本发明专利技术公开了一种精浆锌浓度定量检测试剂盒，R1试剂包括氯化铵110-120mmol/L；氟化铵260-280mmol/L；十二烷基硫酸钠30-45mmol/L；氨水70-90mmol/L；甲醇480-510mmol/L；填充剂0.5-3.0％；防腐剂0.01-0.1％；显色剂0.05-0.2mmo；锌标准液包括硫酸锌2-6mmol/L；防腐剂0.01-0.1％。本发明专利技术还公开了精浆锌浓度定量检测试剂盒在检测精浆锌浓度中的应用。本发明专利技术仅采用2种液体试剂，可于4℃保存并且不会出现分层或沉淀情况，试剂中的某些成分会屏蔽掉样本中的镁离子的干扰；样本不需去蛋白，与全自动生化仪配套使用，简化了步骤，节省了试剂，降低了人为误差，自动化、规模化的检测，在提高检测结果准确性和可靠性的同时，大大提高了检测效率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医学检验测定
，涉及一种体外诊断用试剂盒及其检测方法， 具体地说是一种精浆锌浓度定量检测试剂盒及其应用。
技术介绍
在男性不育相关研究中，精浆锌浓度的检测是评估前列腺功能的最可靠的生化指标之一。精液中的锌直接参与精子的生成、成熟和获能过程，还可保护精子膜，通过延缓精子细胞膜的脂质过氧化作用从而维持精子活力，对精子活力、运动性和功能都有着重要得作用。另外，精液中的锌对精子顶体酶、精子核染色质解聚都有可逆性抑制作用，使精子能顺利通过透明带和放射冠与卵子结合，进而保证精子的质量、受精能力和生精功能正常。研究表明，精子活力良好者与低下者相比，精浆中锌的浓度有着显著的差异。精浆中锌的含量明显升高时，多见于阻塞性无精子症和死精子症患者中；精浆中锌的含量降低时，多见于患有前列腺炎等影响前列腺分泌功能以及精浆不液化的患者中。目前，精浆中锌浓度定量检测的方法主要是化学比色法，多为手工或半自动操作， 加样程序多，所用试剂量大，试剂和样品混勻一定的时间后，通过分光光度计逐一比色测定，然后根据公式计算出结果，一次只能测定一个项目，耗费了大量的时间和人力，而且不同人之间的操作误差较大。现在，临床生化检验基本上都实现了自动化分析。全自动生化仪就是将原始手工操作过程中的取样、混勻、温育(37°C)检测、结果、计算、判断、显示和打印结果及清洗等步骤全部或者部分自动运行，由于其测量速度快、准确性高、消耗试剂量小，现已在各级医院、 防疫站、计划生育服务站等得到了广泛的应用，配合使用可大大提高常规生化检验的效率及收益。遗憾的是，截止到目前，无论是国外还是国内，对于精浆锌项目的检测，除了早期的科研成果外，尚没有一种可与全自动生化仪相配套的、商品化的检测试剂盒问世，因此，建立一种与全自动生化仪相配套使用的精浆锌浓度检测试剂盒及检测方法就显得尤为迫切和重要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，填补市场上的空缺，提供一种与全自动生化仪相配套使用的精浆锌浓度定量检测试剂盒。本专利技术的另一目的在于提供所述精浆锌浓度定量检测试剂盒在检测精浆锌浓度中的应用。为解决上述技术问题，本专利技术采用了如下的技术方案1、一种精浆锌浓度定量检测试剂盒，包括Rl试剂和锌标准液；其中，1) Rl试剂是包括以下含量的组份氯化铵110-120mmol/L ；氟化铵260-280mmol/L ；十二烷基硫酸钠30-45mmol/L;氨水70-90mmol/L ；甲醇480_510mmol/ L ；填充剂0.5-3.0%;防腐剂0.01-0.1%;显色剂0. 05-0. 2mmo ；2)锌标准液是包括以下含量的组份硫酸锌2-6mmol/L ；防腐剂0.01-0.1%;其中，所述显色剂为1-(2_吡啶偶氮)-2-萘酚或4-(2-吡啶偶氮)_间苯二酚；所述防腐剂为叠氮钠、硫柳汞、庆大霉素或ProClin系列防腐剂中的任意一种；所述填充剂为 Triton X-100 或 Triton X-114。精浆锌浓度定量检测试剂盒在检测精浆锌浓度中的应用。所述的应用精浆锌浓度定量检测试剂盒在检测精浆锌浓度中的应用，包括以下步骤1)样品制备新鲜精液液化后通过3000 5000rpm离心10 20min，所获得的上清液即是；2)在全自动生化仪的操作软件上输入基本参数如下检测项目Zn ；样品试剂比1 100;检测方法终点法；定标方法单点定标或两点定标；主波长540-560nm ；反应方向上升；反应时间300-600秒；3)定标操作用锌标准液进行定标，仪器会根据锌标准液的浓度及其吸光度值， 得出一个锌浓度和吸光度之间的关系式Y = AX(单点定标)或Y = AX+B(两点定标)；其中，单点定标的常数A或两点定标的常数A、B在定标结束后自动给出，Y代表锌标准液的浓度，X代表锌标准液的吸光度；4)样本检测将制备好的样本和Rl试剂放在全自动生化仪的相应位置上，输入样本的检测信息后，开始检测；测试结束后，仪器根据定标关系式自动计算出样本中锌的浓度，单点定标关系式Y = AX，或两点定标关系式Υ = ΑΧ+Β其中，X即样本的吸光度，在全自动生化仪上自动测定给出，单点定标关系式中的常数A或两点定标关系式中的常数A、B在定标结束后为已知。