膜片培育装置制造方法及图纸

一种膜片培育装置，其中，所述膜片培育装置适于单独培育至少一个膜片的多个区域。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】膜片培育装置本申请要求2010年5月21日递交的GB1008518.1和2011年I月5日递交的 GBl 100094. O的申请日的优先权，所述在先申请的公开内容通过引用被包含在本文中。
本专利申请涉及改善的膜片(membrane)和膜片培育(incubation)装置，它们适于Western印记分析法。
技术介绍
Western印记法是劳力密集的实验室分析方法，其被广泛用于生命科学，以确定目标蛋白质是否存在于复杂样品中并且确定目标蛋白质的相对量。短语“目标蛋白质”被用于指代分析方法的使用者希望在复杂样品中确认的蛋白质。蛋白质的相对量被用于测量蛋白质表达的变化(即，上调和下调)。确定是否存在特定的蛋白质通过联系两个变量来实现蛋白质的分子量和其免疫同一性(假设蛋白质这两个非常不同的方面不可能偶然地共存)。确定特定的蛋白质的相对量通过如下来实现测量复杂样品中的总蛋白质含量，或测量复杂样品中的“管家”蛋白质的量，然后将其与复杂样品中的目标蛋白质的量比较。术语“管家”蛋白质用于表示细胞的基本功能所涉及的一般性蛋白质，例如β_肌动蛋白或微管蛋白。标准western印记方法利用凝胶电泳(例如十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳，SDS-PAGE)分离复杂样品中的蛋白质，然后将经分离的蛋白质电转移到固定膜片(通常由硝基纤维素或聚偏二氟乙烯，PVDF制成)，使得蛋白质保持相同的分离图谱。然后，将该膜片在稀释的蛋白质溶液(例如无脂干奶或牛血清白蛋白(BSA))中培育，以封闭非特异性结合位点，然后与特异性地探测目标蛋白质的初级抗体一起培育。然后，洗涤膜片并与允许检测目标蛋白质的次级抗体一起培育。通常，在一个凝胶电泳过程中分离多个样品，例如将NuPAGE 预制凝胶用于 10、12、15、20或26样品，或在ScreenTape (可从Lab901得到)中，多达16个样品可以在单个ScreenTape 内在16个子容器中运行16个样品。培育多个样品中的每一个允许例如用不同类型的抗体或不同水平的抗体浓度单独探测样品中的每一个。但是，分离样品以允许它们被单独地探测目前还要求在将样品彼此分离(例如，通过将单个预制凝胶转移前物或将膜片转移后物剪切成分立的条带)之后，将它们转移到单独的膜片。显然，这是一个麻烦的、不 精确的并且耗时的过程。
技术实现思路
因此，需要提供一种适于在一个膜片上单独培育多个样品的装置。根据本专利技术的实施方式的第一方面，提供被分成多个隔离区域的膜片培育装置。 多个隔离区域防止在培育过程中探针的交叉污染，并且允许所需要的培育试剂被单独引入(例如，通过手工移液或自动化装置)到各个隔离区域。本专利技术的实施方式的膜片培育装置具有许多优点，例如被分成多个区域的单个膜 片培育装置允许使用更小体积的培育试剂。此外，允许用不同类型的抗体或不同水平的抗 体浓度培育各个样品允许优化对目标蛋白质的探测。膜片培育装置的经隔离区域可以包括通过切割掩模中的孔隙以形成凸起阻隔件 所创建的通道。至少一个膜片可以被粘附到掩模上，以提供根据本专利技术的实施方式的膜片 培育装置。掩模可以由塑料构成，并且可以包括对准特征(feature )，使得掩模上的位置可 被对应到在凝胶电泳过程使用的容器上的相应对准特征。这些参考特征帮助蛋白质分离的 结果和培育结果的比较。掩模可以利用压力，例如紧固夹子、夹具系统、真空，或者通过合适 的胶粘剂固定到膜片的表面。本专利技术的实施方式的膜片培育装置也可通过疏水阻隔件被分成多个隔离区域。疏 水阻隔件可以用来代替形成凸起阻隔件的掩模，或者在形成凸起阻隔件的掩模之外，还可 以使用疏水阻隔件。疏水阻隔件可以包括胶水和/或油墨，所述胶水和/或油墨可以通过 丝网印刷来涂覆，并且可以直接涂覆到至少一个膜片上。当疏水阻隔件被涂覆到膜片上并 且该组合与掩模一起使用时，掩模可以利用压力，例如紧固夹子、夹具系统、真空，或者通过 合适的胶粘剂(附图说明图1)固定到膜片上。并且，疏水阻隔件可以直接涂覆到掩模上，并且该组合 可以利用压力，例如紧固夹子、夹具系统、真空，或者通过合适的胶粘剂固定到膜片上。