本发明专利技术“具有局部抗血小板效应的RNA干扰血管支架涂层材料及其制成的局部抗凝血管支架”，涉及生物医药领域的血管支架涂层技术。其特征在于：所述涂层材料的有效成分为至少一种RNA干扰重组质粒，所述一种RNA干扰重组质粒指其含有的插入DNA片段能够表达短链干扰RNA，该短链干扰RNA可抑制人类环氧化酶1基因PTGS1或人类P2RY12型ADP受体基因的表达。本发明专利技术的上述涂层材料籍基因调控途径实现了以阿司匹林为代表的环氧化酶抑制剂和以氯吡咯雷为代表的ADP受体抑制剂二类主要的抗血小板药物的抗血小板机制，并且使血管介入治疗中抗凝局部化，规避了药物的全身性分布所导致的使用禁忌及一系列副作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药领域的血管支架涂层技术，特别是一种具有局部抗血小板效应的RNA干扰血管支架涂层材料及其制成的支架。
技术介绍
经皮冠状动脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,简称 PC I)已成为冠心病的重要治疗手段之一。我国目前开展PCI的机构超过1200家，年手术量达25 万例。PCI的实质就是开通冠状动脉，实现病变区域的血运重建。PCI所运用的器材由球囊扩张逐步发展为血管支架，血管支架的发展经历了裸金属支架(bare metal stents，简称 BMS)和药物洗脱支架(drug-eluting stents，简称DES)。药物洗脱支架的运用在带来巨大效益的同时，存在的问题也十分明显。其中，最严重的问题就是凝血反应，即血栓形成，其危险性甚至是致命的。为了预防血栓形成，从术前到术后，所有接受冠脉支架植入的患者均要经历抗凝治疗，其中，术后的抗凝治疗尤其艰巨。一般而言，在冠脉支架植入术后，抗血小板药阿司匹林须终身服用，其它抗血小板药如氯吡咯雷则需要服用1年左右。解决PCI术后的抗凝治疗所产生的问题在心血管临床实践中是一个重大的挑战， 主要表现在二个方面(1)从总体上看，冠脉支架的血栓形成发生于局部的局部，也就是说，心脏是人体的局部，而病变部位又是心脏的局部。但是，抗凝治疗因没有局部手段而被迫采用全身性的，二者的对应性较差；( 抗凝血药物本身的不适合和副作用问题十分突出。例如消化不良、消化性溃疡等常见病患者忌用阿司匹林这一心血管介入治疗中最常用的抗凝药，另外约1/4患者会产生阿司匹林抗药性。其它抗凝药物在长期服用后，也可能产生严重副作用，例如氯吡咯雷就可能导致血小板减少性紫癜等。在使用冠脉支架的介入治疗后最常用的抗血小板药是阿司匹林，另一个常用的合并使用的抗血小板药是氯吡咯雷。阿斯比林的作用原理是抑制环氧化酶1(见注释1)， 氯吡咯雷的药理作用原理是抑制P2RY12型ADP受体(见注释2~)。短链干扰RNA(short interference RNA，简称siRNA)可以通过特定的设计对特定的基因表达在转录后和翻译前进行强力干扰。RNA干扰(RNA interference, RNAi)是指由高度保守的双链 RNA (double-stranded RNA, dsRNA)诱发的使同源mRNA高效特异性降解的现象。由于使用 RNAi技术可以特异性抑制特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域，但目前未见到用于静默人类环氧化酶1基因PTGSl及人类P2RY12型ADP受体基因以起到抗血小板的作用，更未见到与血管支架的联合使用方面的报道。
技术实现思路
