来自完全以母乳喂养的婴儿粪便的具有益生活性的菌株的分离、鉴定和表征制造技术

技术编号:7284261 阅读:361 留言:0更新日期:2012-04-20 06:12
本发明专利技术涉及分离自完全以母乳喂养的儿童的粪便的益生微生物。所述微生物由于其对摄取它们的人的健康具有有益作用的益生性质而用于食品或制药工业,特别是用于幼儿配方奶。所述微生物包括鼠李糖乳杆菌HERO?22A(CNCM?I-4036)、副干酪乳杆菌HERO?7(CNCM?I-4034)和短双歧杆菌HERO?15B(CNCM?I-4035)。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本研究的一般目的是分离益生微生物以后续用于食品和制药工业,特别是将其用于幼儿配方奶中。所述微生物对PH、胆汁盐具有高度抗性并具有高度肠细胞粘附,因此它们特别适用于前述工业中。
技术介绍
近几十年来,营养学已经得到了极大的发展,并且所述发展已改变了营养学的概念。以前认为膳食具有提供维持健康状况所必需的营养物的作用,而现在,这一概念已经发展为以下看法膳食可以含有除了提供营养之外的促进健康的食品。这是食品工业开始开发大量促进健康的产品的原因。在这个领域,功能性食品的方面已有了极大的发展,其中人群对益生菌的食用每天都在增加。实际的挑战是扩大对这些食品的了解,在这些食品中含有益生菌的那些食品得到特别的关注。存在非常古老的记录涉及来自食用具有高细菌含量的食品的有益效果,例如在旧约中,其中提及亚伯拉罕将其长寿的原因归结于食用奶,或者在公元前76年,罗马历史学家Plinius推荐使用发酵奶来治疗肠胃炎(knmier和De Vrese,2001年)。在上个世纪最初,俄国微生物学家Elie Metchnikoff (1845年-1916年)建议食用发酵奶调节肠微生物群,从而对人体健康产生积极作用(Metchnikoff,1908年)。他关注于下述事实保加利亚百岁老人的人数令人难以置信,尽管这是最为贫穷的欧洲国家之一。 他观察到保加利亚人大量食用酸奶。Metchnikoff成功地分离了产生酸奶的细菌,并将其用于他的研究中。这是益生研究的开始。Metchnikoff成为下述概念的坚定支持者膳食可以保护人体免受病原侵入,并因此改善和延长生命的质量。他还是开发胶囊形式的乳酸菌制剂用于口服的第一人,该制剂称为乳杆菌素。同时,法国微生物学家Tissier观察到,母乳喂养的新生儿的粪便微生物群比接受人造奶的儿童的粪便微生物群具有更多的双歧杆菌属的细菌,并且认识到这种微生物的有益作用。之后在1940年,双歧奶显示在第一次世界大战期间减轻儿童的营养不良。1950 年,Degusta厂制备了 Biogur和Bio-garde。1989年,在瑞士,发酵奶的食用和产量提高。 1993年,两位研究者Modler和Vila-Garcia开发了第一种低酸度生物酸奶。1965年,Lilly和Millwell首次将术语“益生菌”用于命名胃发酵的产物。但是益生菌的更为有效和广泛使用的定义是在很长时间以后由Fuller说明的(Fuller,1992 年;Fuller,1989年)。益生菌定义为“经加入到食品中的活微生物的补充对接受者的健康起有益效果,因为它们调节他/她肠道微生物平衡的改善”。对于成年人,这包括来自发酵奶和用这些细菌冻干的制剂二者。1998年,位于布鲁塞尔的国际生命科学会(International Life Science Institute, ILSI)将益生菌定义为活微生物,当其以足够量摄入时,对健康具有有益效果,该效果大于常规营养效果。它们有益地影响生物体的一个或多个功能。它们提供更好的健康状况,和/或降低疾病风险。它们可以对一般人群或其特殊群体具有功能。目前存在益生微生物的定义的标准1.它们是人来源的。2.它们具有非病原的性质。3.它们对技术方法的破坏具有抗性。4.它们对胃酸和胆汁的破坏具有抗性。5.它们粘附于肠上皮。6.它们能够在胃肠道定殖。7.它们产生抗微生物物质。8.它们调节免疫响应。9.