粘附到膜片培育装置的至少一个膜片还可以通过利用膜片的多孔结构的熔融或 变形处理膜片，而被分成多个区域。膜片(诸如PVDF)的多个区域可以利用热或超声波密封 来处理，以产生蛋白质转移区域。密封处理过程在局部化区域中固化膜片，使得经处理的区 域被密封并且流体和生物分子不能穿过经处理的区域。这些流体密封性阻隔防止流体从一 个分道流到另一个分道(毛细作用)，从而仅仅是未经处理的区域允许流体渗透过膜片。如 果流体被施加到未经处理的膜片上，其将从接触点通过膜片的多孔材料扩散，导致样品分 道之间的交叉污染。膜片的密封处理通过如下防止了这样的现象产生多个被流体不可渗 透的区域包围的单独的区域，在所述区域中，可以转移蛋白质。因此，蛋白质可以针对电泳 凝胶被转移到蛋白质转移区域，并且蛋白质转移区域中的每一个可以被单独处理，而不会 有流体渗过膜片从一个样品分道到达其相邻的样品分道。蛋白质转移区域可以被设计成与 膜片培育装置的隔离区域精确对齐，不管是由膜片掩模的凸起阻隔件形成的通道还是布置 在膜片上的疏水阻隔件。在利用热密封进行膜片处理的情况下，膜片将被保持在张力下，并且将被成型为 用于形成隔离区域的加热工具被置于膜片上方。在这样的膜片是PVDF的情况下，合适的条 件可以是90° C和220° C之间的温度，4到12秒之间的持续时间，以及O. 5KgF以上的力， 优选地，热密封工具可以在205° C的温度下、以2KgF的力放置在膜片上7秒时间。在利用超声波密封进行膜片处理的情况下，包含具有预定尺寸的接触区域的声极 被布置在膜片上方，所述膜片被夹紧以将其保持在张力下。将膜片保持在张力下可以通过 如下来实现将膜片置于巢(超声波砧)中，所述巢(超声波砧)具有用于将所述膜片保持平 坦和张紧的夹持框。具有期望图案的接触表面可以被靠着膜片防止，并且激活超声波脉冲 至少一次。在这样的膜片是PVDF的情况下，所述超声波脉冲可以优选地被激活多次，持续 小于I秒的时间。在施加超声波脉冲之后，声极可以被停止，并且在将膜片仍保持在张力下的同时冷却膜片。一旦经处理的膜片已经冷却，就可以拿出膜片进行使用。对于通过热或超声波处理密封膜片的一个特定问题是由于在工具的界面处的局部加热以及在靠近膜片的工具周围的一般性加热所导致的膜片的起皱的风险。通过在焊接之前施加保护层(50至200 μ m的纸片，但是也可以使用聚合物片)，可以减小起皱。该保护层用于帮助从膜片释放加热元件，并且将热更均匀地分散到被处理的区域。该工艺还可以包括对一些区域进行主动加热，同时对其它区域进行主动冷却。可以使用的保护层是50至200 μ m的衬纸。同样地，可以使用聚合物片，只要该聚合物片的熔融温度高于PVDF的熔点。但是，超声波密封可以使用任何聚合物，因为理论上， 应该在PVDF内的焦点处仅仅生成热，并且应该允许相异材料的结合。在另一实施方式中，至少一个膜片的经处理的区域可以充当托管标记物，以在对膜片和其中容纳的蛋白质成像期间辅助对准过程。在一个实施方式中，与膜片培育装置一起使用的至少一个膜片(无论是经过处理的或未经处理的)可以包含额外本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.05.21 GB 1008518.1;2011.01.05 GB 1100094.01.一种膜片培育装置，其中，所述膜片培育装置适于单独培育至少一个膜片的多个区域。2.如权利要求1所述的膜片培育装置，其中，所述膜片培育装置包括掩模和至少一个膜片。3.如权利要求1所述的膜片培育装置，其中，所述膜片培育装置由疏水阻隔件分成多个隔离区域。4.如权利要求2所述的膜片培育装置，其中，所述隔离区域由所述掩模形成，所述掩膜包 括凸起阻隔件以形成通道，并且其中，至少一个膜片位于这些通道的每一个通道内。5.如权利要求4所述的膜片培育装置，其中，所述掩模的这些凸起阻隔件被成型为有助于流体加载到所述通道中的形状。6.如权利要求4或5所述的膜片培育装置，其中，所述膜片掩模包含围绕这些通道而形成的溢流区域。7.如权利要求4、5或6所述的膜片培育装置，其中，所述膜片培育装置包含接触透明特征，所述接触透明特征在干燥时是不透明的，而在湿润时是透明的。8.如权利要求7所述的膜片培育装置，其中，当所述特征在润湿后变透明之后，所述特征的下方显现颜色。9.如权利要求4-8所述的膜片培育装置，其中，由通道形成的所述隔离区域在与所述膜片的界面处与流体密封性可变形密封结合，形成围绕这些通道的流体密封性密封。10.