柔嫩艾美耳球虫裂殖子提取纯化的方法技术

技术编号:8019472 阅读:261 留言:0更新日期:2012-11-29 02:07
本发明专利技术公开了一种柔嫩艾美耳球虫裂殖子提取纯化的方法,其步骤包括裂殖子释出和裂殖子纯化;所述裂殖子释出由机械法研磨释出和酶消化释出组成;酶消化释出过程中采用0.625‰胰酶和1.75‰牛磺脱氧胆酸钠为消化液,消化比较温和,有利于裂殖子健活,又能消除红细胞,获得纯净的裂殖子。本发明专利技术操作简便,成本低廉,分离纯化的效果理想,其分离的裂殖子不仅数量多、纯净、杂质少,且保持了其旺盛的活力,其适用于进行药物敏感性测定、疫苗研究和其他生物学等方面的研究。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物提取纯化技术,具体涉及。
技术介绍
鸡球虫病主要是由艾美耳属的多种球虫引起的一种土源性肠道寄生性原虫病。此病是通过球虫卵囊传播,因鸡吞食大量孢子化卵囊而感染,该病分布广,发生普遍,在鸡的各种禽病中球虫病的发生率最高,占1/6 1/5,常呈暴发性流行,15 50日龄的雏鸡发病率最高,死亡率可高达80%。由于鸡球虫病分布广,危害大,严重威胁着养鸡业的发展,因此许多专家学者从事球虫的分子生物学、免疫学(疫苗)、组织培养和抗药性等方面的研究,要进行这些研究,首先就必须纯化出大量的虫体(裂殖子)。目前裂殖子纯化选择的方法大致有3种第一种是利用比重差异进行纯化,如不连续梯度离心法、离心淘洗法;第二种是 酶消化法,即用酶消化肠内容物,再简单地过滤和离心来去除杂质;第三种方法是层析法,如用玻璃珠、合成纤维作层析剂来纯化。这些方法存在无法除去红细胞等杂质、回收率低、酶消化时间难于控制或操作复杂、纯化效果不佳或仪器试剂昂贵等缺点。目前,有研究者对层析法进行了改进,如安健在《柔嫩艾美耳球虫裂殖子的分离纯化》的文献中对DEAE-纤维素52层析柱法进行了改进,以改进的洗脱剂进行纯化得到较高本文档来自技高网...

【技术保护点】
柔嫩艾美耳球虫裂殖子提取纯化的方法,其步骤包括裂殖子释出和裂殖子纯化;其特征在于:所述裂殖子释出由机械法研磨释出和酶消化释出组成;所述机械法研磨释出是将感染了孢子化卵囊后发育至裂殖子阶段的离体的鸡盲肠黏膜机械刮下,然后将黏膜组织充分研磨,使裂殖体游离出来;所述酶消化释出是将经过机械法研磨释出的黏膜膜组织按体积比1?:?1~1.5的量加入pH值为7.2~7.4的PBS溶液研磨混匀,再用80~100目筛粗过滤后,向滤液中按体积比1?:?1~1.5的量加入0.625‰胰酶和1.75‰牛磺脱氧胆酸钠混合液,充分摇匀,置37~38℃摇床消化,每隔10~15min镜检一次,当观察到大多数裂殖体破裂,释出裂...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:谢永平彭昊马春霞李军杨威陈泽祥潘艳许力干禤雄标胡帅谢宇舟
申请(专利权)人:广西壮族自治区兽医研究所
类型:发明
国别省市:

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