一种植物雌激素活性成分筛选的构建方法技术

本发明专利技术涉及一种植物雌激素活性成分筛选方法，该方法以共转染为基础，将携带外源人雌激素受体基因的表达载体和携带雌激素应答序列(3×ERE)的荧光素酶报告基因载体按比例转染人乳腺癌MCF-7细胞，再加入植物雌激素待检测样品，检测荧光素酶的表达，荧光素酶的表达受ERE的调控，即可筛选到植物雌激素活性成分。该方法对于植物雌激素活性成分的筛选，具有较高的特异性和灵敏性，可作为植物雌激素活性成分筛选模型广泛使用。本发明专利技术所述方法简便、灵敏、特异性好、用药量低，可用于植物雌激素活性成分的高通量筛选，有效地解决了现有植物雌激素活性成分筛选方法药品用量大、成本高、操作复杂、结果重复性差、难以满足高通量筛选等不足。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种植物雌激素活性成分筛选方法，适用于中草药活性成分的筛选。
技术介绍
植物雌激素是一类植物来源的、能够与雌激素受体结合发挥弱雌激素作用的非甾类多酚化合物。近十年来研究发现植物雌激素在预防和治疗乳腺癌、前列腺癌、心血管疾病、骨质疏松、绝经期综合症等与雌激素相关病症疗效显著，可有效避免人工合成雌激素药品如他莫西芬、雷诺西芬等所引发的子宫内膜癌以及乳腺癌。自1999年美国NIH将人工合成雌激素列入致癌“黑名单”后，从植物中筛选及提取植物雌激素活性成分成为最热门的需求。目前植物雌激素活性成分的筛选多应用整体动物模型如亲子宫增重实验进行，该方法具有药品用量大、成本高、操作繁杂、结果重复性差等局限性，很难满足高通量筛选的要求。以雌激素受体为靶点建立的报告基因转录激活细胞筛选系统是用来筛选雌激素调节剂是目前国际上广为接受的方法。但是，由于植物雌激素与其他种雌激素调节剂相比， 具有活性低、成分复杂等特点，到目前为止，还没有充分验证过的标准的试验方法可供植物雌激素活性成分筛选使用，且检测结果受转染方法、受体细胞株、报告基因、ERE重复序列等多方面的影响。植物雌激素自1拟6年首次被报本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种植物雌激素活性成分筛选的构建方法，其特征在于按下列步骤进行：ａ、利用基因工程技术构建ｐＥＲα表达载体；ｂ、将报告基因载体ｐＥＲＥ－ｌｕｃ与雌激素受体表达载体ｐＥＲα以１∶１０－１０∶１的质量比共转染人乳腺癌ＭＣＦ－７细胞；ｃ、转染２４ｈ后，加入植物雌激素待检测样品，２４－４８ｈ时检测荧光素酶的表达，即可筛选到植物雌激素活性成分。

【技术特征摘要】
1.一种植物雌激素活性成分筛选的构建方法，其特征在于按下列步骤进行a、利用基因工程技术构建pERα表达载体；b、将报告基因载体pERE-luc与雌激素受体表达载体pERa以1 10-10 1的质量比共转染人乳腺癌MCF-7细胞；C、转染24h后，加入植物雌激素待检测样品，24-48h时检测荧光素酶的表达，即可筛选到植物雌...

【专利技术属性】
技术研发人员：马海蓉，魏华波，曹旭，阿吉艾克拜尔·艾萨，
申请(专利权)人：中国科学院新疆理化技术研究所，
类型：发明
国别省市：65