本发明专利技术涉及一种厚叶岩白菜组培苗低温保存方法，该方法是由厚叶岩白菜的外植体诱导出芽、继代两次培养、低温保存以及缓苗继代出新芽四个步骤完成。该方法简单易于操作，植物材料复苏快，生活力高，对于一般组培车间保存原种材料极为实用，能解决快繁生产急用。植物低温保存对于有优良性状的种质资源的保存也有极其重要的价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物组织培养领域，具体涉及一种。
技术介绍
厚叶岩白菜属虎耳草科岩白菜属的一种多年生草本植物，生于海拔2500-3600m的湿润的峭壁石崖缝隙中，在我国主要分布于陕西、新疆、四川、云南及西藏。它是良好的丛生地被植物，叶大而厚，花期5-6个月，花大而色艳，可谓花叶俱美，观赏性及适应性强，是一种较好的观叶、观花用高山野生花卉，可以作为城市绿化中极早春开花的地被植物使用。厚叶岩白菜又为民间常用药，最早载于清《分类草药性》，具有滋补虚损，止血、化痰、清热等多种功效，中医和临床广泛用于治疗咳嗽、吐血、便血、肠炎、白带、肿毒等，外用治疗疮毒、疥癣，是一种宝贵的药材，其有效成分岩白菜素被广泛研究，已经作为一种中药制剂被广泛应用于临床。近年来的临床实验表明，其在治疗风湿性关节炎、慢性气管炎方面有一定的疗效，还能增强免疫功能。最近有学者报道岩白菜提取物具有抗菌和抗氧化的作用。岩白菜作为临床用草药之一，历史悠久，但是随着对其中化学成分和生物活性物质的不断深入研究，使得在临床上的应用越来越广，野生资源的有限性与制药需求的不断攀升之间的供需矛盾日益凸显，为了兼顾植物多样性保护与药用资源的合理开发，未来的出路不能继续单纯依赖野生资源，而对厚叶岩白菜进行低温保存不失为一种保存和抢救其日益枯竭的种质资源的好办法。作物种质资源保存是作物育种的物质基础。未来的农业生产在很大程度上取决于对种质资源的占有和利用程度。据估计，现有植物种以平均每天一种的速度消失，物种一旦灭绝，就不可复得，人类将永远失去利用它的价值。植物种质资源的收集和保存工作，早已受到世界各国包括联合国粮农组织在内的国际植物遗传资源委员会的重视。传统保存方法有种子保存和种植保存。种子保存虽用空间小，并能保存多年，但是在贮藏过程中种子生活力会随时间的延长而下降，且常常受到病虫的危害。再则，一般种子是杂合体，繁殖中性状会分离且不稳定。种植保存成本较高，还可能会受到天灾的危害。而对植物种质低温保存基本上可在保证有较高的存活率、较低的遗传变异的前提下保存植物种质资源。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种厚叶岩白菜组培苗低温保存的方法，以保存其日益枯竭的种质资源。该方法由厚叶岩白菜的外植体诱导出芽、继代两次培养、低温保存以及缓苗继代出新芽四个步骤完成。该方法简单易于操作，植物材料复苏快，生活力高，对于一般组培车间保存原种材料极为实用，能解决快繁生产急用。本专利技术所述的一种，按下列步骤进行a、将厚叶岩白菜新鲜叶片用0. 5-lg/L洗洁精或洗衣粉水溶液仔细擦洗表面，再用自来水流动冲洗lOmin，然后将叶片在超净工作台上用浓度为75%酒精表面消毒30s，将 0. 升汞中加入吐温-802-3滴灭菌5-12min，再用含有0. 2%的Na2S2O3无菌水冲洗3_5 次；b、将步骤a消毒后的厚叶岩白菜叶片切成0. 8-1. 2cm2的小块作为外植体，接种于固体培养基上进行愈伤诱导；C、将步骤b中形成的愈伤组织，转入增殖固体培养基B5+1. Omg/LNAA+1. Omg/L IBA+0. 05mg/L 6-BA诱导出芽，继代两次；d、将步骤c中诱导出芽的厚叶岩白菜无菌苗移入冷藏固体培养基B5+0. lmg/L NAA+0. 5mg/L 6-BA+O. Olmg/L IBA+25_45g/L 葡萄糖 +10_40mg/L 甘露醇 +5. 5g/L 琼脂中；e、将步骤d中长势强壮的单苗，移入50毫升冷藏固体培养基底部，放置海尔 SC-279GA透明门立式冷藏柜进行低温冷藏，由冷藏柜里的照明灯，每天16小时照射，8_12 个月后，在温度20°C下进行组培苗的缓苗继代，30天后长出新芽即可。