本专利技术根据上述领域存在的技术问题和需求，提供一种具有局部抗血小板效应的，在细胞内具有表达能力的，主要生物活性成分为短链干扰RNA的血管支架涂层，特别是冠状动脉支架涂层及其制得的血管支架。具有局部抗血小板效应的RNA干扰血管支架涂层材料，其特征在于所述涂层材料的有效成分为至少一种RNA干扰重组质粒，所述一种RNA干扰重组质粒指其含有的插入 DNA片段能够表达短链干扰RNA，所述短链干扰RNA所针对的靶序列为人类环氧化酶1基因 PTGSl或人类P2RY12型ADP受体基因的转录产物上的一段长度为19nt的序列，所述靶序列的选取方法如下(1)靶序列长度基准为19nt ；(2)靶序列的5’端和/或3’端的6个碱基中，鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)的数量之和等于或小于4 ；(3)同一个靶序列二个相同的拷贝之间，连续配对的碱基不超过4个；(4)靶序列自身不形成发卡型(hairpin)结构；(5)如果所针对的基因存在转录变异体(见注释3)，则靶序列的选取区域锁定在该基因的所有转录变异体的共同序列部分；(6)靶序列所在区域不存在已知的最低等位基因频率超过的单核苷酸多态 (SNP)；(7)靶序列与迄今为止已知的人的其它基因的连续匹配不超过16nt。人类环氧化酶1基因PTGSl的转录产物上选取的靶序列为序列(A):5，-AAGGGTGGGGAGGGGATGG-3，，序列(B)5' -TTCTTGCTGTTCCTGCTCC-3’ 或序列(C):5，-TTCACCCACTTCCTGCTCA-3，。人类P2RY12型ADP受体基因的转录产物上选取的靶序列为序列(D):5，-AGACTTTACTGACGAAAAC-3，，序列(E):5，-CATCTGTCAAGTCATTTTC-3，或序列(F):5，-TACACTCATTACAAAAGAA-3，。所述涂层材料还包括涂层转染缓冲液，所述RNA干扰重组质粒溶于所述涂层转染缓冲液中，所述涂层转染缓冲液的配方如下明胶2% (W/V)，pH7. 5的HEPES 20mM, NaCl 120mM，二油酰三甲胺丙烷甲基盐酸盐0. 01 0. l(g/100ml)。所述RNA干扰重组质粒溶于涂层转染缓冲液中，浓度为50ng/ml。用于制备上述具有局部抗血小板效应的RNA干扰血管支架涂层材料的RNA干扰重组质粒，其针对的靶标序列为序列(A)5，-AAGGGTGGGGAGGGGATGG--3，，序列(B)5，-TTCTTGCTGTTCCTGCTCC--3，，序列(C)5，-TTCACCCACTTCCTGCTCA--3，，序列(D)5，-AGACTTTACTGACGAAAAC--3，，序列(E)5，-CATCTGTCAAGTCATTTTC--3，，或序列(F)5，-TACACTCATTACAAAAGAA--3，。所述RNA干扰重组质粒的克隆载体为CMV质粒。一种局部抗凝血管支架，包括支架本体和支架涂层，其特征在于所述支架涂层中包含上述任一涂层材料。所述局部抗凝血管支架，所述支架涂层还包括由内而外依次为可溶性明胶-多聚氨基甲酸乙酯胶-热敏性多聚水凝胶-聚异丙基丙烯酰胺凝胶-鲑鱼精DNA背景阻滞剂构成的预处理涂层，所述鲑鱼精DNA背景阻滞剂的配方为10mM pH 8. 0的Tris_EDTA，2. 0% 明胶，S.Oyg/ml鲑鱼精DNA。所述预处理涂层由内而外第一层材料30mg/ml可溶性明胶，厚10 μ m ；第二层材料30mg/ml多聚氨基甲酸乙酯胶，厚度为5 μ m ；第三层材料40mg/ml热敏性多聚水凝胶， 厚度为6μπι ；第四层材料50mg/ml聚异丙基丙烯酰胺凝胶，厚度为10 μ m ；所述预处理涂层表面包覆有一层所述鲑鱼精DNA背景阻滞剂；所述涂层材料涂覆在所述预处理涂层的表面。