它们影响人代谢活性(胆固醇吸收、维生素产生等)益生细菌可以影响所有的肠细胞和这些细胞的作用机制,包括对微生物群的作用 (Backhed 和 Ley,2005 年)、免疫功能的调节(Picard 等人,2004 年;KalIiomaki,2004 年) 和上皮屏障功能的提高(Madsen等人,2001年;Isolauri & Salminen, 2005年)。在具有益生活性的细菌中,来自双歧杆菌属的那些细菌在肠中最为丰富,为成人结肠细菌的25%,母乳喂养的新生儿中的95%。目前有很多食品(酸奶和奶)补充了这种类型的细菌。根据抑制其它厌氧细菌(例如梭菌属、类杆菌属、双歧杆菌属、假单胞菌、葡萄菌属、链球菌属和肠杆菌科)的附着的“体外”研究,同样具有益生活性的其它菌株为来自乳杆菌属的那些细菌(Silva等人,1987年)。在一些病理学中采用益生菌作为医学手段已得到了广泛认可,并且其效果的证据确凿,主要是对于以下的临床研究和元分析(meta-analysis)的结果乳糖吸收不良 (Adolfsson等人,2004年;Piaia等人,2003年)、胃肠道感染(Brownlee等人,2003年)和与使用抗生素有关的腹泻(D' Souza等人,2002年)。此外,已显示使用益生细菌双歧杆菌、乳杆菌和/或二者的混合物对一些消化性疾病具有有益效果。在文献中存在很多有益效果方面的证据。对肠道微生物群的成分之间的关系以及与宿主的相互作用的理解是非常复杂的。 基因组有助于分析对肠道条件响应的经分离的细菌,从而部分揭示了菌株的代谢能力,但是,其中可以表达这些能力的条件以及得以分离形成肠道微生物群的绝大多数菌株的条件在很大程度上仍然是未知的,只能通过部分或全部鉴定它们的基因组的分子工具来进行鉴定。由于此原因,益生菌和功能食品领域的发展为全面的发展。因此,考虑到益生菌株之间存在不同作用并且属于相同种的菌株种类可能具有不同生理特性,而不同生理特性又使它们具有抗其它细菌的不同或改善的益生性质,因此鉴于它们的健康和工业益处,对新益生菌株的作用的鉴定和表征是非常重要的。本研究的一般目的是分离益生微生物以后续用于食品和制药工业,特别是将其用于幼儿配方奶中,所述益生微生物具有改善的益生性质、对酸性PH的抗性、对胆汁盐的抗性和肠细胞粘附。本专利技术提供和表征了分离自完全以母乳喂养的儿童的粪便的益生微生物。随着本专利技术的目标菌株通过胃和肠道,其对pH和胆汁盐的更大抗性使得所述益生微生物具有更大的存活能力,并因此提高它们的定殖作用,也因此提高它们抗其它潜在病原细菌的拮抗作用。另一方面,构成本专利技术目标的益生菌株对人体肠道细胞的更大粘附性可以实现对所有免疫系统调节的更大作用。
技术实现思路
本专利技术提供了分离自完全以母乳喂养的儿童的粪便的益生微生物。由于所述微生物的益生性质,而所述益生性质对摄入它们的那些人健康具有有益作用,所述微生物用于食品或制药工业中,特别是用于幼儿配方奶中。为分离所述益生微生物,本专利技术提出了下述具体目标a)分离获自完全以母乳喂养的儿童的粪便的乳酸细菌菌株;b)评估对pH和胆汁盐的抗性;和c)评估对肠上皮细胞的粘附性。通常在婴儿的粪便中寻找益生细菌。此外,存在某些惯例,推荐益生菌必须是人来源的,据信其原因在于它们能更好地植入人体肠道中。然而,很多分离的菌株并不满足益生条件,因为它们很少或根本不对消化液具有抗性,并且它们中的一些并不粘附于肠上皮。在本专利技术中,选择完全以母乳喂养的婴儿,以确保分离的细菌不是商业细菌。此外,已显示以母乳喂养的婴儿的肠道微生物群非常富含双歧杆菌和乳杆菌。涉及益生菌,必须通过下述表征有效的益生菌1.其对宿主具有有益作用的能力,例如对疾病的抗性。2.其不造成病原性或毒性。3.其经通过胃肠道的存活能力。例如对胃酸和胆汁酸的抗性。4.其保持粘附于肠壁本文档来自技高网
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员:何塞·玛丽亚·维埃特斯·费尔南德塞尔吉奥·穆诺兹·奎扎达尹玛库拉达·拉玛斯·科姆帕尼何塞·马尔多纳多·洛扎诺费尔南多·罗梅罗·布拉奎哈伊安东尼奥·弗朗西斯科·苏阿雷兹·加西亚安琪儿·吉尔·赫尔南德兹卡罗莱纳·戈麦斯·略伦特米里亚姆·贝穆德斯·布里托
申请(专利权)人:海罗西班牙有限公司
类型:发明
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