一种免疫结合试验方法技术

一种免疫结合试验方法，属于医学、生物检测技术领域。以酶联免疫吸附试验的吸附材料为载体，以胶体微粒和/或染料为示踪物，采用简化的酶联免疫吸附实验步骤，使用简单仪器和/或肉眼进行测量判读，可进行相应疾病、食品、药物等抗体、抗原或核酸的检测。本发明专利技术通过综合采用新型吸附材料、示踪物和简单仪器，在保证整个实验精密性和灵敏性的同时，满足了多种类型实验的需要，提高了实验结果的可信度，简化了实验步骤，增加了判读的容易性，降低了非专业人员使用实验试剂的技术门槛。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学、生物检测
，特别涉及一种新的免疫结合试验方法。
技术介绍
目前，在生物、食品、药物、医学、畜牧等检测中普遍采用的方法有：(1)酶联免疫吸附试验，该法适用于在实验室进行检测，检测时间一般需要1小时到数小时，每次可检测较多样品；(2)胶体微粒标记免疫层析或渗滤试纸试验，该法使用胶体金、胶体硒作为标记物，可以在实验室内外进行快速检测，一般仅需要10-20分钟，每次可检测单份样品，但检测灵敏度较低，不易定量或半定量，无法满足很多检测的需要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种对具有免疫活性样品进行定性和/或定量检测的新方法。与现有方法相比较，本专利技术的方法既有酶联免疫吸附试验较高精密性、灵敏性，又有胶体微粒标记免疫层析或渗滤试纸试验方便性、快速性。本专利技术的另一个目的在于提供简化免疫结合实验方法的同时，提高检测的灵敏度，满足定性、半定量和定量分析的要求。为达上述目的，本专利技术采用如下技术方案：以酶联免疫吸附试验的吸附材料为载体，以胶体微粒和/或染料为标记物，采用简化的酶联免疫吸附实验步骤，使用简单仪器和/或肉眼进行测量判读。本专利技术通过采用酶联免疫吸附试验常用的吸附材料，如聚苯乙烯、聚氯乙烯，将其制作成为表面平整、便于放入简单仪器进行测量的条形或板形，并且在其两个相对的平整面上设置检测区，吸附参与免疫反应的抗体和/或抗原和/或核酸，并进行了封闭、干燥等常规加工(注：专业术语称为“包被”)，将载体的吸附性能增加了一倍，可以保证整个实验的精密性和灵敏性；通过采用兼有示踪和参与免疫反应的作用的标记物，如胶体金或胶体硒标记的、与包被物配对的抗体、抗原、核酸等，可使整个实验步骤得以简化，方便了非专业人员按说明书进行操作；实验试剂设计为单份，使不需规模化实验的检测成本相对降低；通过采用比色计等简单仪器进行测量判读，使实验结果定量和/或半定量，提高了实验结果的可信度，增加了判读的容易性；进而，这些简单仪器可以附有通用滤光片，使其满足某一类型实验的需要，也可以针对不同的实验试剂设计和提供专用的本底滤光片、临界值光片，降低非专业人员测量判读的技术门槛。以下列表显示本方法与现有方法主要异同点的对比：1本方法与酶联免疫吸附试验主要异同点的对比  项目  酶联免疫吸附试验  本方法  载体  聚苯乙烯、聚氯乙烯等  聚苯乙烯、聚氯乙烯等  载体形状  孔状、杯状、珠状  条状、板状  载体检测区  孔状和杯状底部，单面；珠状全表面  条状、板状的两面  示踪物  酶和底物  胶体微粒和/或染料  实验步骤  复杂，主要3步  简单，主要2步  实验时间  1小时到数小时  40分钟左右  判读仪器  专用分光光度计  简单比色计等2本方法与胶体微粒标记试纸试验主要异同点的对比  项目  胶体微粒标记试纸试验  本方法  载体  硝酸纤维素膜、杂交膜等  聚苯乙烯、聚氯乙烯等  载体形状  膜状  条状、板状  载体检测区  膜的一面  条状、板状的两面  目标捕获  层析或渗滤后免疫结合  吸附后免疫结合  示踪物  胶体微粒  胶体微粒和/或染料  增强显色  层析不可，渗滤可  可  实验步骤  层析极简单，1步；渗滤简单，2步  简单，主要2步  实验时间  10-20分钟  40分钟左右  判读仪器  无  简单比色计等  结果性质  定性  定性、定量、半定量本专利技术的积极意义在于，通过综合采用新型吸附材料、示踪物和简单仪器，在保证整个实验精密性和灵敏性的同时，满足了多种类型实验的需要，提高了实验结果的可信度，简化了实验步骤，增加了判读的容易性，降低了非专业人员使用实验试剂的技术门槛。