本发明专利技术公开了一种具有抑草功能的水稻的实验室快速筛选方法，利用具有显著抑草功能水稻新品种的根与根际琼脂浸提液能明显抑制杂草生长的特性，通过琼脂培养促使水稻成苗，从而快速获得根与根际琼脂浸提液，再利用该浸提液培养已破除休眠的稗草，观察其生长情况，测定其发芽率、根长和苗长，鉴定抑草性能，筛选出具有高抑草功能的水稻。本发明专利技术具有简单、快速、结果准确等特点，能广泛应用于抑草水稻辅助育种。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及水稻筛选方法，具体是一种具有抑草功能的水稻实验室快速筛选方法。
技术介绍
我国是世界第一人口大国，也是世界主要的农业国之一。水稻是我国最重要的粮食作物。然而，水稻在其生长发育过程中常受到杂草的胁迫作用，杂草的生长每年可使全世界谷物的损失达到10%以上。特别是在直播稻中普遍存在的除草难的问题，更导致水稻的大规模减产。防治水稻杂草的途径主要有两种一是利用化学除草剂，这种方法治标不治本，并造成环境及稻米的严重污染；另一种是利用不同水稻材料对杂草的抑制作用，筛选具有显著抑草功能的水稻新品种，从根本上解决水稻杂草的危害问题。然而，已有研究往往局限于利用莴苣等种子生长研究水稻品种的叶片和根本身的抑草性能或者通过大田筛选进行鉴定。这些方法或是不具有代表性或是试验周期太长，难以实现快速、准确地鉴定其抑草性能。
技术实现思路
本专利技术提供了，其操作简单，快速，准确性好。为实现上述目的本专利技术采用如下技术方案，其特征在于包括以下步骤(1)水稻种子的消毒处理分别取待检测抑草性能不同的水稻种子各40粒分别装入不同的网袋中，再用1-1. 5mol/LHN03浸泡后，用蒸馏水洗多次，然后用8_12 %的H2A处理 10min-20min，再用蒸馏水洗多次次后，待用；(2)水稻种子的浸种催芽将经步骤(1)消毒处理过的水稻种子，连同网袋一起浸入装有蒸馏水的大烧杯中，置于27-30°C的恒温箱中浸种，浸种到种子即将破胸时取出，置于放有滤纸的培养皿中， 并放置在27-30°C左右的恒温箱中催芽，直到根和芽的长度约为粒长的一半左右时，停止催芽，从恒温箱中取出供试验所用；(3)培养基配制将琼脂条或琼脂粉加入到蒸馏水中，并加热煮沸使琼脂溶化，然后再分装在培养瓶里，放置，冷却，制得所需的培养基，要求每IOOml蒸馏水中，加入琼脂条或琼脂粉 1. 8-2. 2克，每个培养瓶中装入培养基98-102毫升；⑷水稻培养选取步骤⑵芽已催好的不同水稻材料种子各18-22粒，整齐排列于装有培养基的培养瓶中，置于人工气候培养箱中光照培养，培养箱中的温度为29-30°C，湿度为74-76%，待供试水稻长到苗期，约12天，收集供试的不同水稻根与根际琼脂各18-22毫升， 待用；(5)供试水稻根与根际琼脂提取液的制备将步骤(4)收集的根与根际琼脂分别装入另一培养瓶中，再向每个瓶中加入 38-42ml蒸馏水，让根与根际琼脂浸泡在蒸馏水中，将所有的培养瓶置于人工气候培养箱里，人工气候培养箱温度为^-30°C，当根与根际琼脂在蒸馏水中浸泡72小时后，将培养瓶从人工气候培养箱里取出，将瓶中的琼脂搅拌均勻，再离心分离，取上层清液，得根与根际琼脂提取液，将提取液放入冰箱种保存，供生物测试用；(6)提取液的生物检测选取步骤(5)提取的不同水稻的根与根际琼脂提取液各9-10ml，放入装有滤纸的不同培养皿内，每皿放50粒稗草种子，以蒸馏水为对照，将培养皿放入人工气候培养箱(温度^°C，湿度75% )，每隔M小时记录萌发情况，5天后，测量每皿的发芽率、根长、苗长，试验设3个重复；(7)统计分析与数据处理所有数据用SPSS17. 