ig）的Fc部分的选择素结合糖形中的PSGL-1的氨基末端区域组成，以经由与含生物素微泡结合的生物素-链霉亲和素缀合。虽然所述申请未公开P-选择配体的任何确切序列，但它参考由美国专利申请公开号2003/0166521公开的P-选择配体及其片段的例子。US2003/0166521公开了通过截短成熟PSGL-1的N末端47个氨基酸且将所述PSGL-1的N末端47个氨基酸连接至人免疫球蛋白G-1（IgG1）的Fc部分产生的PSGL-1融合蛋白（dimPSGL-1），也称为重组PSGL-Ig（或rPSGL-Ig）。申请人目前已观察到当与荷有完全蛋白质的微囊相比较时，仅荷有所述rPSGL-1蛋白质的片段的微囊可以具有一些优点，例如在结合功效方面和/或在含有微囊的水混悬液的稳定性方面。专利技术概述本专利技术的一个方面涉及与多肽结合的气体填充微囊的水混悬液，所述多肽由至多200个氨基酸残基的序列组成，且包含如SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸5-16。优选地，所述多肽更优选通过共价键与微囊的组分结合。优选地，所述多肽包含如SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸1-19，更优选如SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸5-41，且甚至更优选如SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸1-47。根据优选实施方案，所述多肽包含至多100个氨基酸残基，更优选至多75个氨基酸残基。根据优选实施方案，所述多肽由式（I）的氨基酸序列组成：（XA）n–Y–（XB）m（I）其中：（XA）n代表n个氨基酸XA的序列，包含如SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸5-16，其中：p是12–199的整数；和XA代表除了赖氨酸外的任何氨基酸；（XB）m代表m个氨基酸XB的序列，其中；m是0–10的整数，条件是总和m+n至多是199；和XB代表除了赖氨酸和半胱氨酸外的任何氨基酸；和Y代表包含用于使多肽与微囊的组分结合的反应部分的氨基酸。优选地，Y残基的反应部分是–NH2或–SH；更优选地Y是赖氨酸或半胱氨酸，甚至更优选赖氨酸。根据进一步优选实施方案，所述多肽由式（II）的序列代表：（X1）p–[（C–（X2）a]q–[（C–（X3）b]r–Y–（X4）s（II）其中C代表半胱氨酸；Y代表赖氨酸或半胱氨酸，优选赖氨酸；（X1）p代表p个氨基酸X1的序列，包含如SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸5-16，（X2）a代表a个氨基酸X2的序列，（X3）b代表b个氨基酸X3的序列，（X4）s代表s个氨基酸X2的序列，其中：X1、X2、X3、X4独立地代表除了赖氨酸和半胱氨酸外的任何氨基酸；n是12–199的整数，优选12–99，更优选12-74；a和b独立地是0–50，优选0–20且更优选0–10的整数；q和r独立地是0或1，至少是1；和s是0–10的整数；条件是总和p+（a·q）+（b·r）+s至多是199，优选至多是99且甚至更优选74。上文举例说明的多肽优选包含与序列的氨基酸结合的至少一个O-聚糖部分和/或至少一个硫酸残基。根据本专利技术的优选实施方案，上文举例说明的多肽是二聚体形式，优选是同源二聚体形式。根据特别优选的实施方案，所述多肽由如SEQIDNO:3中所示的序列组成。优选地，序列的两个半胱氨酸残基可以结合相应序列的分别半胱氨酸残基，以提供以二聚体形式的多肽。本专利技术进一步涉及以干粉或冻干残渣形式的所述气体填充微囊的前体。通过使其与生理学可接受的含水载体接触，所述前体特别是可重构的，以在气体的存在下在混合物搅动后形成所述气体填充微囊的水混悬液。本专利技术的进一步方面涉及包含所述气体填充微囊的前体和生理学可接受的含水载体的药物试剂盒。