天然普鲁兰多糖纳米药物载体及其制备方法技术

本发明专利技术所述天然普鲁兰多糖纳米药物载体，由羧甲基化普鲁兰和肼缩合反应而成，所述羧甲基化普鲁兰多糖的羧基与肼的氨基的缩合反应度为60～90％。该载体载药后在水中自组装形成纳米粒子，其粒径为60nm～200nm。其制备方法的工艺步骤如下：(1)制备羧甲基化普鲁兰糖；(2)用去离子水将羧甲基化普鲁兰糖配制成浓度为0.01～0.10g/ml的溶液，用去离子水将肼配制成浓度为0.1～0.5g/ml的溶液，在搅拌下于室温、常压将羧甲基化普鲁兰糖水溶液加入到肼溶液中，搅拌均匀后，加入浓度为0.5～1g/ml的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液，在搅拌下反应2～6小时，反应时间届满后，用去离子水透析除去小分子杂质，冷冻干燥，即得到天然普鲁兰多糖纳米药物载体。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物载体领域，特别涉及。
技术介绍
药物载体是一种药物传送系统，智能型纳米药物载体有利于实现靶向给药，征服癌症等疑难病症。肿瘤组织由于其组织的特点，可使纳米粒子药物传送系统经EPR现象被动集中于肿瘤部位，以内吞的形式摄入胞内。在胞内的初级溶酶体及次级溶酶体内，由于其内部PH值低于人体血液循环系统的pH值，这种pH的变化使纳米粒子药物传送系统所载药物与其在酸性条件下分离，从而实现肿瘤的环境敏感型被动靶向治疗。因此，纳米粒子药物载体的研究一直倍受关注。Ludianxiang等人公开了一种具有pH敏感性的纳米药物载体,所述纳米药物载体由羧甲基化的普鲁兰多糖和水合肼缩合反应而成，虽然具有良好的生物相容性，且对心脏毒性小，但由于羧甲基化普鲁兰多糖的羧基与水合肼的氨基的缩合反应度仅为10%左右，因而载药量偏低(只有3% -4% )。Rong Liu等人研究了一种具有pH敏感性的聚乙二醇-聚(L-组氨酸)_聚(L-丙交酯)三嵌段共聚物纳米药物传递系统，聚(L-组氨酸)具有pH响应性，所形成的胶束最大载药量达到了 14. 7% ο但载药纳米粒径在pH = 7. 4时达到803. 6nm,pH = 5. O时达到1140nm,粒径过大, 进入体内很难通过EPR效应进入肿瘤部位。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种新型的天然普鲁兰多糖纳米药物载体及制备方法，所述纳米药物载体不仅能提高载药量，而且能对肝脏靶向性给药。本专利技术所述天然普鲁兰多糖纳米药物载体，由羧甲基化普鲁兰多糖与肼缩合反应而成，结构式如下O O H Il Il H 或 HN—N—C —C —N—NH,OOH Il H2 H2 Il H 或HN—N—C—C -C -C-N-NH2OOH Il H2 H2 H2 H2 Il H 或 HN-N—C-C -C -C -C -C-N-NH2η 彡 I ;所述羧甲基化普鲁兰多糖的羧基与肼的氨基的缩合反应度为60 90%。从上述结构式可以看出，本专利技术所述天然普鲁兰多糖纳米药物载体以天然普鲁兰多糖作为主链(亲水链)，在主链上连接肼，通过肼作为连接臂连接阿霉素等抗肿瘤药物， 在水中自组装形成纳米粒子，其粒径为60nm 200nm。肼与阿霉素等抗肿瘤药物形成的腙键具有PH敏感性，在酸性(pH = I 6)环境中腙键将断裂，释放出药物。本专利技术所述天然普鲁兰多糖纳米药物载体的载药操作(以载阿霉素为例)将所述普鲁兰糖纳米药物载体用去离子水配制成浓度为O. I O. 5g/ml的溶液， 然后加入盐酸阿霉素，所述盐酸阿霉素的加入量以混合液中普鲁兰糖药物载体与盐酸阿霉素的质量比达到I : O. I O. 8为限；在搅拌下于常压、室温避光反应至少12小时，反应时间届满后，在乙醇中沉淀，离心收集沉淀，反复用乙醇震荡冲洗以除去未反应的盐酸阿霉素，将离心所得沉淀真空抽干，即得到载有阿霉素的纳米药物载体。本专利技术所述天然普鲁兰多糖纳米药物载体的制备方法，工艺步骤如下(I)将异丙醇加入天然普鲁兰多糖水溶液中，再加入氢氧化钠水溶液，在常压、 50 80°C下搅拌，直至形成透明溶液；所述天然普鲁兰多糖水溶液的浓度为O. I O. 5g/ ml，所述异丙醇与天然普鲁兰多糖水溶液体积比为I : 10 7/3 ;所述氢氧化钠水溶液的浓度为O. I O. 5g/ml，氢氧化钠水溶液的量以混合溶液中天然普鲁兰多糖的葡萄糖单元与氢氧化钠的摩尔比=I I I. 5为限；(2)将氯乙酸钠水溶液和异丙醇同时加入到步骤(I)所制备的混合溶液中，在搅拌下于常压、50 80°C反应2 5小时；所述氯乙酸钠水溶液的浓度为O. 