一种强肝药物的检测方法技术

本发明专利技术提供一种强肝药物的检测方法，所述强肝药物由茵陈、板蓝根、当归、白芍、丹参、郁金、黄芪、党参、泽泻、黄精、地黄、山药、山楂、秦艽、甘草、六神曲组成，所述检测方法包括采用高效液相色谱法检测所述强肝药物中的芍药苷、龙胆苦苷和丹酚酸B，条件包括：色谱柱为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；流动相包括：流动相A为乙腈，流动相B为酸性水溶液，进行梯度洗脱；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：210nm～400nm；理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于6000。采用本发明专利技术的检测方法，可以同时检测强肝药物中芍药苷、龙胆苦苷和丹酚酸B这3种有效成分的含量，从而能够全面表征强肝药物活性组分，具有精密度、稳定性、重复性高的特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物分析检测领域，涉及，特别是涉及采用高效液相色谱(HPLC)同时检测所述强肝药物的多种组分的检测方法。
技术介绍
复方中药是中医临床用药的主要形式，是中医药学的特色与精髓。中药是一个由多成分、多因素构成的复杂体系，其化学成分的多样性与复杂性是其疗效的物质基础，建立符合中医药特点的现代质量控制体系，攻克中药质量分析与评价的难题，改进中药现有质量控制方法已成为人们积极研究的课题。建立对中药的质量控制体系必须立足于中药的特色。复方中药的整体作用特点决定了中药不同于西药。中药的质量控制方法必须能对起效的全部成分(有机成分、无机成分和络合物成分)进行控制。只有这样，所建立的质量控制体系才能真正达到控制中药质量、保证中药用药安全有效的目的。中药质量控制正从简单的单个成分含量测定转向以先进技术为手段，多组分、多指标含量的测定。目前多数中药标准还是采用光谱或色谱手段鉴别和测定某一种或几种有效成分或指标成分，以及药典规定的常规检查项目。对于化学药品而言，其药效成分为结构清晰的单一化合物，构效关系明确，其含量和纯度直接表达其有效性及安全性。然而，中医用药的特点是复方配伍，任何单一的有效或活性成分的含量高低均不能表达其整体的疗效。强肝胶囊收载于《国家药品标准新药转正标准》第三十五册，由茵陈、板蓝根、当归、白芍、丹参、郁金、黄芪、党参、泽泻、黄精、地黄、山药、山楂、秦艽、甘草、六神曲16味中药组成，具有清热利湿、补脾养血、益气解郁的功效。用于治疗慢性肝炎、早期肝硬化、脂肪肝、中毒性肝炎、肝纤维化等。强肝胶囊为石家庄东方药业有限公司生产的中药大品种，经研究证明，强肝胶囊有较强的抗肝纤维化作用，具有保护肝细胞，促进肝细胞再生，恢复肝功能和抑制纤维化作用。临床上用于治疗肝纤维化、早期肝硬化、病毒性肝炎、中毒性肝病、脂肪肝等，其治疗效果已经得到临床的验证。如何保证药物的质量以及强肝胶囊中有效成分的含量，是决定强肝胶囊疗效的基础。现行的强肝胶囊质量标准规定了茵陈、白芍的薄层色谱鉴别方法和芍药苷高效液相色谱含量测定方法。作为中药大复方，仅从外观性状、简单的鉴别和单一成分含量测定等角度对强肝胶囊进行质量控制，显然不能全面准确说明其内在的质量，不能保证其疗效。要控制强肝胶囊的功效，必须根据中药多组分、多靶点、多途径作用的特点，对其物质整体予以控制，从整体上有效地表征中药的质量，建立安全、有效、稳定的质量标准体系。有关强肝胶囊质量控制的文献报道较少。目前多数检测方法都仅局限于测定强肝胶囊大复方中一、二种指标成分，但如何能够从宏观的角度对强肝胶囊制剂质量的进行宏观质量控制方法未见报道。同时，由于强肝胶囊的原料包含16味中药且中药成分之间存在复杂的相互作用，导致建立全面、有效地反映强肝胶囊内在质量和疗效的有效成分检测方法存在较大难度，因此，目前本领域存在对能够全面表征强肝胶囊这种药物的检测方法的需求。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术的目的是提供一种检测强肝药物，如强肝胶囊内容物的方法，该方法能够全面检测强肝药物的药物活性组分及其含量，从而表征和控制其内在质量。