微泡在制备用于联合诊断级超声作为提高肿瘤微血管通透性药物的用途制造技术

本发明专利技术公开了微泡在制备用于联合诊断级超声作为提高肿瘤微血管通透性药物的用途，所述微泡为超声照影剂微泡，所述诊断级超声的形式：频率范围为1.7～3.0MHz，机械指数范围为0.8～1.4，所述微泡采用静脉注射的给药方式，微泡使用剂量为每公斤体重200～500μl，所述诊断超声的辐照时间为5～10分钟，微泡的该用途适用于提高肿瘤微血管的通透性，能安全、靶向性导入特点组织，并且可以利用这一效应实现非创伤性药物释放或基因转染。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术特别涉及微泡在制备用于联合诊断级超声作为提高肿瘤微血管通透性药物的用途，属于非创伤性超声治疗的

技术介绍
临床肿瘤化疗时，通过使用抗癌药物及免疫调节剂等药物直接攻击肿瘤细胞来治疗实体肿瘤，但是实际应用时，由于受到肿瘤脉管系统屏障的影响，难以取得满意的疗效。为使肿瘤区达到有效治疗浓度必须加大药物剂量，这往往伴随着较大的毒副作用。因此增加肿瘤微血管通透性可以提高药物在肿瘤区的蓄积以增加疗效，从而减少药量和毒副作 用。目前增加肿瘤血管通透性的方法主要有以下几种I.肿瘤血管内皮、基底膜及肿瘤基质中可能存在一些潜在的提高血管通透性的靶部位。通过制作携带活化血管的载体分子，使之导至血管内皮或内皮下层组分可以提高药物作用区域血管通透性。不足之处是特异性不强，在提高肿瘤血管通透性的同时，对正常组织血管活性也会不加选择的盲目影响，可能导致血压调节障碍、水肿等，严重影响患者的生活质量和生命。2.通过对给药大分子进行修饰，改变其理化性质，有助于其穿过血管内皮进人肿瘤组织。例如人们发现蛋白用某些酐类进行温和的化学修饰后，可增加原形蛋白药物在淋巴系统的分布。这种电荷修饰方法可以用来选择性增加血管内皮导向的药物抗癌制剂与其他大分子药物在肿瘤中的分布。不足之处是经过理化修饰后会改变多数药物的活性，使药物在肿瘤组织中代谢活动变化，治疗效果不理想。3.局部穿刺肿瘤组织给药，虽可使部分药物进入肿瘤组织内部，但为创伤性手段，容易损伤周围组织，而且可能会造成肿瘤细胞的转移。4.有研究报道高频率的超声联合微泡方法可暂时提高肿瘤血管内皮的通透性，。但是现有的研究中，都集中在闻频超声中，如聚焦超声和治疗超声，这类闻强度超声都存在以下问题频率过高，容易对照射周围组织造成损伤，照射时间太短，效果不理想；缺少病变监控系统，不能对病变区域进行实时、选择性的超声辐照。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供微泡在制备用于联合诊断级超声作为提高肿瘤微血管通透性药物的用途。为了解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案微泡在制备用于联合诊断级超声作为提高肿瘤微血管通透性药物的用途，所述微泡是超声照影剂微泡，所述诊断级超声的形式频率范围为I. 7 3. 0MHz，机械指数范围为O. 8 I. 4。所述微泡采用静脉注射的给药方式，微泡使用剂量为每公斤体重200 500 μ I。所述诊断超声的辐照时间为5 10分钟。本专利技术与现有技术相比具有以下有益效果I、本专利技术设计的诊断超声辐照微泡诱导的超声空化物理效应产生显著的生物学效应，即声孔效应，引起周围血管内皮细胞被超声打孔导致血管通透性增高，使药物更容易通过内皮间隙进入细胞，提高肿瘤细胞内药物的浓度，以减少药量和毒副作用的发生，该方案安全有效，效果理想；2、超声治疗仪或者聚焦超声功率较大，在提高血管通透性的同时往往会伴随周围细胞的损伤，诊断级超声功率相对较小，在联合微泡进行治疗时对周围正常组织活细胞造成的损伤较小； 3、使用诊断级超声，并且能够准确判断病变的位置以及周围结构，实现靶向性导入特点组织，在治疗的同时能够实时监测，减少周围正常组织产生破坏；4、本专利技术是首次提出微泡在制备用于联合诊断级超声作为提高肿瘤微血管通透性药物的用途，可能为将来超声联合微泡技术在安全、经济的基础上最大可能提高肿瘤区药物的生物学效应提供实验依据。