一种金鳟全雌杂交苗种的培育方法技术

本发明专利技术提供了一种金鳟全雌杂交苗种的培育方法。本发明专利技术使用雄性激素诱导性成熟期的雌性硬头鳟亲鱼获得具有雄性功能的硬头鳟伪雄鱼；使金鳟亲鱼卵子与硬头鳟伪雄鱼精子受精，孵化，获得全雌杂交金鳟鱼苗种。孵化期间受精卵发眼率为83%以上，苗种孵化率达到90%以上，得到的鱼苗经检测，雌性率为100%，苗种金鳟率（体色为金黄色）达到91%以上，苗种培养30天增重率为114%以上，成活率达到98%以上。本发明专利技术提供的金鳟全雌杂交苗种培育方法与纯种金鳟交配产生的苗种相比，既保持金鳟率不变，又获得了具备杂交和全雌双重优势的金鳟苗种，具有较好的经济效益和市场价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及水产生物育种
，具体地涉及金鳟全雌杂交鱼苗种的培育方法。
技术介绍
鲑鳟鱼是目前世界上主要养殖的鱼类之一，自然条件下它们多生长于常年水温不超过20°C、水质为贫营养性、没有化学污染和有机污染的低温泉水或清澈的溪流中，因此又称之为冷水性鱼类。由于鲑科鱼类对生存水质有非常高的要求，略有污染即无法生存，所以鲑鳟鱼体干净，无任何污染，是名副其实的无公害緑色食品，吃起来放心。另外，鲑鳟鱼是ー种高蛋白、高脂肪、低胆固醇(胆固醇含量微乎其微)的鱼类。和其它鱼相比，鲑鳟鱼含 有一般鱼类所缺乏的甘氨酸，维生素A、B的含量也高于其它鱼类，微量元素铁的含量更是其它鱼类所不及。鲑鳟鱼肉质鲜嫩，无邪味，无腥味，无需刮鳞，人每周吃两次鲑鳟鱼就可以预防血栓病的发生。意大利专家ー项最新的研究结果表明，吃含有鲑鳟鱼的保健品能够大幅度減少心脏病患者突然死亡的风险。每天吃I克用鲑鳟鱼鱼油提炼的DHA，将会减少心脏病发作时突然死亡的风险。因此，鲑鳟鱼是ー种肉质鲜美且具有保健价值的鱼类。由于其自身的品质和对生活环境的特殊要求，决定了它绿色、环保营养食品的性质，因此颇受消费者的青睐。鲑鳟鱼是我国目前主要的冷水性养殖鱼类，由于长期近亲繁殖、缺乏系统选育等原因，导致养殖个体出现了性早熟、个体小型化、病害滋生等问题，不能满足消费者对大规格鲑鳟鱼的需求，造成养殖效益下降。研究表明杂交能够急剧的动摇遗传的保守性，使杂种的遗传性富于游动性，具有更大的可塑性，从而能迅速和显著地提高杂种的生活力，进而获得杂种优势；杂种能丰富遗传结构，通过杂交将两个以上遗传基础不同的品种或种以上个体的基因自由组合，出现新的遗传类型，继而人们可以选择优良的个体，培育成新品种。正常情况下，雌鱼的性成熟比雄鱼晚I年，由于性成熟又引起生产停滞、肉质下降，为了避免因性成熟早而影响鱼的产量和质量，进行杂交全雌性养殖是一个有效提高养殖效益的途径。国内对鲑鳟鱼杂交苗种制备的研究主要集中在虹鳟与溪红点鲑的杂交苗种制备、虹鳟与山女鳟的杂交苗种制备、虹鳟与金鳟的杂交苗种制备等，对鲑鳟鱼全雌苗种制备的研究主要集中在虹鳟纯种全雌苗种的制备方面，其方法为用人工诱导雌核发育技术获得全雌二倍体苗种，再通过投喂雄性激素诱导全雌二倍体苗种成为伪雄鱼，培育至性成熟后利用原雌鱼与假雄鱼进行人工繁殖。该方法操作相对繁琐，需要先获得全雌二倍体苗种，再对苗种进行雄激素诱导，培育至性成熟，待伪雄鱼性腺发育成熟后再进行后续受精工作，整个过程耗时将近3年，因此该方法费时费力，且由于是纯种繁育，故培育的种苗缺少杂交优势。金鳟(Oncorhynchus mykiss)体呈金黄色,是虹鳟的一个体色分离种，为常见的冷水性养殖鱼类。目前对金鳟全雌杂交鱼苗种的制备技术的研究尚未见有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种金鳟全雌杂交苗种培育方法，以克服现有技术的不足。本专利技术提供的金鳟全雌杂交苗种的培育方法，包括以下步骤I)用雄性激素诱导性成熟期的雌性硬头鳟亲鱼获得具有雄性功能的硬头鳟伪雄鱼；2)使金鳟亲鱼卵子与硬头鳟伪雄鱼精子受精；3)受精卵孵化。其中，步骤I)所述性成熟期的硬头鳟亲鱼为3龄以上，体重彡2. 5kg。 其中，步骤I)所述雄性激素诱导性成熟期的雌性硬头鳟亲鱼的方法为，将含雄性激素40-100mg/kg的鱼饲料投喂雌性硬头鳟亲鱼70-100d ;之后，改用不含雄性激素的鱼饲料投喂4-6个月，获得具有雄性功能的硬头鳟伪雄鱼。