本发明专利技术公开了一种含金福菇草酸脱羧酶的干粉和菌粉的制备方法，涉及人体或动物体胃肠中草酸盐的降解领域，该方法包括以下步骤：以金福菇或其同属真菌为原料，采用液体发酵方式培养菌体，调节发酵液pH值到2.0~5.0，诱导生产草酸脱羧酶，收集发酵液与菌体后进行菌体粉碎，然后进行固液分离，分别得到含金福菇草酸脱羧酶的液体部分和固体部分，再分别干燥分离获得的液体部分与固体部分，即得到含金福菇草酸脱羧酶的干粉和菌粉。本发明专利技术制备的含金福菇草酸脱羧酶的干粉和菌粉可用于食品、饮料及饲料等去草酸加工，也可作为原料制备保健品或药品，适合口服，在胃肠中能够有效降解草酸及草酸盐，能预防或治疗尿草酸过多症及草酸钙结石。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及人体或动物体胃肠中草酸盐的降解领域，特别是涉及一种。
技术介绍
结石病每年给全球数以千万的人带来痛苦，并且导致上百亿美元的经济损失。草酸钙结石是最常见的结石，约占全部结石的 75%。人体中的草酸盐主要来源于两种途径从饮食中吸收和生理代谢产生。除极少数有原发性草酸病的病人外，正常人生理代谢产生的草酸盐一般在一定的范围内，变化不大，但从饮食中吸收的草酸盐的量却因人而异，草酸钙结石病人从饮食中吸收的草酸盐比正常人平均多50% (参见R. Holmes等，Urol. Res,32 :31广316，2004)。体内的草酸盐主要由尿液排出体外，尿液中草酸盐排除量超出正常值即为尿草酸盐过多症，其是衡量由于尿草酸盐过量产生的尿道、膀胱及肾草酸钙结石的一个重要指标。目前，肾结石的治疗方法包括体外冲击波破碎、微创手术或开放手术，这些方法不仅费用昂贵，还给肾脏带来创伤。结石复发率很高，对复发病人反复使用手术，会导致其肾功能衰竭。为了预防从饮食中吸收草酸盐，病人需要终生坚持每餐服用药品或食品添加剂，因而服用的药品或食品添加剂需无副作用。柠檬酸钾是唯一经临床试验证实能抑制结石生长的预防型药物，但病人需要长年每日口服r2克，由于服用量大，副作用强，许多人难以承受其副作用而不得不停止治疗。人们虽然已进行一系列的努力来降低这些结石病人从食品中吸收草酸盐，下面介绍从文献中检索到的各种可能方法I、口服微生物，例如多种芽孢杆菌和双歧杆菌的混合物制品，(参见申请号为00808182. 4的中国专利)。该方法中的微生物制剂临床效果不明显，因为这些微生物可以不用草酸盐而生存(参见 D. Goldfarb 等，Clin. J. Am. Soc. N印hrol，2 :745 749，2007)。2、口服稀土金属盐，从胃肠中吸收草酸盐(参见申请号为02808557. 4的中国专利)。然而，长期服用，可能有毒副作用。3、将草酸氧化酶(参见申请号为US2006/023115的PCT申请)或草酸脱羧酶(参见申请号为US11/833082的美国专利)制成蛋白晶体，再用戊二醛交联提高其稳定性，然后将这些晶体制成口服药剂，用于降解胃肠中的草酸盐。然而，长期服用，可能有毒副作用。4、口服一种肠道中寄生的以草酸盐为能源物质的活细菌制剂(参见申请号为US66/99469的美国专利)。该方法中的微生物制剂非常难以制备，成本极高，效果未知。5、草酸脱羧酶的结构、反应机理及其在自然中的分布已有详细叙述(参见D. Svedruzic 等，Arch. Biochem. Biophys. , 433,176 192, 2005),草酸脱羧酶(EC 4. I.I.2)催化的化学反应式为HOOCTCOOH — C02 + HC00H。但目前所有文献报道的草酸脱羧酶只在酸性pH下有活力，因为肠道中的pH在6.(T7. 5之间，属于中性pH，因此草酸脱羧酶不适合在肠道中降解草酸盐。目前还没有找到一种在肠道中降解草酸盐的简单有效的办法。对于尿草酸盐吸收过多的人群，尤其是那些反复生长结石的病人而言，亟需一种安全、有效、无创伤且价廉的方法来降低其食入的草酸盐，以达到预防和治疗结石的目的。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服上述
技术介绍
的不足，提供一种，其制备的金福菇草酸脱羧酶菌粉适合口服，与传统手术方式相比无创伤，且在胃肠中能够有效降解草酸及草酸盐，减少人体或动物体从饮食制品中吸收草酸盐，能够预防或治疗尿草酸过多症及草酸钙结石；安全、无毒副作用，可长期服用；制备简便，成本低。本专利技术提供的，包括以下步骤A、以金福菇或其同属真菌为原料，采用液体发酵方式培养菌体，然后调节发酵液PH值到2.(T5. 0之间，诱导生产草酸脱羧酶，收集发酵液与菌体；B、粉碎收集的发酵液和菌体后进行固液分离，分别得到含金福菇草酸脱羧酶的液体部分和固体部分，再分别干燥分离获得的液体部分与固体部分，即得到含金福菇草酸脱羧酶的干粉和菌粉。在上述技术方案中，步骤B中得到的含金福菇草酸脱羧酶的干粉为粗酶干粉，通过蛋白质纯化的方法进一步纯化，即制成纯酶干粉。在上述技术方案中，步骤A中所述液体发酵的过程如下液体培养基成分为酵母粉，7 g/L;大豆蛋白胨，6 g/L ；KH2P04,2 g/L ;MgS04 7 H20,0. 