一种耐盐食用菌紫外线诱变育种和驯化的方法技术

一种耐盐食用菌的紫外线诱变育种和驯化的方法，将食用菌出发菌株经活化、菌丝体紫外诱变、利用含盐选择性培养基对耐盐菌株初筛、驯化和复筛而获得耐盐菌株。该方法适用于平菇、香菇、木耳等食用菌品种的耐盐菌株育种和驯化。优点是：采用菌丝体紫外诱变和驯化方法获得高耐盐性突变菌株，开拓了耐盐平菇诱变育种新途径。操作程序简便，所用仪器设备少，成本低，是一种易于推广的食用菌育种方法。诱变周期短、正向突变率提高，收效显著。获得的菌株、耐盐能力达到2％，遗传性状稳定、农艺性状优良，应用于盐碱地生产，使得平菇子实体品质改善，干鲜比和耐储性提高50％以上，不仅有效提高了平菇的质量，而且生产成本降低，经济效益显著提升。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于耐盐食用菌的紫外线诱变育种和驯化，特别涉及的是一种将食用菌菌丝体经紫外线辐射诱变后，再利用含盐选择性培养基筛选、驯化，获得耐盐菌株的方法。
技术介绍
中国盐碱地面积广大，土壤及地下水中含盐量高，极大地影响了农业生产。因此， 培育抗盐耐盐作物品种，提高其耐盐能力，是改良利用盐碱地经济而有效的方法。食用菌味道鲜美、营养丰富，有“素中之荤”的美誉，而且它还具有很高的药用价值，完全符合世卫组织倡导的“天然、营养、健康”的食品原则。随着民众生活水平的提高， 食用菌的消费需求日益增加。若在盐碱地上直接利用咸水资源生产，既可充分利用荒弃盐碱地解决农地资源紧缺问题，又能降低生产成本，增加市场供给，经济效益显著。食用菌属于微生物中的大型真菌，具有繁殖快、适应强、变异快等特点。传统的食用菌耐盐菌株选育的方法，是通过人工选择或杂交等手段来培育新品种，工作量大，筛选周期长，获得正突变异株的几率小。应用诱变育种结合驯化的方法选育抗盐耐盐食用菌，能大幅提高育种效率，获得大量优质高产的耐盐新菌株。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种紫外诱变结合驯化食用菌菌丝体，获得耐盐菌株的方法。它是简单、高效的食用菌育种方法，诱变周期短、操作程序简便，正向突变率高，收效显-frh-者O本专利技术的技术方案是一种耐盐食用菌的紫外线诱变育种和驯化的方法，其特征是出发菌株活化、菌丝体紫外诱变、利用含盐选择性培养基对耐盐菌株初筛、驯化和复筛从而获得耐盐菌株。出发菌株的活化是将供诱变食用菌菌株接种于无菌的PDA斜面培养基上，25°C恒温培养IOd 15d活化菌丝，后取0. 5cm2左右菌丝体块转接入PDA平板培养基，培养5d 7d后，从活化的平板培养皿用打孔器打孔取材，接种同样大小的菌块(0. 2cm2 0. 4cm2)于新鲜的含0. 5% 4% NaCl-PDA选择性平板培养基中央，25°C培养7 120h。菌丝体紫外诱变是，在辐照处理前先打开超净工作台电源20min 30min，紫外灯光线稳定后再进行照射。诱变时将生长有出发菌株菌丝体的培养皿放在超净工作台30W紫外灯垂直下方约30厘米处，打开培养皿盖，照射时间为3' 8'。照射后用黑布迅速包裹， 置于25°C恒温箱中避光培养72h。耐盐菌株初筛是，7 后观测在含0. 5% 4% NaCl-PDA的选择性培养基平板上生长的菌丝体长势，选择菌落浓密、洁白、菌丝生长快速的菌株。耐盐性驯化是将选出的菌株接种于新鲜的含0. 5% 4% NaCl-PDA选择性平板培养基中央，25°C培养72h 120h，后使用含0. 5% 4% NaCl-PDA选择性培养基试管，连续转管传代5次以上。每次传代均逐步提高选择性培养基中的NaCl含量。耐盐菌株的复筛是，比较在0. 5% 4% NaCl-PDA选择性培养基平板上生长的菌株，以菌块菌丝体萌发早，菌丝浓白、粗壮、分布均勻，日长速大于0. 4cm 1cm，气生菌丝发达，显微镜检菌丝为具锁状联合的双核菌丝为筛选指标，获得食用菌耐盐突变菌株。该方法适用于平菇、香菇、木耳等食用菌品种的耐盐菌株育种和驯化。本专利技术的优点是1、采用菌丝体紫外诱变和驯化方法获得高耐盐性突变菌株，开拓了耐盐食用菌诱变育种新途径。