本发明专利技术的目的在于提供具有优异的抗冻活性的抗冻蛋白质，其可在工业水平高效且廉价地进行生产，安全并适于实用。此外，本发明专利技术的目的在于提供作为所述抗冻蛋白质的活性部分的多肽、包含所述抗冻蛋白质或多肽的组合物、食品、生物体样品保护剂和化妆品、以及与所述抗冻蛋白质或多肽特异性反应的抗体。本发明专利技术的抗冻蛋白质来源于植物，且具有特定的氨基酸序列，或者，其为植物种子蛋白质。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抗冻蛋白质、作为其活性部分的多肽、包含所述抗冻蛋白质或多肽的组合物、食品、生物体样品保护剂和化妆品、以及与所述抗冻蛋白质或多肽特异性反应的抗体。
技术介绍
抗冻蛋白质是亦称作不冻蛋白质或AFP(抗冻蛋白质(antifreeze protein))的物质。常规的抗冻蛋白质显示出抑制冰结晶化和控制冰结晶形状等的效果，并伴有热滞活性。在此，热滞是指在蛋白质水溶液中，即使在平衡融点以下的温度、冰也不能生长的温度范围，如果将冰在水溶液中开始生长的温度定义为凝固点，则热滞作为平衡融点和凝固点之间的差被测出。 抗冻蛋白质是吸附在冰结晶表面上发挥上述作用的物质，用于在生物体中保护自身免受细胞冻结。这种抗冻蛋白质已经在例如鱼类、昆虫、植物、菌类、微生物等中被发现(专利文献广2，非专利文献广4)。然而，至今为止报道的抗冻蛋白质在鱼类、昆虫、植物、菌类、细菌等生物体内仅微量存在，提取效率非常差，即使大量存在，也存在着生物体本身难以捕获和培养的问题，因此难以通过工业生产并作为食品用途而使用。因此，作为提供在一整年内稳定且廉价的具有抗冻活性的抗冻蛋白质的方法，提出用水等对低温保存的萝卜苗进行提取的方法(专利文献3)。但是，用专利文献3中公开的方法得到的抗冻蛋白质，未必具有足够的抗冻活性。现有技术文献专利文献专利文献I :日本特开2004-24237号公报专利文献2 日本特开2004-275008号公报专利文献3 :日本特开2007-153834号公报非专利文献非专利文献I :生物物理，第43卷，第3号，第13(Tl35页(2003年)非专利文献2 :Plant Physiology (Plant Physiology),第 119 卷，第 1361 1369 页(1999 年)非专利文献3 Biochem. J. (Biochemcal. Journal)，第 340 卷，第 385 391 页(1999年)非专利文献4 :Can. J. Microbiol. (Canadian Journal of Microbiology),第 144卷，第6页(1998年)
技术实现思路
专利技术要解决的问题本专利技术的目的在于提供具有优异的抗冻活性的抗冻蛋白质，其可在工业水平高效且廉价地进行生产，安全且适于实用。此外，本专利技术的目的在于提供作为所述抗冻蛋白质的活性部分的多肽、包含所述抗冻蛋白质或多肽的组合物、食品、生物体样品保护剂和化妆品、以及与所述抗冻蛋白质或多肽特异性反应的抗体。解决问题的方法本专利技术人等为了解决上述问题进行了深入研究，结果发现了具有非常高的抗冻活性的、来源于植物的蛋白质，由此完成本专利技术。本专利技术涉及的第一抗冻蛋白质来源于植物，并且包含下述(1Γ(4)中的任意蛋白质中的至少一种，(I)具有序列号I的氨基酸序列、并且通过SDS-PAGE测定的分子量为19，000±200Da 的蛋白质， (2)具有序列号2的氨基酸序列、并且通过SDS-PAGE测定的分子量为22，000±250Da 的蛋白质，(3)通过SDS-PAGE测定的分子量为59，000±600Da、其N末端接受了修饰的蛋白质，(4)上述(1) (3)中的任意蛋白质的氨基酸序列中缺失、取代或添加了一个或多个氨基酸、并且具有抗冻活性的蛋白质。本专利技术涉及的第二抗冻蛋白质，其为植物种子蛋白质。本专利技术涉及的多肽为将上述的本专利技术涉及的抗冻蛋白质解离所得到的物质，并且具有抗冻活性。本专利技术涉及的抗体与上述的本专利技术涉及的抗冻蛋白质和/或上述的本专利技术涉及的多肽特异性反应。