所述支架本体由适用于药物涂层支架的材料制成，所述适用于药物涂层的材料指 316L不锈钢、钴铬合金，钛合金，钛镍合金，铁基，药物，聚乳酸，镁合金，聚乳酸与镁合金的混合物中的一种或几种材料。一种局部抗凝血管支架的制备方法，步骤如下(1)在支架本体表面涂一层30mg/ml可溶性明胶，厚度为10 μ m ；于洁净台风干后涂一层30mg/ml多聚氨基甲酸乙酯胶，厚度为4 μ m ；然后再涂一层40mg/ml热敏性多聚水凝胶，厚度为6 μ m ；最后再涂50mg/ml聚异丙基丙烯酰胺凝胶，厚度为10 μ m ；(2)将 IOmM pH 8. 0 的 iTris-EDTA, 2. 0本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.具有局部抗血小板效应的RNA干扰血管支架涂层材料，其特征在于所述涂层材料的有效成分为至少一种RNA干扰重组质粒，所述一种RNA干扰重组质粒指其含有的插入 DNA片段能够表达短链干扰RNA，所述短链干扰RNA所针对的靶序列为人类环氧化酶1基因 PTGSl或人类P2RY12型ADP受体基因的转录产物上的一段长度为19nt的序列，所述靶序列的选取方法如下(1)靶序列长度基准为19nt；(2)靶序列的5’端和/或3’端的6个碱基中，鸟嘌呤(G)和胞嘧啶(C)的数量之和等于或小于4 ；(3)同一个靶序列二个相同的拷贝之间，连续配对的碱基不超过4个；(4)靶序列自身不形成发卡型(hairpin)结构；(5)如果所针对的基因存在转录变异体，则靶序列的选取区域锁定在该基因的所有转录变异体的共同序列部分；(6)靶序列所在区域不存在已知的最低等位基因频率超过的单核苷酸多态(SNP)；(7)靶序列与迄今为止已知的人的其它基因序列的连续匹配不超过16nt。2.根据权利要求1所述的具有局部抗血小板效应的RNA干扰血管支架涂层材料，人类环氧化酶1基因PTGSl的转录产物上选取的的靶序列为序列(A) :5，-AAGGGTGGGGAGGGGATGG-3，， 序列(B) :5，-TTCTTGCTGTTCCTGCTCC-3，或序列(C) :5，-TTCACCCACTTCCTGCTCA-3，。3.根据权利要求1或2所述的具有局部抗血小板效应的RNA干扰血管支架涂层材料， 人类P2RY12型ADP受体基因的转录产物上选取的靶序列为序列(D) :5，-AGACTTTACTGACGAAAAC-3，， 序列(E) :5，-CATCTGTCAAGTCATTTTC-3，或序列(F) :5，-TACACTCATTACAAAAGAA-3，。4.根据权利要求1所述的具有局部抗血小板效应的RNA干扰血管支架涂层材料，所述涂层材料还包括涂层转染缓冲液，所述RNA干扰重组质粒溶于所述涂层转染缓冲液中，所述涂层转染缓冲液的配方如下明胶2% (w/v)，pH7. 5的HEPES 20mM, NaCl 120mM, 二油酰三甲胺丙烷甲基盐酸盐0.01 0. (w/v) 05.根据权利要求4所述的具有局部抗血小板效应的RNA干扰血管支架涂层材料，所述 RNA干扰重组质粒溶于涂层转染缓冲液中，浓度为50ng/ml。6.用于制备权利要求1 5任一所述的具有局部抗血小板效应的RNA干扰血管支架涂层材料的RNA干扰重组质粒，其针对的靶标序列为序列(A) :5，-AAGGGTGGGGAGGGGATGG-3，， 序列(B) :5，-TTCTTGCTGTTCCTGCTCC-3，， 序列(C) :...
【专利技术属性】
技术研发人员：周儒伦，郭威早，张建军，
申请(专利权)人：北京中孵友信医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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