操作程序简便，所用仪器设备少，成本低，是一种易于推广的食用菌育种方法。2、诱变周期短、正向突变率提高，收效显著。获得的菌株耐盐能力达到 2%， 且遗传性状稳定、农艺性状优良。在盐碱地生产应用，食用菌子实体品质明显改善，干鲜比和耐储性提高40 % 50 %以上，不仅有效提高了食用菌的质量，而且生产成本降低，经济效益显著提升。具体实施方式1:诱变流程出发菌株活化一菌丝体紫外诱变一耐盐菌株初筛一耐盐性驯化一耐盐菌株复筛 —获得耐盐菌株出发菌株的活化是将供诱变平菇菌株接种于无菌的PDA斜面培养基上，25°C恒温培养14d活化菌丝，后取0. 5cm2左右菌丝体块转接入PDA平板培养基，培养5d。然后，从活化的平板培养基上用打孔器打孔取材，接种0. 4cm2大小的菌块于新鲜含1 % NaCl-PDA的选择性培养基平板中央，25°C培养72h。紫外诱变处理前先打开超净工作台电源20min，紫外灯光线稳定后再进行照射。诱变时将生长有出发菌株菌丝体的培养皿放在超净工作台30W紫外灯垂直下方约30cm处，打开培养皿盖，紫外线辐照菌丝体时间为4'。照射后迅速用黑布包裹培养皿，置于25°C恒温箱中避光培养72h。耐盐菌株初筛是，黑暗培养7 后，观测在NaCl-PDA选择性培养基平板上生长的菌丝体长势，选出菌落浓密、洁白、菌丝生长快速的菌株。耐盐性驯化是，将选出的菌株接种于新鲜含1 % NaCl-PDA选择性培养基平板中央，25°C培养72h，后用NaCl-PDA选择性培养基连续转管传代6次。每次传代均逐步提高选择性培养基中的NaCl含量，浓度由渐增至2%。耐盐菌株的复筛是，以菌块萌发早，菌丝浓白、粗壮、分布均勻，日长速大于0.6cm， 气生菌丝发达，显微镜检菌丝为具锁状联合的双核菌丝作为筛选指标，获得耐盐平菇突变菌株，后转接于含NaCl-PDA选择性培养基试管斜面，4°C低温保藏。上述诱变过程可作为本专利技术的一个实施例。实施前述诱变流程后所获得的耐盐平菇菌株具有以下指标1、有效缩短育种周期20 %以上，正向突变率提高。2、平菇菌株耐盐能力达2 %，能够应用于盐碱地规模化栽培。3、菌丝生长速度提高10% 20%，日长速大于0. 6cm。4、子实体品质改善，蛋白质含量增加10%，含水量减少40%，耐储性提高50%以上。感官指标菌丝浓白、粗壮、分布均勻，气生菌丝发达，显微镜检菌丝为具锁状联合的双核菌丝。具体实施方式2:出发菌株的活化是，将供诱变黄背木耳菌株接种于无菌的PDA斜面培养基上， 25°C恒温培养14d活化菌丝，后取0. 5cm2左右菌丝体块转接入PDA平板培养基，培养7d。 然后，从活化的平板培养皿用打孔器打孔取材，接种0. 4cm2大小的菌块于新鲜含0. 5% NaCl-PDA的选择性培养基平板中央，25°C培养72h。紫外诱变处理前先打开超净工作台电源20min，紫外灯光线稳定后再进行照射。诱变时将生长有菌丝体的培养皿放在超净工作台30W紫外灯垂直下方约30cm处，打开培养皿盖，紫外线辐照菌丝体时间为3' 30"。照射后迅速用黑布包裹培养皿，置于25°C恒温箱中避光培养72h。耐盐菌株初筛是，黑暗培养7 后，观测在0. 5% NaCl-PDA选择性培养基平板上生长的菌丝体长势，选出菌丝洁白、生长快速的菌株。耐盐性驯化是将选出的菌株接种于新鲜含0. 5 % NaCl-PDA选择性培养基平板中央，25°C培养72h，后用NaCl-PDA选择性培养基连续转管传代5次。每次传代均逐步提高选择性培养基中的NaCl含量，浓度由0. 5%渐增至1%。耐盐菌株的复筛是，以菌块菌丝体萌发早，菌丝洁白、粗壮、分布均勻，日长速大于 0. 4cm,气生菌丝发达，显微镜检菌丝为具锁状联合的双核菌丝为指标，获得黄背木耳耐盐突变菌株，转接于含NaCl-PDA选择性培养基试管，4°C低温保藏。上述诱变过程可作为本专利技术的一个实施例。实施前述诱变流程后所获得的耐盐平菇菌株具有以下指标1、有效缩短育种周期20 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：訾惠君，张志军，周永斌，刘连强，魏雪生，李凤美，陈晓明，王玫，
申请(专利权)人：天津市林业果树研究所，
类型：发明
国别省市：