悬浮细胞染色装置制造方法及图纸

本实用新型专利技术公开了一种悬浮细胞染色装置，该装置由套管(1)、推杆(2)、柱塞密封垫(3)、截留膜(4)组成，柱塞密封垫(3)位于套管(1)腔内中上部，截留膜(4)位于套管(1)腔内下部，套管(1)的管壁上设置有膜上开口(5)和膜下开口(6)。本装置用于对悬浮细胞染色，可以有效克服现有细胞染色方法失败率高，准确性和重复性差、耗时长等不足，具有成功率高、准确性和重复性好、耗时短等优点。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术属于免疫学技术和生物学
，涉及细胞染色技术，具体涉及悬浮细胞染色装置。
技术介绍
细胞学检测为细胞生物学最常用技术。悬浮细胞免疫学染色检测方法一直使用离心技术洗涤细胞。其步骤为获得单个悬浮细胞；固定细胞或不固定细胞；加入抗体(或其它可与细胞标志物结合的物质)；离心方式洗去未结合的抗体；加入显色物质；离心方式洗去显色物质；检测染色情况。根据加入的抗体或者抗抗体等等各种检测方式方法，基本为重复上述操作步骤，完成细胞免疫染色，最终检测细胞标志物。常规方法检测细胞对于细胞膜标志物的检测尚勉强可实施，但是，检测细胞浆，细胞核等细胞内标志物时候非常困难。因为检测需要打开细胞膜。细胞膜被打通后，细胞渗透压改变，导致细胞难以通过离心方式回收。细胞染色后洗涤未结合的抗体时，由于细胞渗透压改变，离心后细胞不能被紧密的压缩在试管底部，移去上清时候细胞同时被移去。大多数情况是完成细胞染色步骤后大部分细胞丢失，实验结果不准确或者难以完成实验。因此， 以往基于离心方式的悬浮细胞免疫染色操作非常困难。费时费力且结果难以保障。细胞标志检测越来越广泛地进入应用。细胞染色方法的操作困难严重阻碍了流式细胞仪等细胞检测设备的应用。
技术实现思路
本技术的目的是提供一种悬浮细胞染色装置，以克服当前细胞学检测免疫反应使用离心方式洗涤细胞方法的缺陷，使得悬浮细胞免疫反应能够快速操作完成，该装置使悬浮细胞免疫反应可以实施并具有检测准确性高、重复性好、客观性强、操作方便快速特点ο实现本技术的具体方案是本技术提供的这种悬浮细胞染色装置，由套管1、推杆2、柱塞密封垫3、截留膜4组成，套管1为中空圆管状结构，柱塞密封垫3为圆形片状结构，其位于套管1腔内中上部，柱塞密封垫3的外周与套管1的管腔内壁呈可滑动的密封配合，推杆2为长杆状结构， 其前端与柱塞密封垫3的上部相连接，与柱塞密封垫3成为一体，截留膜4位于套管1腔内下部，将套管1的内腔分为膜上腔和膜下腔两部分，在截留膜4上方的套管1的管壁上靠近截留膜4处设置有供注入和排出溶液用的膜上开口 5，在截留膜4下方的套管1的管壁上设置有供注入和排出溶液用的膜下开口 6。膜下开口 6可以设置在截留膜4下方的套管1的侧面管壁上，也可以设置在截留膜4下方的套管1的底部管壁上；膜上开口 5和膜下开口 6上可以设置有阀门8、9，所设置的阀门可以是单通阀门，也可以是多通阀门；推杆2的后端可设置一个便于操作者把握的推杆手柄7;截留膜4可以由尼龙膜构成，也可以由陶瓷膜构成，用以截留细胞或亚细胞结构等相对较大物质，允许抗体等相对较小物质穿过，截留膜4的穿过孔径为0. 1 μ m至 50 μ m,优选0. 45 μ m ；套管1、推杆2和推杆手柄7可由塑料或不锈钢制成，柱塞密封垫(3) 可由橡胶制成。本技术提供的悬浮细胞染色装置可以多个组合使用，形成组合式悬浮细胞染色装置，以便同时对较多细胞进行染色。本技术提供的这种组合式悬浮细胞染色装置由并行排列的两个或两个以上的上述的悬浮细胞染色装置和一个由中空管状结构构成的连通管10组成，每个悬浮细胞染色装置的膜下开口 6与连通管10相连通，连通管10的两端设置有供注入和排出溶液用的连通管开口 11，在连通管10的两端的连通管开口 11上可设置有阀门，在连通管10—端的连通管开口与设置在该连通管开口上的阀门之间可以设置有分流接头12。