本专利技术治疗方法如下选用诊断超声闻频探头显不最佳肿瘤部位，周围组织结构，并观察血供情况，超声成像显示最佳肿瘤影像后即在体表处标记；经静脉注射所需微泡的情况下，经诊断超声显示在微泡灌注高峰期时，选择低频诊断超声探头辐照超声造影剂灌注的肿瘤组织选择4Ρ1探头，调节频率和ΜΙ，用设定参数的治疗超声定点照射肿瘤区。治疗效果评价程序肿瘤区屏障开放程度，可以用微血管示踪剂伊文思蓝示踪定量，一般情况下伊文思蓝进入血液系统后，与血液中血红蛋白结合成大分子物质，不会渗透到血管外反映。屏障开放后，伊文思蓝可以渗透到肿瘤组织中，进行肿瘤组织中EB含量测定和荧光显微镜观察。附图说明图I是不同处理组的皮下移植瘤模型的SD大鼠肿瘤组织EB含量的变化示意图；图2是激光共聚焦观察不同处理组肿瘤组织内EB外渗图，a :空白对照组肿瘤组织EB分布图像；b :单纯微泡组肿瘤组织EB分布图像；c :单纯诊断超声辐照组肿瘤组织EB分布图像；d :诊断超声联合微泡组组肿瘤组织EB分布图像；图3是蛋白质印迹法检测各实验组P-选择素蛋白与内参蛋白浓度对比图；图4是蛋白质印迹法检测各实验组P-选择素蛋白表达的改变示意图。具体实施例方式将48只已建立Walker-256皮下移植瘤模型的SD大鼠随机分为以下四组空白对照组A ;单纯微泡剂组B ;单纯诊断超声辐照组C ;诊断超声联合微泡组D。给单纯微泡剂组和微泡联合诊断超声组的大鼠尾静脉注射微泡造影剂300 μ Ι/kg，再给四组皆注射伊文氏蓝(Evens Blue,EB)指示剂，选择频率为1·75ΜΗζ,机械指数(mechanical index,Ml)为I.4的诊断超声持续照射肿瘤区7min。使用分光光度计和标准曲线法测量大鼠肿瘤组织内EB含量变化，激光共聚焦显微镜观察EB外溢情况以证实大鼠移植瘤微血管通透性的改变。同时采用透射电镜观察血管内皮细胞及细胞连接的相关变化；蛋白质印记法检测P-选择素蛋白(血管内皮细胞完整性的生物标志物)的相关变化。结论I、如图I、图2所示，单纯诊断超声辐照组C、单纯微泡组B、空白对照组A肿瘤组织的EB含量两两相比差异无统计学意义(P < O. 05)，激光共聚焦观察可见红色光斑主要集中在血管壁，血管周围组织红色光斑不明显，说明单纯超声辐照和单纯微泡组血管通透性无明显增加，EB外渗不明显。而微泡联合诊断超声组D肿瘤组织内EB含量为约为对照组的5倍，激光共聚焦观察可见红色光斑主要集中在血管壁和周围组织，EB外渗明显，表明微泡联合诊断超声可以显著提高肿瘤微血管通透性。2、应用透射电镜观察大鼠移植瘤血管内皮细胞变化，结果发现微泡联合诊断超声组肿瘤血管内皮细胞肿胀，细胞连接可逆性中断。 3、如图3、图4所示,微泡联合诊断超声组P-selectin蛋白明显高于其余各组,说明肿瘤血管内皮细胞完整性受损，内皮细胞之间的连接状况与对照组相比明显减弱，说明肿瘤微血管通透性明显提高。以上所述的仅是本专利技术的优选实施方式，应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本专利技术结构的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本专利技术的保护范围，这些都不会影响本专利技术实施的效果和专利的实用性。本文档来自技高网...

【技术保护点】
微泡在制备用于联合诊断级超声作为提高肿瘤微血管通透性药物的用途，其特征在于，所述微泡是超声照影剂微泡，所述诊断级超声的形式：频率范围为1.7～3.0MHz，机械指数范围为0.8～1.4。

【技术特征摘要】
1.微泡在制备用于联合诊断级超声作为提高肿瘤微血管通透性药物的用途，其特征在于，所述微泡是超声照影剂微泡，所述诊断级超声的形式频率范围为I. 7 3. ΟΜΗζ，机械指数范围为O. 8 I. 4。2.如权利要求I所述微泡在制备用于联合诊断级超声作为提高肿...

【专利技术属性】
技术研发人员：王龚，卓忠雄，何芬，谭伟华，何颖，
申请(专利权)人：中国人民解放军第三军医大学第二附属医院，
类型：发明
国别省市：