本发明专利技术涉及医药技术领域，是多西环素用于制备治疗上皮性卵巢癌药物的新用途。经过动物实验和体外细胞实验，证实多西环素能抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭，防止上皮性卵巢癌细胞的转移，促进上皮性卵巢癌细胞的凋亡，对卵巢癌细胞尤其是铂类耐药性卵巢癌细胞有显著的抑制作用，还可抑制卵巢癌组织的生长及腹水的形成，因此，多西环素可用于制备治疗上皮性卵巢癌药物。本发明专利技术为多西环素提供了一种新用途，在治疗上皮性卵巢癌方面，与其他化疗药相比，多西环素具有给药方便，副作用小的优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药
，是多西环素用于制备治疗上皮性卵巢癌药物的新用途。
技术介绍
多西环素是一种四环素族广谱抗生素，通常用于感染性疾病的治疗，其抗菌谱除常见的致病菌外，立克次体属、支原体属、衣原体属，非典型的分枝杆菌对多西环素均敏感。多西环素对肺炎球菌有较强的抗菌作用，对杜克嗜血杆菌、布鲁菌属、霍乱弧菌和耶尔森菌属的抗菌作用较好，70%的厌氧菌对多西环素敏感。近年来研究发现，多西环素可以抑制大肠癌、非小细胞肺癌细胞的增殖，也可诱导白血病细胞系、骨肉瘤细胞、黑色素瘤细胞、乳腺癌细胞凋亡。但至今未见多西环素用于治疗上皮性卵巢癌的报道。
技术实现思路
本专利技术为多西环素提供了用于制备治疗上皮性卵巢癌药物的新用途。经过动物实验和体外细胞实验，证实多西环素可以抑制上皮性卵巢癌细胞的增殖，防止上皮性卵巢癌细胞的转移，促进上皮性卵巢癌细胞的凋亡，还可以抑制裸鼠肿瘤模型的上皮性卵巢癌增长及恶性腹水的形成，因此，多西环素可用于制备治疗上皮性卵巢癌的药物。本专利技术为多西环素提供了一种新用途，在治疗上皮性卵巢癌方面，与其他化疗药相比，多西环素具有给药方便，副作用小等优点。附图说明图1是多西环素对卵巢癌细胞的增殖抑制作用其中，A为上皮性卵巢癌细胞SKOV3, B为其顺钼耐药株SK0V3/DDP (下同)。图2是多西环素对卵巢癌细胞侵袭能力的抑制作用。图3是多西环素对卵巢癌细胞凋亡的促进作用。图4是多西环素对裸鼠卵巢癌模型中癌组织生长及恶性腹水的抑制作用。具体实施例方式现结合实施例和附图对本专利技术作详细描述。实施例1、多西环素对卵巢癌细胞的增殖抑制作用实验多西环素，Sigma公司产品，分子式为(C22H24N208 · HCl) 2 · C2H60 · H20，分子量为 1025. 89。(下同)卵巢癌细胞SK0V3及其耐药株SK0V3/DDP，购于ATCC (美国模式培养物集存库)。(下同)制备多西环素溶液将多西环素粉末用无菌注射用水配制成初浓度为5mg/ml的溶液，置于_20°C冰箱冻存备用。制备细胞悬液将卵巢癌细胞SKOV3和卵巢癌细胞耐药株SK0V3/DDP分别用含10%胎牛血清的1640培养基配制成细胞浓度为5 X IO4个/ml细胞悬液备用。实验分A、B两组，A组为卵巢癌细胞SKOV3, B组为卵巢癌细胞耐药株SK0V3/DDP。1、接种细胞悬液将上述配制的A、B组细胞悬液分别按常规以每孔100 μ I接种于96孔板，每组9 个孔，每孔再设2个复孔，亦即Α、B组各设平行的3个组Al、Α2、A3和B1、Β2、Β3 ;2、加入多西环素溶液将上述浓度为5mg/ml的多西环素溶液，用含10%胎牛血清的1640培养基配制成不同浓度的多西环素溶液后，分别加入到上述接种细胞悬液的各孔中，使Al、A2、A3三个平行组的多西环素终浓度依次为O, 2. 5，5，7. 5，10，20，40，80，100 μ g/ml，Β1、Β2、Β3三个平行组的多西环素终浓度依次为O,1. 25，2. 5，5，10，20，40，80，100 μ g/ml ；3、培养将培养板置于37°C孵箱中孵育48小时，此时细胞已经贴壁，加入MTT孵育4小时；4、检测细胞活力吸除培养板各孔中的培养基，每孔加入100 μ I DMSO,震荡10分钟后将培养板放入酶标仪中测OD值，测得的OD值代表细胞活力；5、作图分别取A组3个平行组Α1、Α2、Α3的OD值的平均值和B组3个平行组Β1、Β2、Β3的OD值的平均值，分别以多西环素浓度为横坐标，以细胞活力的相对百分数为纵坐标作图，结果如图1所示。