本发明专利技术公开了一种siRNA的给药系统和制剂，它的活性成分是聚合物和阳离子脂质形成的包载siRNA的纳米颗粒，该聚合物可为聚乙二醇-聚乳酸或聚乙二醇-聚(乳酸-乙醇酸)的两嵌段或三嵌段共聚物；该阳离子脂质可为N，N-二羟乙基-N-甲基-N-2-(胆固醇氧羰基氨基)乙基溴化铵或(2，3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵。这种纳米颗粒和制剂能够将siRNA很好的输运到细胞中，并有效沉默靶基因的表达。并且，此siRNA给药体系通过配体或者抗体修饰后，在细胞水平和动物水平都能够更好的沉默靶基因。因而此给药体系在siRNA和类似小核酸药物的给药用于疾病治疗中具有良好的前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种聚乙二醇-聚乳酸或者聚乙二醇-聚(乳酸-乙醇酸)两嵌段/三嵌段共聚物(两亲性高分子聚合物)和阳离子脂质材料共同制备的小干扰RNA(SiRNA)的给药系统和制剂。
技术介绍
小干扰RNA具有特异性抑制致病基因表达的能力以及高效、多样化的特征，近年来已经在肝炎、艾滋病、老年性黄斑病变、禽流感以及癌症等大量疾病的治疗中显示出良好的应用前景。例如Calendo制药公司研发的基于RNA干扰的CALAA-Ol制剂经系统给药后在一期临床试验中显示出治疗癌症的效果。有理由相信，基于siRNA的RNA干扰疗法在不久的将来就可能用于临床治疗。然而，在以治疗人类疾病为目的的体内siRNA给药方面面临着巨大挑战。由于siRNA分子本身穿透细胞膜的能力极差，也不具备靶向功能，而且在生理环境中极不稳定，因此目前siRNA药物研发的瓶颈在于siRNA的给药系统和技术。如何增强siRNA在体内的稳定性和穿透细胞膜的能力，以及增强疾病治疗的细胞和组织靶向性等都是siRNA给药系统急切需要解决的问题。因此siRNA的体内给药系统也已成为发展和实施RNA干扰疗法的一个关键所在。目前用于siRNA给药系统构建的材料包括聚乙烯亚胺(PEI)、去了端肽的精制胶原、一些阳离子脂质体，和化学合成的各种阳离子高分子等。这些载体分子与siRNA溶液互混后通过电荷相互作用得到二者的复合物，从而实现传递siRNA的目的。这类给药系统面临难以放大规模的问题，重复性较差。除了通过电荷相互作用与siRNA形成复合物从而实现siRNA给药的系统和技术外，有部分研究报道了将siRNA包载在高分子中制备纳米尺度制剂的方法，来实现siRNA的体内给药。这类纳米颗粒一般利用聚乳酸、聚乙醇酸或者二者的共聚物来制备，不足之处在于siRNA的包封率非常低(低于30% )，载药量很低，难以满足临床应用的要求。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种核酸药物给药载体，具体涉及一种利用两亲性高分子聚合物和阳离子脂质材料共同制备的核酸药物的给药载体、载体制备方法和药物组合物。这一给药载体组合物具有极高的siRNA包封率，载药量也大为提高。本专利技术将siRNA加入到可降解两亲性高分子载体和阳离子脂质的溶液中，通过双乳化的方法将siRNA包埋在纳米颗粒中。加入的阳离子脂质将siRNA的包封率提高到90%以上。这种方法不但可以制备高效包载siRNA纳米颗粒，而且纳米颗粒能有效进入细胞，并从内涵体逃逸，从而有效沉默致病靶基因的表达，并在体内抑制乳腺癌的生长。本专利技术所述的核酸药物给药载体由两亲性高分子共聚物和阳离子脂质材料共同制备而成。所述两亲性高分子聚合物是指在一个大分子链上同时含有亲水性和疏水性链段。所述两亲性嵌段共聚物中的亲水性链段可以是聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺类、聚甲基丙烯酸氨基酯类、聚丙烯酸和聚甲基丙烯酸中的一种或两种以上形成的任意均聚物或共聚物。所述两亲性嵌段共聚物中的疏水性链段可以是聚乳酸、聚己内酯、聚乙交酯、聚氨基酸和聚磷腈中的一种或两种以上形成的任意均聚物或共聚物。在一种较佳的实施方式中，两亲性高分子共聚物为聚乙二醇-聚乳酸或聚乙二醇-聚(乳酸-乙醇酸)两嵌段/三嵌段共聚物，共聚物形式可以为PEG-PLA、PEG-PLGA、PLA-PEG-PLA、PLGA-PEG-PLGA。这种嵌段共聚物能够在水介质中自组装成胶束或纳米粒，相对疏水性的PLA或PLGA聚集成疏水性的核，PEG嵌段组装成亲水性的壳，具有稳定胶束、有效躲避生物体内质网系统的捕捉和蛋白质吸附的作用。阳离子脂质在此给药系统中的主要作用是通过静电相互作用提高核酸药物在载体中的载药量和包封率。