5 I. Og/ml，所述氯乙酸钠水溶液的量以混合溶液中天然普鲁兰多糖的葡萄糖单元与氯乙酸钠的摩尔比 =I O. 5 O. 75为限，所述异丙醇与氯乙酸钠水溶液的体积比为I : 10 7/3 ;(3)在步骤(2)所得到的反应液中同时加入氯乙酸钠水溶液和异丙醇，在搅拌下于常压、50 80°C反应2 5小时，所述氯乙酸钠水溶液的浓度和加入量与步骤(2)相同， 所述异丙醇的加入量与步骤(2)相同；(4)将步骤(3)形成的含反应产物的混合液用盐酸调pH值至2 5，然后用去离子水透析除去小分子杂质，冷冻干燥，即得到羧甲基化普鲁兰多糖；(5)用去离子水将步骤(4)得到的羧甲基化普鲁兰多糖配制成浓度为O. 01 O. 10g/ml的溶液,用去离子水将肼配制成浓度为O. I O. 5g/ml的溶液,在搅拌下于室温、 常压将羧甲基化普鲁兰多糖水溶液加入到肼的水溶液中，搅拌均匀后，加入浓度为O. 5 lg/ml的I- (3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液，在搅拌下反应2 6小时， 反应时间届满后，用去离子水透析除去小分子杂质，冷冻干燥，即得到天然普鲁兰多糖纳米药物载体；所述羧甲基化普鲁兰多糖水溶液与肼的水溶液的量以反应液中羧甲基化普鲁兰多糖的羧基与肼的摩尔比达到I : 10 30为限，所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液的量以反应液中羧甲基化普鲁兰多糖的羧基与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的摩尔比达到I : I I. 2为限。上述方法中，所述肼为水合肼、草酸二酰肼、丁二酸二酰肼、己二酸二酰肼中的一种。本专利技术具有以下有益效果I、采用本专利技术所述方法制备的天然普鲁兰多糖纳米药物载体，所述羧甲基化普鲁兰多糖的羧基与肼的氨基的缩合反应度为60 90%，因而大大提高了载药量，最大载药量接近50% (见实施例4)。2、由于本专利技术所述天然普鲁兰多糖纳米药物载体以天然多糖普鲁兰作为主链，该主链可以跟肝癌细胞的去唾液酸糖蛋白受体相结合，因而可实现对肝脏的靶向性给药。3、用本专利技术所述方法制备的天然普鲁兰多糖纳米药物载体，载药后形成的纳米粒子粒度均匀，分散好，不团聚，有利于提高治疗效果。4、本专利技术所述方法原料易于获取，操作简单，使用的设备为常规设备，便于工业化生产。附图说明图I是红外谱图，其中，A为羧甲基化普鲁兰糖的红外谱图，B为本专利技术所述天然普鲁兰多糖纳米药物载体的红外谱图，C为本专利技术所述天然普鲁兰多糖纳米药物载体载药后的红外谱图。图2是核磁谱图，其中，I为本专利技术所述天然普鲁兰多糖纳米药物载体的核磁谱图，2为本专利技术所述天然普鲁兰多糖纳米药物载体载药后的核磁谱图，3为盐酸阿霉素的核磁谱图。图3是本专利技术所述天然普鲁兰多糖纳米药物载体载药后的粒径分布图。图4是本专利技术所述天然普鲁兰多糖纳米药物载体载药后的透射电镜图。图5是本专利技术所述天然普鲁兰多糖纳米药物载体所载阿霉素的药物释放曲线图。图6是盐酸阿霉素与载有阿霉素的本专利技术所述天然普鲁兰多糖纳米药物载体的体外细胞杀伤效果图，其中，图6(1)为对人肝癌细胞杀伤效果实验结果图(培养24小时)， 图6 (2)为对人肝癌细胞杀伤效果实验结果图(培养48小时)，图6 (3)为对人宫颈癌细胞杀伤效果实验结果图(培养24小时)，图6(4)为对人宫颈癌细胞杀伤效果实验结果图(培养48小时)，图6(5)为对正常细胞L929(小鼠成纤维细胞)杀伤效果实验结果图(培养 24小时)，图6(6)为对正常细胞L929(小鼠成纤维细胞)杀伤效果实验结果图(培养48 小时)。具体实施方式下面本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：樊渝江，李桦楠，边少荃，张兴栋，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：