并且，本专利技术涉及的组合物、食品、生物体样品保护剂和化妆品包含上述的本专利技术涉及的抗冻蛋白质和/或上述本专利技术涉及的多肽。本专利技术涉及的抗冻方法包含如下工序将上述的本专利技术涉及的抗冻蛋白质和/或上述的本专利技术涉及的多肽添加至溶液中。本专利技术涉及的上述本专利技术涉及的抗冻蛋白质和/或上述本专利技术涉及的多肽用于抑制冰结晶化的用途。具体实施例方式以下，对本专利技术涉及的抗冻蛋白质进行说明。需要说明的是，在本申请中，本专利技术涉及的第一抗冻蛋白质和第二抗冻蛋白质有时均被称作本专利技术涉及的抗冻蛋白质。本专利技术涉及的第一抗冻蛋白质来源于植物，并且包含下述(1Γ(4)中的任意蛋白质中的至少一种，(I)具有序列号I的氨基酸序列、并且通过SDS-PAGE测定的分子量为19，000±200Da 的蛋白质，(2)具有序列号2的氨基酸序列、并且通过SDS-PAGE测定的分子量为22，000±250Da 的蛋白质，(3)通过SDS-PAGE测定的分子量为59，000±600Da、其N末端接受了修饰的蛋白质，(4)上述(1Γ(3)中的任意蛋白质的氨基酸序列中缺失、取代或添加了一个或多个氨基酸、并且具有抗冻活性的蛋白质。在本专利技术中，抗冻蛋白质广义上是指具有阻碍冰结晶生长的功能的蛋白质。只要是通过冰结晶结构的观察、测定抑制冰结晶生长的特性等公知的任意方法，表现出抗冻活性的抗冻蛋白质，则包含在本专利技术范围内。以下，对本专利技术涉及的第一抗冻蛋白质的性状进行详细地说明。所述抗冻蛋白质包含用 SDS-PAGE 测量分子量为 19，000±200Da、22, 000±250Da、或 59，000±600Da 的蛋白质中的至少一种。分子量为19，000±200Da的蛋白质具有与序列号I的氨基酸序列实质相同的氨基酸序列，分子量为22，000±250Da的蛋白质具有与序列号2的氨基酸序列实质相同的氨基酸序列，分子量为59，000 土 600Da的蛋白质接受了某些N末端修饰。在此，氨基酸序列实质相同是指氨基酸序列的至少80%以上，优选90%以上，进一步优选95%以上，进一步优选 98%以上，最优选100%重复。另外，本专利技术涉及的第一抗冻蛋白质也可包含上述任意蛋白质的氨基酸序列中缺失、取代或添加了一个或多个氨基酸、并且具有抗冻活性的蛋白质。在上述氨基酸序列中，作为缺失、取代或添加的氨基酸数，优选I以上且3以下，进一步优选I或2，特别优选I。只要包含上述氨基酸序列，蛋白质可以为由单一亚基构成的单体，由多个亚基构成的复合物，或包含复合物一部分的物质。在此，亚基是指例如在二硫苏糖醇等还原剂的存在下，用SDS-PAGE对蛋白质进行分析时，以各个低分子带的形式被确认，是由蛋白质解离得到的多肽。本专利技术中的具有抗冻活性是指在该蛋白质溶液中，通过阻碍冰结晶化而控制冰结晶形状，从而具有抑制冰结晶生长或粗大化的活性。更具体而言，本专利技术涉及的抗冻蛋白质通过结合到冰结晶的结晶面上而抑制冰结晶的生长。这时，与不存在本专利技术涉及的抗冻蛋白质的情况相比，冰结晶的形状可能会有变化。另外，该结合通过阻碍自由水进一步结合在冰结晶上，从而抑制冰的结晶化。本专利技术涉及的第一抗冻蛋白质，在pH8. O的条件下，作为通过使用了阴离子交换树脂的色谱法的吸附级分而获得。另外，在丙酮浓度30体积％以下，适当地沉淀。在此作为阴离子交换体并无特别限定，例如，可列举DEAE(二乙氨基乙基)和Q(季铵离子)等。此夕卜，丙酮沉淀的上限浓度优选为80体积％以下，进一步优选60体积％以下，非常优选40体积％以下，最优选30体积％以下。本专利技术涉及的第一抗冻蛋白质，可从植物中获得。作为植物并无特别限定，例如，可列举属于十字花科、伞形科、百合科和菊科的植物。属于本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：福冈让一，河原秀久，毛笠秀昭，荒井直树，友野润，横田真一，
申请(专利权)人：株式会社钟化，
类型：
国别省市：
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