在一较佳的实施方案中，阳离子脂质材料优选为铵盐型的两亲性脂质材料，例如可以为二甲基二(十八烷基)溴化铵盐(DDAB) >1,2- 二肉蘧酸基-3- 二甲基铵丙烧、1，2- 二油酸基-3- 二甲基铵丙烧(DOTAP) ,1,2- 二油酰基-3-三甲基铵丙烷甲基硫酸盐、I，2- 二棕榈酰基-3 —三甲基铵丙烷、1，2_ 二硬脂酰基-3-三甲基铵丙烷、N-(l-(2，3-二油酰氧基)丙基)_N，N，N-三甲基 氯化铵(DOTMA)、二肉豆蘧酰基氧基丙基二甲基羟基乙基溴化铵盐(DMRIE)、二油酰氧基丙基二甲基羟基乙基溴化铵(DORIE)、二甲基二(十二烷基)溴化铵、N-(a-三甲基铵基乙酰基)_ 二(十二烧基)-D-谷氨酸胺盐酸盐、N-(a_ 二甲基铵基乙酸基)-0,0’ -双-(1H, 1H,2H, 2H-全氟癸烧基)-L-谷氨酸胺盐酸盐、0, 0’ -二(十二烧酸基)-N-(a_ 二甲基铵基乙酰基)二乙醇胺盐酸盐、甲基烯丙基二(十二烷基)溴化铵、N-{p-(w-三甲基铵基丁基氧基)_苯甲酰基二(十二烧基)~L 一谷氨酰胺盐酸盐、9-(w- 二甲基铵基丁基)-3,6-双(十二烷酰基)咔唑溴化物、二甲基二(十八烷基)铵盐酸盐、N-W-三甲基铵基癸酰基-二(十六烷基)-D-谷氨酰胺溴化物、N- {p- (w-三甲基铵基己基氧基)-苯甲酰基} - 二(十四烷基)-L 一谷氨酰胺溴化物、P- (w-三甲基铵基癸基氧基)-p’ -辛氧基偶氮苯溴化物盐(MC-1-0810), p-{w-(b-羟基乙基)二甲基-铵基-癸基氧基}-P ’ -辛氧基偶氮苯溴化物盐(MC-3-0810)、0，0’，0”，_三(十二烷酰基)-N-(w-三甲基-铵基癸酰基)-三(羟基甲基)氨基甲烷澳化物盐(TC-1-12)，I，2- 二月桂基-甘油-3-乙基磷酸胆碱、I，2- 二肉豆蘧酰基-甘油-3-乙基磷酸胆碱、I，2- 二棕榈酰基-甘油-3-乙基磷酸胆碱、I，2- 二硬脂酰基-甘油-3-乙基磷酸胆碱、I，2- 二油酰基-甘油-3-乙基磷酸胆碱、I-棕榈酰基-2-油酰基-甘油-3-乙基磷酸胆碱等。在本专利技术的更佳的实施方案中，阳离子脂质优选为N，N-二羟乙基-N-甲基-N-2-(胆固醇氧羰基氨基)乙基溴化铵(记为BHEM-Chol)、(2，3- 二油氧基丙基)三甲基氯化铵(记为D0TAP)等。所述聚乙二醇单嵌段的数均分子量为550 10000g/mol，聚乳酸或聚(乳酸-乙醇酸)嵌段的数均分子量为4800 51000g/mol。所述聚(乳酸-乙醇酸)嵌段中丙交酯/乙交酯单体的聚合度比例可为75/25 50/50。所述阳离子脂质BHEM-Chol分子量为655. 5g/mol，所述阳离子脂质DOTAP分子量为698. 5g/mol,所述阳尚子脂质DOTMA分子量为670. 6g/mol。本专利技术基于这三种阳尚子脂质，而不限于这三种脂质，类似阳离子脂质均可用于制备本专利技术所述的核酸药物给药载体，实现本专利技术的目的。上述嵌段共聚物，可为PEG55tl-PLA28600、PEG2ooo—PLA125oo ^ PEG5000_PLA5000、PEGgggg-PLA25OOO'' PEGgggg-PLAg1Qgg-, PEG1Qggg-PLA15Qgg-, PEGjgggg-PLGAjggggfgg/gg) >PEG1Qggg-PLGAggggg (75/25)、PLAg3Qg-PEG1 gQO^LAgggg > PLA48Qg-PE本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种核酸转运用载体组合物，含有两亲性高分子聚合物和阳离子脂质。
【技术特征摘要】
1.一种核酸转运用载体组合物，含有两亲性高分子聚合物和阳离子脂质。2.根据权利要求I所述的核酸转运用载体组合物，其中阳离子脂质为铵盐型的阳离子脂质。3.根据权利要求I或2任一项所述的核酸转运用载体组合物，其特征在于两亲性高分子聚合物和阳离子脂质的含量范围为 两亲性高分子聚合物100重量份 阳离子脂质0-20重量份。4.根据权利要求3所述的核酸转运用载体组合物，其特征在于两亲性高分子聚合物和阳离子脂质的含量范围为 两亲性高分子聚合物100重量份 阳离子脂质0.001-10重量份。5.根据权利要求1-4任一项所述的核酸转运用载体组合物，其中阳离子脂质选自N，N-二羟乙基-N-甲基-N-2-(胆固醇氧羰基氨基)乙基溴化铵、(2，3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵、N-(I-(2，3- 二油酰氧基)丙基)_N，N，N-三甲基氯化铵中的至少一种。6.根据权利要求1-4任一项所述的核酸转运用载体组合物，其中两亲性高分子聚合物选自聚乙二醇-聚乳酸两嵌段或三嵌段共聚物或聚乙二醇-聚(乳酸乙醇酸)两嵌段或三嵌段共聚物中的至少一种。7.根据权利要求6所述的核酸转运用载体组合物，所述聚乙二醇嵌段分子量范围为550 10000。8.根据权利要求6所述的核酸转运用载体组合物，聚乳酸嵌段数均分子量范围为4800 51000g/mol。9.根据权利要求6所述的核酸转运用载体组合物，聚(乳酸乙醇酸)嵌段数均分子量范围为 10000 50000g/mol。10.根据权利要求1-9任一项所述的核酸转运用载体组合物，其特征在于所述组合物形成直径为50-250纳米的纳米颗粒。11.根据权利要求10所述的核酸转运用载体...
【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：苏州瑞博生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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