本发明专利技术部分涉及植物育种和除草剂耐受植物。本发明专利技术包括玉米植物中的新颖aad-1转化事件，所述事件包含如本文中所述的多核苷酸序列，其插入玉米细胞的基因组内的特定位点。在一些实施方案中，所述事件/多核苷酸序列可与其他性状包括，例如其他除草剂耐受基因和/或昆虫抑制性蛋白相“层叠”。此外，本主题发明专利技术提供了用于检测(例如玉米粒的)样品中本主题事件的存在的测定法。所述测定法可基于插入玉米基因组的重组构建体的DNA序列，和基于所述插入位点侧翼的基因组序列。亦提供了可用于进行所述测定的试剂盒和条件。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】AAD-1事件DAS-40278-9、相关的转基因玉米品系及其事件特异性鉴定
技术介绍
aad-Ι基因(最初来自Sphingobium herbicidovorans)编码芳氧基链烷酸酯双加氧酶(aryloxyalkanoate dioxygenase，AAD-1)蛋白。该性状赋予针对2，4_ 二氯苯氧基乙酸和芳氧基苯氧基丙酸酯(一般称作“fop”除草剂，如喹禾灵(quizalofop))除草剂的耐受性，并可在植物转化过程中和育种苗圃中用作选择性标记。aad-Ι基因自身，首先在WO 2005/107437(亦参见US 2009-0093366)中公开其涉及除草剂耐受性。植物中异源或外源基因的表达受外源基因插入染色体的位置影响。这可能由于例如染色质结构(例如异染色质)或转录调节元件(例如增强子)与整合位点的靠近程度 (Weising等，Ann. Rev. Genet 22 =421-477,1988)。相同类型的转基因植物(或其他生物) 中的相同基因可在不同事件的表达水平中呈现广泛的差异。在表达的空间或时间样式上也可能存在差异。举例而言，在多种植物组织中转基因的相对表达的差异可能不对应于因导入的基因构建体中存在的转录调节元件而期待的样式。因此，常常构建并筛选大量的事件以对于给定目的鉴定表达导入的感兴趣的基因至令人满意的程度的事件。对于商业目的，通常产生成百上千的不同事件，并就具有所需转基因表达水平和样式的单个事件对这些事件进行筛选。具有所需的转基因表达的样式和/ 或水平的事件可用于将所述转基因通过使用常规育种方法的有性异型杂交(outcross)而渐渗入其他遗传背景。此类杂交的后代保持起始转化体的转基因表达特征。该策略在多种良好适应于当地生长条件的品种中用于确保可靠的基因表达。美国专利申请20020120964 Al 和 20040009504 涉及棉花事件 PV-GHGT07 (1445)， 及其组合物和检测方法。WO 02/100163涉及棉花事件M0NI5985，及其组合物和检测方法。 WO 2004/011601涉及棉花事件M0N863，及其组合物和检测方法。WO 2004/072235涉及棉花事件MON 88913，及其组合物和检测方法。WO 2006/098952 涉及玉米事件 3272。WO 2007/142840 涉及玉米事件 MIR162。美国专利号7，179，965涉及具有cry IF事件和cry IAc事件的棉花。具有本文中公开的特定事件的AAD-I玉米之前并未公开。
技术实现思路
本专利技术涉及命名为DAS-40278_9(具有保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)的登录号PTA-10244的种子)的AAD-I玉米事件，及由其衍生的后代。本专利技术的其他方面包括玉米事件DAS-40278-9的后代和种子和植物的可再生(regenerable)部分或谷粒和种子、 后代植物，以及从任何上述所制备食物或饲料产品。本专利技术还包括玉米事件DAS-40278-9 的植物部分，其包括但不限于花粉、胚珠、花、茎(shoots)、根和叶，以及营养细胞、花粉细胞和卵细胞的细胞核。本专利技术进一步涉及具有对苯氧基植物生长素性(phenoxy auxinic)和 /或芳氧基链烷酸酯除草剂具有耐受性的玉米植物，玉米事件DAS-40278-9的新颖遗传组合物，和包含玉米事件DAS-40278-9的玉米植物的农艺学表现(agronomic performance)方面。 