本技术装置用于对悬浮细胞染色，细胞洗涤过程采用压力将需要分离的抗体和液体穿流过截留膜4，细胞或亚细胞结构被截留膜4截留，完成细胞与各类染色物质的洗涤分离过程。截留膜4可截留细胞、亚细胞结构等相对较大物质，允许抗体等相对较小物质穿过。推杆2和柱塞密封垫3为一体结构，可由手动或机械电动控制，在套管1中进行活塞运动。柱塞密封垫3与套管1形成密封配合，推杆2和柱塞密封垫3向膜方向运动时，将能将截留膜4上的液体通过截留膜4压出，细胞、亚细胞结构等相对较大物质不能通过膜而被截留。套管1上设置有二个注入和排出溶液的开口，即膜上开口 5和膜下开口 6，膜上开口 5和膜下开口 6可连接阀门或与液体分流接头连接后再连接阀门，以便于不同溶液的注入或排出，阀门可选不同形式，如多通道或电动，可实现自动化，阀门上可连接不同形式的泵。本技术提供的悬浮细胞染色装置使用时可按以下方法操作1.加入细胞经膜上开口 5向套管1中的截留膜4上部的腔体中注入固定于70% 乙醇中的待染色的悬浮细胞，注入方式可用压力泵，如蠕动泵、柱塞泵或用注射器等方式注入，注入完后将膜上开口 5关闭；2.洗涤细胞a.将推杆O)向下推压使柱塞密封垫(3)向截留膜4方向加压移动，使截留膜4 上部腔体中的乙醇通过截留膜4后经膜下开口 6排出，排出后将膜下开口 6关闭，此时待染色的细胞被截留在截留膜4的上面；b.用蠕动泵将洗涤溶液由膜下开口 6注入，同时使推杆2及柱塞密封垫3向远离截留膜4的方向移动，此时洗涤溶液通过截留膜4被注入套管1的截留膜4上部的腔体中。 不同染色方法洗涤溶液各不相同，同一染色方法也可使用不同的洗涤溶液，如免疫荧光染色实验常用无Ca+Mg+Hanks液或PBS溶液，酶免疫染色使用PBST溶液；c.使推杆2及柱塞密封垫3向截留膜4方向加压移动，使截留膜4上部腔体中的洗涤溶液通过截留膜4后经膜下开口 6排出，此时经洗涤的细胞被截留在截留膜4的上面；重复上述步骤2中的分步骤c，重复7-8次。3.加入染色物质将染色物质如标记抗体、抗抗体、酶、酶底物、生物染料、化学染料等经膜上开口 5向套管1中的截留膜4上部的腔体中注入，可利用压力泵将染色物质经膜上开口 5加入，注入完后将膜上开口 5关闭，放置适当时间以便免疫反应或染色。4.洗涤细胞操作同上述步骤2中的分步骤c，重复操作上述步骤2中的分步骤c 4-6次，以洗涤未结合的抗体或染色物质。5.收集染色后的细胞打开膜上开口 5，用蠕动泵将洗涤溶液由膜下开口 6注入， 同时从膜上开口 5收集含有被染色细胞的流出液，此时即完成细胞染色。本技术适用于医学和生物
细胞是医学和生物
最重要的研究和应用对象。细胞染色，特别免疫染色(如免疫荧光染色、酶免疫染色)是细胞分析常用手段。而采用现有技术对悬浮细胞进行染色因操作困难而导致实验或检测失败率高的问题一直未能解决。本技术悬浮细胞染色装置克服了上述困难。本技术装置可有效保障悬浮细胞染色的成功，而传统离心方法染色常常因发生细胞丢失而以失败告终。本技术装置细胞效染色的准确性高、重复性好和客观强，不受人为因素干扰，并使所需的染色时间大为缩短传统离心方法操作时间较长，一个标准的细胞抗体、抗抗体染色程序需要3 小时至4小时，而本技术装置只需要1. 5小时。本技术具有的有益效果是(1)保障细胞免疫染色的成功细胞固定后，由于细胞膜被打通，传统离心方式操作时细胞不能被离心力紧密地压缩到离心管底部，造成移除上清废液时候细胞同时被移除，反复多次的细胞洗涤导致大量细胞丢失，实验以失败告终。(2)提高免疫反应染色或其它染色的准确性、重复性和客观性本技术可以实现自动化操作，克服因不同人员操作产生的实验误差。使得悬浮细胞染色实现自动化、标准化、 快捷化。(3)节省时间与设备传统本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：封江南，
申请(专利权)人：封江南，
类型：实用新型
国别省市：