具体实施方式实施例1、hCG免疫吸附结合检测试剂，其制作过程如下：(1)用胶体金标记抗β-hCG单抗，并纯化；(2)将抗α-hCG单抗或多抗包被在条形聚苯乙烯板两面的固定位置上(将条形板插入包被液)；(3)组装试剂，待用。检测过程为：(1)将条形包被板插入被测试样中20分钟；(2)将条形包被板洗涤后，插入胶体金标记抗体工作液20分钟；(3)将条形包被板置比色计中测量判读。hCG免疫吸附结合检测试剂与其他检测方法对比结果：以hCG国家标准品为检品，使用微孔板酶联免疫检测，最低检出量不高于5mIU/ml，可以半定量；使用金标试纸检测，最低检出量不高于25mIU/ml，可以定性；使用本方法试剂检测，最低检出量不高于20mIU/ml，可以半定量。实施例2、乙型肝炎表面抗原免疫吸附结合检测试剂，其制作过程如下：(1)用胶体金标记乙型肝炎表面抗原单抗I，并纯化；(2)将乙型肝炎表面抗原的单抗II或多抗包被在条形聚苯乙烯板两面的固定位置上(将条形板插入包被液)；(3)组装试剂，待用。检测过程为：(1)将条形包被板插入被测试样中20分钟；(2)将条形包被板洗涤后，插入胶体金标记抗体工作液20分钟；(3)将条形包被板置比色计中测量判读。乙型肝炎表面抗原免疫吸附结合检测试剂与其他检测方法对比结果：以中国药品生物制品检定所的标准品为检品，使用微孔板酶联免疫检测乙型肝炎表面抗原，最低检出量不高于0.5ng/ml，可以半定量；使用金标试纸检测乙型肝炎表面抗原，最低检出量不高于1-8ng/ml，可以定性；使用本方法试剂检测，最低检出量不高于2ng/ml，可以半定量。本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种免疫结合试验方法，其特征在于，以酶联免疫吸附试验的吸附材料为载体，以胶体微粒和／或染料为示踪物，采用简化的酶联免疫吸附实验步骤，使用简单仪器和／或肉眼进行测量判读。

【技术特征摘要】
1.一种免疫结合试验方法，其特征在于，以酶联免疫吸附试验的吸附
材料为载体，以胶体微粒和/或染料为示踪物，采用简化的酶联免疫吸附实验
步骤，使用简单仪器和/或肉眼进行测量判读。
2.根据权利要求1所述的一种免疫结合试验方法，其特征在于：这种
试验方法与载体的吸附有关，与层析、渗滤无关；其示踪与胶体微粒和/或染
料有关，与酶和底物无关。
3.根据权利要求1所述的一种免疫结合试验方法，其特征在于：作为
载体的吸附材料，是酶联免疫吸附试验常用的吸附材料，如聚苯乙烯、聚氯
乙烯、硅片，或者是以聚苯乙烯、聚氯乙烯和/或磁性微粒、硅微粒为表面的
吸附材料，它们的外观是表面平整、便于放入简单仪器进行测量的条形、板
形、块形。
4.根据权利要求3所述的作为载体的吸附材料，其特征在于：这一载
体材料的检测区表面上，应吸附了参与免疫反应的抗体和/或抗原和/或核酸，
进行了封闭、干燥等常规加工(注：专业术语称为“包被”)，并且这个载体
材料的检测区，并不限于它的某一个面，还包括了这个面的对面。
5.根据权利要求1所述的一种免疫结合试验方法，其特征在于：所述
的示踪物是胶体微粒和/或染料，但应标记在参与免疫反应的抗体和/或抗原
和/或核酸上，...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴佩珊，
申请(专利权)人：吴佩珊，
类型：发明
国别省市：41