来源于前列腺分泌液中的前列腺癌标记物制造技术

本发明专利技术涉及来源于前列腺分泌液中的前列腺癌标记物。揭示了一组新的前列腺癌标志物：结合珠蛋白(Haptoglobin)α链、纤连蛋白1(Fibronectin?1)、白蛋白(Albumin)和/或SERPINB1。前列腺液中，这些蛋白质在前列腺癌患者中的表达显著高于非癌患者的表达。因此，可基于这些蛋白质来开发诊断、评估、预后前列腺癌的试剂或试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
来源于前列腺分泌液中的前列腺癌标记物
本专利技术属于生物技术以及临床诊断领域；更具体地，本专利技术涉及来源于前列腺分 泌液中的前列腺癌标记物。
技术介绍
目前诊断前列腺癌(PCa)主要的诊断标记物是PSA，但其临床诊断上存在特异性 和灵敏度不高的问题，导致临床实践中面临大量不必要的活检。这些问题一方面给病人带 来许多副作用，另外一方面造成医疗资源和费用的大量浪费。早期诊断PCa、对确诊的PCa有选择地进行治疗或单纯随访观察、避免过度治疗是 成功诊治PCa的关键。目前在临床上主要依靠PSA检测、直肠指检、影像学检查和组织病理 检查等手段，但它们都存在一定的局限性，给早期PCa的确诊、治疗选择和预后判断带来了 一定困难。例如临床上广泛应用于早期诊断PCa的标志物为PSA，但是PSA特异性和敏感性 都偏低。约15% PCa患者的血清PSA在正常范围，前列腺炎和前列腺良性增生患者的PSA 水平也会出现升高，而且PSA对判定PCa是否转移及预后的作用不确切。目前对前列腺癌评价，分型和预后基本还是停留在用Nomograms上(常用的是用 Partin表)，主要指标大多是临床指标,例如活检的Gleason评分，临床分期，血清中PSA 水平进行综合评价。在一个大规模的研究中，研究者发现Partin表预测淋巴结侵入，储精 囊侵入，前列腺胞外，或是局限在前列腺的癌症等的检测的AUC分别为O. 77，O. 74，O. 62和 0.68。因此，迫切需要寻找新的PCa标志物。直接用血清来寻找癌症标志物，具有很大的困难，也会碰到许多挑战，即使在拥有 先进质谱仪的状况下，这种挑战也仍然存在。因为血清里有几种高丰度蛋白，如白蛋白、免 疫球蛋白、补体因子，它们构成血清中97%的蛋白，而生物标记物通常是表达量相当低的蛋 白。血清中蛋白的表达丰度是很大的，比如白蛋白的浓度是7. 5X105nmol/L ;而？3么浓度在 3ng/ml,相当于Kr1MioVL,这说明PSA和白蛋白之间相差7. 5X106倍。目前,质谱所能检 测到的蛋白动态范围只有IO2-1O4,远远不够，即使利用蛋白抗体柱去除高丰度蛋白，成效仍 然不明显。即使去掉99%的蛋白，它的动态范围仍然接近于105。因此有必要从其他来源， 寻找血清标记物。和血液相比，作为用于前列腺癌临床诊断的样品，前列腺分泌液具有以下三方面 优势1、理论上，前列腺液中的成分比血液中的成分更能直接、真实地反映前列腺癌的病 理特点。2、前列腺液的来源具有高度的前列腺特异性。因此，前列腺分泌液(Expressed Prostatic Secretions,EPS)中所有的蛋白质(哪怕它们也存在于别的器官)都具有作为 前列腺特异蛋白的资格用于新的前列腺临床诊断癌标记蛋白的筛选。这无疑显著地降低了 筛选新的前列腺癌标记蛋白的难度。3、那些在血液中因水平极低而不易被发现的前列腺癌 标记蛋白如果也在前列腺液中存在的话，则较容易被检测出来。这一点对寻找早期前列腺 癌标记蛋白无疑具有特别的意义，这是因为早期前列腺癌和晚期的相比，其体积很小，因而 分泌物就更少。本专利技术人在2008年率先对前列腺液进行了蛋白质组学研究和严格的过滤分析，共115种蛋白质成功地在前列腺分泌液鉴定出(Li R等，Analysis of expressed prostatic secretions reveals rich source of biomarker candidates， Proteomics Clinical Application. 2008 ；2 :543-555)。和国外不同实验室报道的前列腺癌组织转录水平的数据相比较，本专利技术人发现其中48种蛋白质的mRNA水平在前列腺癌组织也是增加的。