专利技术详述术语“气体填充微囊”包括包含由稳定化材料的外壳或层（包括成膜层）围绕的微米或纳米大小的气体泡的任何结构。该术语包括本领域称为气体填充脂质体、微泡、微球体、微球或微胶囊的那种。微囊一般悬浮于含水载体中，特别是生理学可接受的含水载体中。稳定化材料可以是本领域一般已知的任何材料，包括例如表面活性剂、脂质、鞘脂、寡聚脂、磷脂、蛋白质、多肽、碳水化合物和合成或天然聚合材料。术语“微泡”包括悬浮于含水载体中的气体泡，其在气体/液体界面由极薄的外壳（薄膜）结合，涉及沉积在气体与液体界面上的稳定化两性分子材料（本领域有时也称为“消失式”外壳）。微泡混悬液可以通过下述进行制备：使其合适前体例如粉末状两性分子材料（例如冷冻干燥的预形成的脂质体或冷冻干燥的或喷雾干燥的磷脂分散体或溶液）与空气或其他气体接触，且随后与含水载体接触，同时搅动以生成微泡混悬液，其随后可以施用，优选在其制备后不久。气体微泡的水混悬液、其前体及制备的例子公开于例如US5,271,928、US5,445,813、US5,413,774、US5,556,610、5,597,549、US5,827,504和WO04/069284中，其通过引用整体合并入本文。术语“微球”或“微胶囊”包括其中气体泡由天然或合成聚合物的脂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.08.09 EP 10172318.71.包含气体填充微囊的水混悬液，所述微囊包含靶向构建体，该靶向构建体包含：a)两性分子化合物；和b)同源二聚体多肽，所述同源二聚体多肽由两个多肽单体组成，其中每个多肽由至多200个氨基酸残基组成，包含单个赖氨酸残基、至少一个半胱氨酸残基和SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸1-19；其中所述多肽单体通过各自的半胱氨酸残基形成二硫桥；其中所述同源二聚体多肽通过所述赖氨酸残基上的氨基反应部分与所述两性分子化合物共价结合。2.根据权利要求1的水混悬液，其中所述多肽包含SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸1-47。3.根据前述权利要求1的水混悬液，其中所述多肽包含至多100个氨基酸残基。4.根据前述权利要求1的水混悬液，其中所述多肽包含至多75个氨基酸残基。5.根据前述权利要求2的水混悬液，其中所述多肽包含至多100个氨基酸残基。6.根据前述权利要求2的水混悬液，其中所述多肽包含至多75个氨基酸残基。7.根据权利要求1的水混悬液，其中所述多肽由SEQIDNO:3中所示的氨基酸序列组成。8.根据权利要求1的水混悬液，其中所述多肽由式(I)的氨基酸序列组成：(XA)n–Y–(XB)m(I)其中：(XA)n代表n个氨基酸XA的序列，包含SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸1-19和至少一个半胱氨酸残基，其中：n是12–199的整数；和XA是除了赖氨酸外的任何氨基酸；(XB)m代表m个氨基酸XB的序列，其中；m是0–10的整数，条件是总和m+n至多是199；和XB是除了赖氨酸和半胱氨酸外的任何氨基酸；和Y是半胱氨酸或赖氨酸。9.根据权利要求8的水混悬液，其中(XA)n包含SEQIDNO:1中所示的至少氨基酸1-47。10.根据权利要求8的水混悬液，其中n是12–99的整数，并且m+n至多是99。11.根据权利要求8的水混悬液，其中n是12–74的整数，并且m+n至多是74。12.根据权利要求6－11中任一项的水混悬液，其中XA包含两个半胱氨酸残基。13.根据前述权利要求1–11中任一项的水混悬液，其中所述多肽是包含与序列的氨基残基结合的O-聚糖部分的糖基化的...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·贝亭格，P·布塞，B·拉米，S·舍卡乌伊，I·吉尔伯特布利戈，
申请(专利权)人：博莱科瑞士股份有限公司，
类型：
国别省市：