如权利要求9所述的膜片培育装置，其中，所述流体密封性可变形密封具有介于25至75 Shore A之间的硬度。11.如权利要求10所述的膜片培育装置，其中，所述流体密封性可变形密封具有介于35至40Shore A之间的硬度。12.如权利要求9至11所述的膜片培育装置，其中，所述流体密封性可变形密封是衬垫。13.如权利要求12所述的膜片培育装置，其中，所述衬垫是0形圈。14.如权利要求3所述的膜片培育装置，其中，所述疏水阻隔件包含胶水和/或油墨。15.如权利要求11所述的膜片培育装置，其中，所述胶水和/或油墨通过丝网印刷来涂覆。16.如前述权利要求中任意一项所述的膜片培育装置，其中，所述膜片位于膜片支撑表面上。17.如前述权利要求中任意一项所述的膜片培育装置，其中，所述膜片支撑表面被分成多个隔离区域。18.如权利要求17所述的膜片培育装置，其中，这些隔离区域由凸起阻隔件形成，以形成通道。19.如权利要求18所述的膜片培育装置，其中，所述膜片被布置在所述掩模的这些通道与所述支撑表面之间。20.如权利要求19所述的膜片培育装置，其中，由通道形成的这些隔离区域在与所述膜片的界面处与流体密封性可变形密封结合，以形成围绕这些通道的流体密封性密封。21.如权利要求20所述的膜片培育装置，其中，所述流体密封性可变形密封具有介于25至75Shore A之间的硬度。22.如权利要求21所述的膜片培育装置，其中，所述流体密封性可变形密封具有介于35至40Shore A之间的硬度。23.如权利要求20至22所述的膜片培育装置，其中，所述流体密封性可变形密封是衬垫。24.如权利要求23所述的膜片培育装置，其中，所述衬垫是O形圈。25.如权利要求20至24所述的膜片培育装置，其中，与所述掩模的这些通道和所述支撑表面结合的所述流体密封性可变形密封被布置在所述至少一个膜片的上表面和下表面处。26.如权利要求19至25所述的膜片培育装置，其中，所述掩模和膜片支撑表面通过固定装置固定在一起。27.如权利要求26所述的膜片培育装置，其中，所述固定装置是紧固夹子、夹紧系统、真空或通过合适的胶粘剂。28.如权利要求27所述的膜片培育装置，其中，所述固定装置的优选实施方式是紧固夹子。29.如前述权利要求中任意一项所述的膜片培育装置，其中，所述膜片培育装置将所述膜片保持在张力下，以创建平坦和光滑的表面用于所述膜片的进一步处理。30.如前述权利要求中任意一项所述的膜片培育装置，其中，所述至少一个膜片被分成多个隔离区域。31.如权利要求30所述的膜片培育装置，其中，被分成多个隔离区域的所述膜片已经过处理以创建所述膜片的多个流体不可渗透的区域。32.如权利要求31所述的膜片培育装置，其中，这些隔离区域被所述膜片的流体不可渗透的区域包围，以创建蛋白质转移区域。33.如权利要求32所述的膜片培育装置，其中，这些蛋白质转移区域被设计成与所述掩模的这些通道精确对齐。34.如权利要求33所述的膜片培育装置，其中，这些蛋白质转移区域被设计成与所述支撑表面的这些通道精确对齐。35.如权利要求30至34所述的膜片培育装置，其中，所述至少一个膜片被处理，以利用热密封来创建由这些流体不可渗透的区域包围的蛋白质转移区域。36.如权利要求30至34所述的膜片培育装置，其中，所述至少一个膜片被处理，以利用超声波密封来创建由这些流体不可渗透的区域包围的蛋白质转移区域。37.如权利要求30或36所述的膜片培育装置，其中，这些各自分开的蛋白质转移区域和/或这些流体不可渗透的区域充当托管标记物，以在对所述至少一个膜片和其中容纳的蛋白质进行成像期间辅助对准过程。38.如前述权利要求中任意一项所述的膜片培育装置，其中，所述至少一个膜片培育装置包括对准特征。39.如权利要求38所述的膜片培育装置，其中，这些对准特征可以包括所述膜片中的至少一个钻孔、或在辅助标签上打印的并随后施加到所述膜片的至少一个标记物、或直接打印到所述膜片上的至少一个标记物、或通过热、超声波加热或激光而烧到所述膜片上的至少一个标记物。40.如权利要求38和39所述的膜片培育装置，其中，这些对准特征耐甲醇。41.如前述权利要求中任意一项所述的膜片培育装置，其中，所述至少一个膜片培育装置具有条形码，使得该装置是可追溯的。42.如权利要求41所述的膜...

【专利技术属性】
技术研发人员：肯尼思·G·马克拿玛瑞，斯图尔特·保尔沃特，戴维·巴洛，莉迪亚·普列托劳芬特，
申请(专利权)人：LAB九零一有限公司，
类型：
国别省市：