5 g/L ；CaCl2,0. 2 g/L ;葡萄糖，10 g/L ;蔗糖，20 g/L ;在121°C对液体培养基灭菌30分钟后，培养金福菇菌丝体，培养温度为25°C，摇瓶装量为10%，转速为15(T200转/分钟，或发酵罐培养，培养温度为25°C，转速为20(T300转/分钟；接种量为1(T30%，培养3 8天后，将发酵液pH值调到2. 5^4. 5，诱导草酸脱羧酶的生产，并在培养液中加入含锰的物质；诱导生产5 15天后，收集菌体与发酵液。在上述技术方案中，步骤A中调节发酵液pH值到pH4. 5 5. O、pH4. 0^4. 5、pH3. 5 4. O、pH3. 2 3. 5、pH3. 0 3. 2、pH2. 8 3. 0、pH2. 5 2. 8 或者 pH2. 0 2. 5。在上述技术方案中，所述含锰的物质包括MnCl2、MnSO4、KMnO4和MnO2。在上述技术方案中，当加入的含锰的物质为MnCl2时，加入的MnCl2的浓度为0. OOflOO毫摩尔浓度。在上述技术方案中，所述菌体和发酵液中均含有草酸脱羧酶，每克菌体含1(T1000单位草酸脱羧酶，每升发酵液含5010000单位草酸脱羧酶。在上述技术方案中，步骤B中采用喷雾干燥法或冷冻干燥法进行干燥。在上述技术方案中，所述喷雾干燥法的过程如下对于发酵液，将发酵液经过膜浓缩5 20倍后，米用喷雾干燥机进行干燥，喷雾干燥机的入口温度为140 220°C,出口温度为8(T105°C，其它参数根据喷雾干燥机的尺寸进行调节，酶活力的得率在80、5%;对于 菌体，将菌体经过均浆机打碎后，再采用喷雾干燥机进行干燥，喷雾干燥机的入口温度为14(T240°C，出口温度为8(Tll(TC，其它参数根据喷雾干燥机的尺寸进行调节，酶活力的得率在80 95%。在上述技术方案中，所述冷冻干燥法的过程如下将发酵液浓缩后冻干；将菌体粉碎后冻干。与现有技术相比，本专利技术的优点如下(I)本专利技术制备的金福燕(Tricholoma Lobayensc Heim)草酸脱羧酶不仅在胃的酸性环境中(PH2飞)有活力，而且在肠的广阔的中性pH环境(pH6. (T7. 5 )中稳定并且有高活力，对含草酸脱羧酶的食用菌金福燕(Tricholoma Lobayensc Heim)菌粉而言,草酸脱羧酶绝大多数包在微小菌粉中，受到保护而不被胃肠中蛋白酶降解，因此非常适合口服，与传统手术方式相比无创伤，且用该酶或含该酶的菌粉作为活性组分，来制备或加工的食品、饲料、食品添加剂、饲料添加剂、保健品或药品，在胃肠中能够有效降解草酸及草酸盐，减少人体或动物体从饮食制品中吸收草酸盐，能够预防或治疗尿草酸过多症及草酸钙结石。 (2)本专利技术的原料来自食用菌，无毒副作用，比较安全，可长期服用。(3)本专利技术的制备简便，成本低，能够降低尿草酸过多症及草酸钙结石患者的开销。具体实施例方式下面结合具体实施例对本本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种含金福菇草酸脱羧酶的干粉和菌粉的制备方法，其特征在于包括以下步骤 A、以金福菇或其同属真菌为原料，采用液体发酵方式培养菌体，然后调节发酵液PH值到2. (T5. O之间，诱导生产草酸脱羧酶，收集发酵液与菌体； B、粉碎收集的发酵液和菌体后进行固液分离，分别得到含金福菇草酸脱羧酶的液体部分和固体部分，再分别干燥分离获得的液体部分与固体部分，即得到含金福菇草酸脱羧酶的干粉和菌粉。2.如权利要求I所述的含金福菇草酸脱羧酶的干粉和菌粉的制备方法，其特征在于步骤B中得到的含金福菇草酸脱羧酶的干粉为粗酶干粉，通过蛋白质纯化的方法进一步纯化，即制成纯酶干粉。3.如权利要求I所述的含金福菇草酸脱羧酶的干粉和菌粉的制备方法，其特征在于步骤A中所述液体发酵的过程如下液体培养基成分为酵母粉，7 g/L;大豆蛋白胨，6 g/L ；KH2PO4, 2 g/L ；MgS04*7*H20,0. 5 g/L ；CaCl2,0. 2 g/L ;葡萄糖，10 g/L;蔗糖，20 g/L ;在121°C对液体培养基灭菌30分钟后，培养金福菇菌丝体，培养温度为25°C，摇瓶装量为10%，转速为15(T200转/分钟，或发酵罐培养，培养温度为25°C，转速为20(T300转/分钟；接种量为10 30%，培养31天后，将发酵液pH值调到2. (T5. 0，诱导草酸脱羧酶的生产，并在培养液中加入含锰的物质；诱导生产5 15天后，收集菌体与发酵液。4.如权利要求3所述的含金福菇草酸脱羧酶的干粉和菌粉的制备方法，其特征在于步骤 A 中调节发酵液 pH 值到 pH4. 5 5. O、pH4. 0 4. 5、pH...
【专利技术属性】
技术研发人员：李青山，阮荣，刘海峰，宋保平，陈先桥，
申请(专利权)人：武汉康复得生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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