本专利技术部分涉及植物育种和除草剂耐受性植物。本专利技术包括玉米植物中的新颖 aad-Ι转化事件，其包含如本文中所述的多核苷酸序列插入玉米细胞的基因组内的特异性位点。 在一些实施方案中，所述事件/多核苷酸序列可与其他性状“层叠”，包括，例如其他除草剂耐受性基因和/或昆虫抑制性蛋白。然而，本主题专利技术包括具有如本文中所述的单一事件的植物。其他性状可通过含有玉米事件DAS-40278-9的转基因植物的植物育种、重新转化，或通过藉由同源重组的靶向整合添加新性状来层叠入植物基因组。其他实施方案包括切出包含玉米事件DAS-40278-9的多核苷酸序列，包括例如， pat基因表达盒。当切出多核苷酸序列之后，可将修饰的事件重新靶向特定染色体位点，其中其他多核苷酸序列与玉米事件DAS-40278-9层叠。在一个实施方案中，本专利技术涵盖了位于在染色体2上在2008 DAS玉米连锁图上大约 20cM 处在 SSR 标志物 UMCU65(参见 SEQ ID N0:30 和 SEQ ID NO 31)和 MMC0111(参见 SEQ ID N0:32和SEQ ID NO 33)之间的大约20cM处的玉米染色体靶位点，其中所述靶位点包含异源核酸。在另一个实施方案中，如本领域技术人员会理解，本专利技术涵盖包含在如本文中所述的SEQ ID NO : 及其残基中定义或由如本文中所述的SEQ ID NO : 及其残基定义的位置的玉米染色体靶位点。在一个实施方案中，本专利技术涵盖了制备转基因玉米植物的方法，包括将异源核酸插入2008DAS玉米连锁图上大约20cM处的SSR标志物UMC1265 (参见SEQ ID NO 30和SEQ ID NO 31)和 MMC0111 (参见 SEQ ID N0:32 禾口 SEQ ID NO :33)之间的大约 20cM 处的位置。 还在另一个实施方案中，插入的异源核酸的5’侧为对于SEQ ID NO : 如本文中所定义的 5’侧翼序列的全部或部分，且3’侧为对于SEQ ID NO 29如本文中所定义的3’侧翼序列的全部或部分。此外，本专利技术提供了用于检测样品(例如玉米粒)中本主题事件的存在的测定法。 所述测定法可基于重组构建体的DNA序列插入玉米基因组，和基于在插入位点侧翼的基因组序列。还提供了可用于进行所述测定法的试剂盒和条件。因此，本主题专利技术部分涉及全部AAD-I插入及其边界区(在转基因玉米品系中) 的DNA序列的克隆和分析。这些序列是独特的。基于这些插入和边界序列，生成了事件特异性引物。PCR分析阐明了可通过对用这些事件特异性引物组生成的PCR扩增子的分析来鉴定这些事件。因此，这些和其他相关方法可用于独特地鉴定包含本主题专利技术的事件的玉米品系。附图说明图1显示pDAS1740的质粒图。图2显示对于DAS-40278-9 (pDAS1740)的插入的组分。图3显示对于DAS-40278-9 (pDAS1740)的插入的限制图和组分。图4显示对于DAS-40278-9的DNA插入和边界的扩增子、引物和克隆策略。图5图示相对于DAS-40278-9的插入和边界的引物位置。图6图示DAS-40278-9的连接区和插入。图7是实施例7中提及的育种概略。序列简述SEQ ID NO 1-28为本文中所述的引物。SEQ ID NO 29提供了对于本主题事件DAS-40278-9的插入和侧翼序列。SEQ ID NO :30-33为用于实施例4中所述的侧翼标志物的引物。具体实施例方式本专利技术部分涉及植物育种和除草剂耐受性植物。本专利技术包括玉米植物(玉米)的新颖转化事件，其包含如本文中所述的本主题aad-Ι多核苷酸序列插入玉米细胞的基因组内的特异性位点。在一些实施方案中，所述多核苷酸序列可本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：YC崔，J布赖恩，D莫姆，G吉尔斯，T赖特，J汉米尔顿，N阿诺德，N瓦诺普多普，T凯泽，N周，
申请(专利权)人：陶氏益农公司，
类型：发明
国别省市：
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