进ー步地，步骤I)所述雄性激素诱导性成熟期的雌性硬头鳟亲鱼的方法为，将含雄性激素40-50mg/kg的鱼饲料投喂雌性硬头鳟亲鱼90d ;之后，改用不含雄性激素的鱼饲料投喂5个月，获得具有雄性功能的硬头鳟伪雄鱼。其中，步骤I)的雄性激素为17 a甲基睾丸酮(17 a-methyltestosterone)。进ー步地，所述17 a甲基睾丸酮添加入饲料前，用浓度> 60%的酒精进行溶解，17a甲基睾丸酮与酒精的质量体积比为Img :f4ml。将溶解后的17a甲基睾丸酮溶液用清水稀释10倍后均匀喷洒于亲鱼饲料上，搅动，使混合均匀，备用。本专利技术提供的金鳟全雌杂交苗种的培育方法中，步骤2)所述硬头鳟伪雄鱼精子是通过以下方法获得的机械破碎伪雄鱼精巣，获得精液后，将精子激活液与伪雄鱼精液按照体积比20-30 1混合进行激活，所述精子激活液IL配方为NaCl 7. 60g, KCl 2. 98g，CaCl2 2H200. 37g, MgCl2 6H20 0. 31g, NaHCO3 0. 21g,加蒸馏水至 1000ml,调节 pH 值为8. 0-10. 0 ;激活条件为2-6°C激活3-4h。优选地，将精子激活液与伪雄鱼精液按照体积比25 1混合进行激活，所述精子激活液PH值为9. 0 ;激活条件为4°C激活3h。干法受精法，取金鳟雌鱼卵与激活后的硬头鳟伪雄鱼精液进行受精。本专利技术方法中，步骤3)所述孵化条件为受精卵在8-10°C养殖用水中孵化45-65d。本专利技术方法中，所述金鳟为红眼金鳟。 本专利技术提供了上述方法在金鳟全雌杂交苗种育种工作中的应用。本专利技术使用雄性激素诱导性成熟期的雌性硬头鳟亲鱼获得具有雄性功能的硬头鳟伪雄鱼；使金鳟亲鱼卵子与硬头鳟伪雄鱼精子受精，孵化，获得全雌杂交金鳟鱼苗种。实验检测发现，本专利技术方法制备的全雌杂交金鳟鱼孵化期间受精卵发眼率为83%以上，苗种孵化率达到90%以上，得到的鱼苗经检测，雌性率为100%，苗种金鳟率(体色为金黄色)达到91%以上，苗种培养30天增重率为114%以上，成活率达到98%以上。本专利技术提供的金鳟全雌杂交苗种培育方法与纯种金鳟交配产生的苗种相比，既保持金鱒率不变，又获得了具备杂交和全雌双重优势的金鳟苗种，且制苗时间短，仅9个月左右，大大缩短了养殖周期，降低了养殖成本，具有较好的经济效益和市场价值。具体实施例方式以下实施例进ー步说明本专利技术的内容，但不应理解为对本专利技术的限制。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。本专利技术的硬头鳟亲鱼和红眼金鳟亲鱼均为北京市水产科学研究所由北欧玛生物科技有限公司购买的发眼卵培育而成。17a甲基睾丸酮购自德国SIGMA公司，纯度98%以上。本专利技术使用的精子激活液IL 配方为 NaCl 7. 60g，KCl 2. 98g，CaCl2 2H20 0. 37g，MgCl2 6H20 0. 31g, NaHCO3 0. 21g，加蒸馏水至 1000ml。实施例I全雌杂交苗种培育方法(I)I、用纯度为65%的酒精溶解17 a甲基睾丸酮，17 a甲基睾丸酮与酒精的质量体积 比为Img :2ml，溶解后的甲基睾丸酮溶液用清水稀释10倍后，用喷壶均匀的喷于亲鱼饲料上，使饲料中17a甲基睾丸酮的含量为60mg/kg。反复搅动，使其混合均匀，在通风处阴干备用。2、挑选3龄以上，规格达到2. 6kg,性成熟的雌性硬头鳟亲鱼放入单独的养殖池中，投喂步骤I中已配好的含有17 a甲基睾丸酮的亲鱼饲料，按照常规的饲养方法喂养100d，之后改投正常的不含17 a甲基睾丸酮的亲鱼饲料继续饲喂4个月。在经过17 a本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种金鳟全雌杂交苗种的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：1）用雄性激素诱导性成熟期的雌性硬头鳟亲鱼获得具有雄性功能的硬头鳟伪雄鱼；2）使金鳟雌鱼亲鱼卵子与硬头鳟伪雄鱼精子受精；3）受精卵孵化。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐绍刚，
申请(专利权)人：北京市水产科学研究所，
类型：发明
国别省市：