实验重复3次。由图1可见，多西环素可以显著抑制两株细胞的增殖，其效应呈剂量依耐性。用0rigin7软件计算得出，多西环素对卵巢癌细胞SKOV3的半数致死量为16. 63μ g/ml，对卵巢癌耐药株SK0V3/DDP的半数致死量为8. 53 μ g/ml,而且当多西环素浓度仅为1. 25 μ g/ml时已显示对卵巢耐药株SK0V3/DDP的增殖有抑制作用，表明卵巢癌耐药株SK0V3/DDP对多西环素更为敏感，这对临床上较难治的钼类耐药性卵巢癌的治疗非常有利，具有很好的临床应用前景。实施例2、多西环素对卵巢癌细胞侵袭能力的抑制作用实验本实验采用的是Transwell小室(购于BD生物技术有限公司)，其与普通培养板不同，分上室和下室，下室相当于24孔培养板上的一个个孔，只是孔径比较大，上室为置于下室内的小室，每个下室的孔中配有一个小室，该小室又被称之为上室，小室底部为一层具有6-8 μ m孔径小孔的纤维聚酯薄膜，称为基底膜，进行细胞培养时，贴壁于上室底部基底膜的细胞可以穿过小孔，由基底膜的上表面进入下室贴壁于基底膜的下表面。在做癌细胞的侵袭能力实验时，先在上室的基底膜上涂一层BD胶，以封闭基底膜上的小孔，BD胶为一种相当于人细胞外基质成分的胶，癌细胞可以释放分解此胶的物质，从而暴露基底膜上的小孔，贴壁于上室基底膜的细胞就可穿过小孔转移至下室并贴壁于基底膜的下表面，以此模拟人体中癌细胞的侵袭能力。通常由穿越基底膜贴壁于基底膜下表面的细胞量观察癌细胞的侵袭能力。实验重复3次。1、配制多西环素溶液将上述初浓度为5mg/ml多西环素溶液用含10%胎牛血清的1640培养基及无血清1640培养基分别配制成终浓度为10 μ g/ml的含10%胎牛血清的多西环素溶液(下称含血清多西环素溶液)和不含血清的多西环素溶液(下称无血清多西环素溶液);2、制备细胞悬液将卵巢癌细胞SKOV3及其耐药株细胞SK0V3/DDP按常规用含10%胎牛血清的1640培养基于培养瓶中37°C培养36小时，此时细胞生长处于对数期，用胰酶消化后用含10%胎牛血清的1640培养基重悬，制成细胞悬液，密度约2 X IO6个/ml ； 3、接种细胞悬液及加入多西环素溶液实验分为A、B两组，A组为卵巢癌细胞51(0￥3，8组为卵巢癌耐药株细胞31(0￥3/1)0 ，每组在Transwell小室平板上各占四个室,作为a、b、c、d四个小组,其中a、b两组上室和下室加的都为无血清培养基，不同处在于a组的上下室都加入多西环素，b组的上下室均不加多西环素，a、b两组对照，比较多西环素在10 μ g/ml浓度下作用细胞30小时对卵巢癌细胞SKOV3或卵巢癌耐药株细胞SK0V3/DDP的存活细胞数的影响；c、d两组上室都为无血清培养基，下室都为含血清培养基，不同处在于c组的上下室均加多西环素，d组的上下室均不加多西环素，c、d两组对照，以说明多西环素对卵巢癌细胞SKOV3或卵巢癌耐药株细胞SKOV3/DDP侵袭能力的影响；a、b两组与C、d两组的不同处在于a、b两组的下室都为不含血清的培养基，c、d两组的下室都为含血清的培养基，以比较血清作为趋化因子对癌细胞侵袭转移的诱导作用。具体操作如下分别在a、b、C、d各组上室基底膜上涂一层BD胶，室温下自然风干，细胞吹打均匀后将细胞悬液接种于上室，接种量为每孔100 μ 1，置于37°C孵箱孵育4小时待细胞贴壁后，吸除培养基，然后分别作如下处理I)在a小组的上室中加入无血清多西环素溶液100 μ I,下室中加入无血清多西环素溶液500 μ I ；2)在b小组的上室中加入无血清培养基100μ 1，下室中本文档来自技高网...
【技术保护点】
多西环素在制备治疗上皮性卵巢癌药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.多西环素在制备治疗上...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐明娟，吴薇，马蓓，管睿，蔡圣芸，王丽娅，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：
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