步骤b固体培养基为B5+3%蔗糖+1. Omg/LNAA+1. 0mg/L6_BA+100mg/L水解酪蛋白 +0. 2%聚乙烯吡咯烷酮+100mg/L Na2&03。步骤e低温冷藏温度为1-9°C。本专利技术所述的，该方法进行愈伤诱导中在固体培养基中加入水解酪蛋白、聚乙烯吡咯烷酮和Naj2O3是作为抗褐化剂。通过本专利技术所述的方法获得的厚叶岩白菜组培苗，根据专利技术专利200710149874. 3 一种用生物组织培养法制备厚叶岩白菜的方法，进行扩繁、生根、炼苗、大田移栽的程序完成厚叶岩白菜成品苗。本专利技术所述的，该方法优点在于作为药用价值——厚叶岩白菜中含有的岩白菜素具有滋补虚损、止血、化痰、清热等多种功效，但新疆特有高寒植物移栽到低海拔种子基本敗育并且分株，分根繁殖材料少，繁殖系数低，获得幼苗有限，通过组培方法短时期内得到大量的均一的脱毒苗，并且一年半生的组培厚叶岩白菜与三年生的野生厚叶岩白菜生长冠幅基本相同，三年生的组培苗的岩白菜素比十几年生的野生厚叶岩白菜中含有的岩白菜素高出0. 25倍；如果根据市场的需求计划生产组培苗， 就急需把种苗冷冻保存，保质保量分配生产减少浪费，避免组培苗继代次数过多激素积累， 苗质量发生变异；解决从外枝体开始诱导出芽的漫长诱导过程，节省时间，能迅速得到大量种苗，满足实际需求。做为观赏价值——厚叶岩白菜宜于造景的园林绿化彩色地被植物，有很高观赏价值，岩白菜为早花期，花色鲜艳，叶色常绿，光亮喜人，可用于地栽和盆栽；地栽用于岩石园造景，花坛花镜造景；在自然式园林中，自然的地形结合岩白菜等野花的点缀，创建人工群落和复层结构，自然风景再现于园林，园林更具山野气息。将岩白菜布置于开阔的草坪上既能固沙又能释氧。无论何种实际应用，都必需不断提供大量的厚叶岩白菜成品苗，采用常规繁殖手段，很难成苗，时间亦较长，如果从冷冻保存种苗直接繁殖扩量，能在短期内得到大量脱毒苗并可减少病害威胁，更利于栽培成功，一年后组培苗开花；野生苗3-5年开花。附图说明图1为本专利技术低温冷藏十个月以后的厚叶岩白菜组培苗。4图2为本专利技术准备进行缓苗继代的厚叶岩白菜组培苗。 具体实施例方式本专利技术采用厚叶岩白菜组培苗为对象实施例1 将厚叶岩白菜新鲜叶片用0.5g/L洗洁精水溶液仔细擦洗表面，流动水冲洗 lOmin，然后将叶片在超净工作台上用浓度为75%酒精表面消毒30s，将0. 升汞中加入吐温-80 2滴灭菌5min，再用含有0. 2%的Na2S2O3无菌水冲洗3次；将消毒后的厚叶岩白菜叶片切成0. 8-1. 2cm2的小块作为外植体，接种于固体培养基为B5+3%蔗糖+1. Omg/L NAA+1. 0mg/L6-BA+100mg/L水解酪蛋白+0. 2%聚乙烯吡咯烷酮 +100mg/L Na2S2O3上进行愈伤诱导；将形成的愈伤组织，转入增殖固体培养基B5+1. Omg/LNAA+1. Omg/LIBA+O. 05mg/ L6-BA诱导出芽形成及丛芽的增殖，继代两次；丛芽继代两次挑选生长旺盛的厚叶岩白菜无菌单苗移入冷藏固体培养基 B5+1. Omg/L NAA+0. 5mg/L6_BA+0. Olmg/L IBA+25g/L 葡萄糖 +40mg/L 甘露醇 +5. 5g/L 琼脂中；将长势强壮的单苗，移入50毫升冷藏固体培养基底部，放置海尔SC-279GA透明门立式冷藏柜温度1°C中，进行低温冷藏保存，由冷藏柜里的照明灯，每天16小时照射8个月后，在温度20°C下进行组培苗的缓苗继代，30天后长出新芽，再根据本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘敏，王卉，王晓军，努尔波拉提，郝秀英，康喜亮，徐琴，陈艳瑞，
申请(专利权)人：中国科学院新疆理化技术研究所，
类型：发明
国别省市：
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