所述Rl试剂中，氨水的浓度为70-90mmol/L，用于为反应提供适宜的碱性反应条件；氯化铵、氟化铵的含量分别为100-120mmOl/L、260-280mmOl/L，该范围是样本中镁离子的有效结合量，可有效消除样本中镁离子的干扰；十二烷基硫酸钠的含量为25-45mmol/ L，是发挥其作用的有效用量，用于使反应生成的有色物质溶于反应混合液中；甲醇的含量为480-510mmol/L，是发挥其作用的有效用量，用于显色剂的溶解；填充剂为曲拉通 X-IOO (Triton X-100)，其含量为2. 0-5. 0%，是发挥其作用的有效用量，用于稳定Rl试剂， 使其在2 8°C环境中不会出现分层或沉淀现象，另外，填充剂还可以是其它具有类似功能的物质如曲拉通X-100 (Triton X-114)等所述Rl试剂中，显色剂为1-(2_吡啶偶氮)-2_萘酚 (l-(2-pyridylazo)-2-naphthol, PAN),或 4-(2-吡啶偶氮)-间苯二 酚 (4- (2-pyridylazo) -resorcinol, PAR)，用作样本中锌的显色底物；显色剂的含量为 0. 05-0. 15mmol/L，低于其下限0. 05mmol/L时，会导致试剂盒的线性范围降低，颜色变化不是很明显，高于其上限0. 15mmol/L时，会使颜色反应过深，超出全自动生化仪的吸光度检出范围，在0. 05-0. 15mmol/L范围内，显色剂的浓度越高，显色反应越深，吸光度越大。所述防腐剂为叠氮钠，含量为0.01-0. 1%，该范围在有效杀菌的同时不会对反应起任何副作用，可延长试剂盒的有效期；还可以是其它具有防腐作用的硫柳汞、庆大霉素或 ProClin系列防腐剂中的任意一种，在缓冲溶液中起防腐的作用，可以延长试剂的有效期。上述的检测方法，所述步骤1)中，所制备的精浆样本可于分离当天检测，也可于-20°C以下冻存备用，至少可保存2周以上，但应避免反复冻融；所述步骤2)中，样本试剂比应根据全自动生化仪的参数而定，应考虑到仪器的最小加样量，比色皿的反应液体积范围等；所述步骤3)中，定标模式可以自行选择，可以选用单点定标，即单用一个锌标准液进行定标；也可以选用两点定标，即用蒸馏水作为一个浓度点，锌标准液作为另外一个浓度点进行定标；所述步骤4)中，当样本中锌的浓度过高，超出试剂盒的线性范围时，应用生理盐水稀释后重测，结果乘以稀释倍数即可。本专利技术的检测方法是终点法，检测原理是，样本中的锌与显色剂PAN发生反应，生成有色复合物，该复合物在540-560nm波长处有最大吸收峰，通过监测其在540-560nm波长处的吸光度，进而计算出样本中锌的浓度。与现有技术相比，突出的技术效果在于1、本试剂盒采用终点法检测精浆样本中锌的浓度，仅采用2种液体试剂，可于 2_8°C保存备用，所加入的特殊填充剂，使试剂盒在2-8°C低温条件下不会出现分层或沉淀现象，克服了以往检测精浆锌至少需要3 5种试剂，本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种精浆锌浓度定量检测试剂盒，其特征在于，包括Ｒ１试剂和锌标准液；其中，１）Ｒ１试剂是包括以下含量的组份：氯化铵 １１０－１２０ｍｍｏｌ／Ｌ；氟化铵 ２６０－２８０ｍｍｏｌ／Ｌ；十二烷基硫酸钠３０－４５ｍｍｏｌ／Ｌ；氨水 ７０－９０ｍｍｏｌ／Ｌ；甲醇 ４８０－５１０ｍｍｏｌ／Ｌ；填充剂 ０．５－３．０％；防腐剂 ０．０１－０．１％；显色剂 ０．０５－０．２ｍｍｏ；２）锌标准液是包括以下含量的组份：硫酸锌 ２－６ｍｍｏｌ／Ｌ；防腐剂 ０．０１－０．１％；其中，所述显色剂为１－（２－吡啶偶氮）－２－萘酚或４－（２－吡啶偶氮）－间苯二酚；所述防腐剂为叠氮钠、硫柳汞、庆大霉素或ＰｒｏＣｌｉｎ系列防腐剂中的任意一种；所述填充剂为Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００或Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１１４。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：高建，陆金春，陈晓慧，
申请(专利权)人：南京欣迪生物药业工程有限责任公司，
类型：发明
国别省市：84
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