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的一方面，本专利技术提供了，所述强肝药物由茵陈、板蓝根、 当归、白芍、丹参、郁金、黄芪、党参、泽泻、黄精、地黄、山药、山楂、秦艽、甘草、六神曲组成 (例如强肝胶囊，收载于《国家药品标准新药转正标准》第三十五册)，所述检测方法包括采用高效液相色谱法同时检测所述强肝药物中的芍药苷、龙胆苦苷和丹酚酸B，其中，所述高效液相色谱法的条件包括色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充材料；流动相流动相A为乙腈，流动相B为0. 05%体积分数磷酸水溶液，进行梯度洗脱；所述梯度洗脱程序如下，其中流动相比例均为体积百分比0 40min，流动相A为10 ，流动相B为90% 65% ；40 50min，流动相A为 100%，流动相B为65% 0% ；50 51min，流动相A为100% 10%，流动相B为0% 90% ；51 55min，流动相A为10% 10%，流动相B为90% 90%。优选地，所述高效液相色谱法的条件还包括流速1. OmL/min ；柱温30°C；检测波长210nm 400nm ；理论塔板数按芍药苷峰计算，应不低于6000。其中，所述检测方法包括通过以下步骤制备对照品溶液取芍药苷、龙胆苦苷和丹酚酸B对照品，加入甲醇溶解制成每Iml含芍药苷0. 06mg、龙胆苦苷0. 03mg和丹酚酸 BO. 05mg的溶液，作为混合对照品溶液。并且，所述检测方法还包括通过以下步骤制备供试品溶液取所述强肝药物成分约0. 3g,置于锥形瓶或25ml容量瓶中，准确加入70%体积分数甲醇水溶液25mL，称重，超声处理或加热回流30min，放至室温，称重，再用70 %体积分数甲醇水溶液补足重量，摇勻，微孔滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液即得。优选地，所述高效液相色谱法包括以下步骤1)制备混合对照品溶液取芍药苷对照品、龙胆苦苷和丹酚酸B对照品适量，加入甲醇溶解并稀释成每Iml含芍药苷0. 06mg、龙胆苦苷0. 03mg和丹酚酸BO. 05mg的混合溶液，作为混合对照品溶液；2)制备供试品溶液取所述强肝药物约0. 3g，精密称重，置于锥形瓶或25ml容量瓶中，准确加入70%体积分数甲醇水溶液25mL，称重，超声处理或加热回流30min，放至室CN 102539599 A温，称重，用70 %体积分数甲醇水溶液补足重量，摇勻，微孔滤膜滤过，弃去初滤液，取续滤液即得；3)测定精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10 μ 1注入高效液相色谱仪， 根据以下色谱条件进行测定色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填料；流动相流动相A为乙腈，流动相B为0. 05 %体积分数磷酸水溶液，进行梯度洗脱；流速1. OmL/min ；柱温30°C；紫外检测波长230nm ；记录峰面积，采用外标法计算芍药苷、龙胆苦苷和丹酚酸B。所述梯度洗脱程序如下，其中流动相比例均为体积百分比O 40min，流动相A为10 ，流动相B为90% 65% ；40 50min，流动相A为 100%，流动相B为65% 0% ；50 51min，流动相A为100% 10%，流动相B为0% 90% ；51 55min，流动相A为10% 10%，流动相B为90% 90%。采用上述方法可以对待测强肝胶囊样品中的多指标成分进行测定，待测产品的龙胆苦苷、芍药苷、丹酚酸B含量范围应为下述范围龙胆苦苷0. 30 0. 70%、芍药苷0. 15 0.32%、丹酚酸 B 0.20 0.80%。以下是本专利技术的详细描述。色谱条件比较了甲醇-水和乙腈-水体系，结果表明，乙腈-水体系洗脱能力较强，分离效率较高，分离速度较快，故选择乙腈-水体系进行分离。同时，所测指标成分中含有酚酸类水溶性成分，酸化的流动相可以抑制酚酸类成分解离，减少色谱峰拖尾。因此，最终选择乙腈-0. 05%体积分数磷酸水溶液为流动相。由于各指标成分的极性差异较大，必须采用梯度洗脱的方法进行分离分析。试验中，考察了不同洗脱梯度，最后确定强肝胶囊的梯度洗脱条件0 40min，流动相A为10 ；35 %，流动相B为90 % 65 % ;40 50min，流动相A为 100%，流动相B本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张铁军，刘素香，韦辉，刘毅，韩丰年，何立新，刘向，
申请(专利权)人：石家庄东方药业有限公司，
类型：发明
国别省市：