随后前列腺分泌液的蛋白质组得到了更深入的研究，也有更多的蛋白质被鉴定(Drake， R. R. , et al.，Clinical collection and protein properties of expressed prostatic secretions as a source for biomarkers of prostatic disease. J Proteomics， 2009.72 (6) p. 907-17 ；Drake, R. R.，et al.，In-depth proteomic analyses of direct expressed prostatic secretions. J Proteome Res,2010. 9(5) :p.2109-16.)。与国际上规模很大的、筛选具有临床诊断应用前景的、新的前列腺癌标志物的研究相比，在过去十多年里将前列腺分泌液作为前列腺癌临床诊断研究样品的报道却是寥寥无几。因此，本领域很有必要研究优化获取前列腺液的方法以及研究前列腺液中的新的蛋白标记物。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供来源于前列腺分泌液中的前列腺癌标记物。本专利技术的另一目的在于提供所述来源于前列腺分泌液中的前列腺癌标记物的用途。在本专利技术的第一方面，提供一种结合珠蛋白(Haptoglobin) α链、纤连蛋白 I (Fibronectin I)、白蛋白(Albumin)、PSA和/或SERPINB1的用途，用于制备从前列腺液中诊断前列腺癌的试剂。 在一个优选例种，所述的试剂还用于前列腺癌的后和/或前列腺癌治疗疗效的评估，较佳地以前列腺液作为样本。在另一优选例中，所述的试剂是特异性识别结合珠蛋白α链、纤连蛋白1、白蛋白、PSA和/或SERPINB1的抗体。在另一优选例中，所述的抗体是多克隆抗体或单克隆抗体。在另一优选例中，对应结合珠蛋白(Haptoglobin) α链、纤连蛋白 I (Fibronectin)、白蛋白(Albumin)、PSA和/或SERPI NB I这5种蛋白质，同时制备2种、3 种、4种或5种所述的从前列腺液中诊断前列腺癌的试剂。在另一优选例中，所述的结合珠蛋白(Haptoglobin) α链还包括其糖基化修饰体。在本专利技术的另一方面，提供一种用于诊断前列腺癌的试剂，其是特异性识别结合珠蛋白α链、纤连蛋白1、白蛋白、PSA和/或SERPINB1的抗体。在另一优选例中，所述的抗体特异性识别结合珠蛋白α链，其是多克隆抗体。在另一优选例中，所述的抗体是AbCam公司产品(ab85846)。在本专利技术的另一方面，提供一种用于从前列腺液中诊断前列腺癌的试剂盒，其中包括容器，以及位于容器中的抗体，该抗体特异性识别结合珠蛋白α链。在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括容器，以及位于容器中的抗体，该抗体特异性识别纤连蛋白I ;容器，及位于容器中的抗体，该抗体特异性识别白蛋白；和/或容器，及位于容器中的抗体，该抗体特异性识别SERPINB1。在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括容器，及位于容器中的抗体，该抗体特异性识别PSA。本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。附图说明图1、前列腺分泌液的2D-电泳图。将前列腺癌患者与同龄人的非癌患者的EPS样品各20份分别等量混合后各取60ug用于每一块2D胶的电泳。IEF范围是3_10。胶的浓度为12%。图2、前列腺癌患者组与非癌对照组前列本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结合珠蛋白α链、纤连蛋白1、白蛋白、PSA和/或SERPINB1的用途，用于制备从前列腺液中诊断前列腺癌的试剂。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李润生，林标扬，王健，刘媛媛，
申请(专利权)人：上海市计划生育科学研究所，浙江大学，
类型：发明
国别省市：