0软件进行分析，获得的原始数据均转化为抑制指数^(inhibitoiT rate)，作为化感作用指标进行统计分析，数据取平均值，按(1)式计算抑制率A = (1-B/C) X100%(1)式中，A-抑制率(IR)，B-处理组稗草的发芽率或根长或苗长，C-对照组稗草的发芽率根长或苗长，IR > 0为抑制作用，IR < 0为促进作用。所述的，其特征在于所述的水稻种子为无虫蚀、成熟饱满的种子。所述的具有抑草功能的水稻的实验室快速筛选方法，其特征在于步骤( 浸种催芽过程中，每池换一次水，把已破胸的种子取出。本专利技术的有益效果本专利技术方法与大田试验方法相比具有操作简单，快速，准确性好等优点。 附图说明图1为水稻根与根际琼脂共同水浸液对稗草发芽率的影响。图2为水稻根与根际琼脂共同水浸液对稗根长的影响。图3为水稻根与根际琼脂共同水浸液对稗苗长的影响。具体实施例方式一、供试材料与仪器1、供试水稻种子材料选用大田已鉴定的对稗草、莎草等杂草的化感作用存在显著差异的水稻材料 6170、6173、6177、6180、4059、加兴 8 号、93-067、双直 6181，具体抑草情况见表 1。表1大田鉴定的不同抑草稻的抑草性能差异供试水稻材料抑草性能4059较强6173较强6177较强6180较强双直6181待测6170较弱加兴8号较弱93-067较弱2、供试杂草种采用储藏12个月并通过冷冻处理已打破休眠的稗草种子作为供试杂草种。试验仪器TGL-16G台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；IRX-258D智能人工气候培养箱(杭州钱江仪器设备有限公司)。二、实验室快速鉴定具体过程1、水稻种子的消毒处理取上述待检测抑草性能的不同水稻材料(6170、6173、6177、6180、4059、加兴8号、 93-067、双直6181)无虫蚀、成熟饱满种子40粒装入网袋中，用lmol/LHN03浸泡30min，蒸馏水水洗3次，然后用10%的H2O2处理10min-20min，再用蒸馏水洗3次，待用；2、水稻种子的浸种催芽将处理好的不同水稻材料种子的网袋用橡皮筋绑好，全部浸入装有蒸馏水的大烧杯中。置于3o°c左右的恒温箱中浸种到种子即将破胸，期间隔池换一次水，把已破胸的种子取出，置于放有滤纸的培养皿中，并放置在30°c左右的恒温箱中催芽，直到根和芽的长度约为粒长的一半左右，可以供试验所用。3、培养基配制根据上述待检测抑草性能不同水稻材料的个数，计算所需的培养基的量(1个需要100毫升)，并取相同量的蒸馏水，每IOOml蒸馏水中，加入琼脂条或琼脂粉2克，共800 毫升，加热煮沸使琼脂溶化，用250毫升培养瓶分装，每个培养瓶中装入100毫升培养基，放置，冷却待用；4、水稻培养过程选取待检测抑草性能不同水稻材料的已催芽的种子各20粒，整齐排列于培养瓶中的培养基上，置于人工气候培养箱中温度^rc,湿度75%下光照培养。待供试水稻长到苗期叶)后，收集供试水稻根与根际琼脂约20毫升，待用；5、水稻根与培养琼脂提取液的制备收集的20毫升根与琼脂放入培养瓶，加入40ml蒸馏水，放入人工气候培养箱 (300C )浸泡72小时后，搅拌均勻，离心(5000rpm) lOmin，取上清液，即得根与琼脂提取液，6放入冰箱种保存，供生物测试用。6、提取液的生物检测选取待检测抑草性能不同水稻材料的根与琼脂提取液，每种各取8ml，放入装有滤纸0层)的培养皿内，每皿放50粒稗草种子，以蒸馏水为对照。将培养皿放入人工气候培养箱(温度^rc,湿度75%)，每隔M小时记录萌发情况。5天后，测量发芽率、根长、苗长， 试验设3个重复。7、统计分析与数据处理所有数据用SPSS (社会科学统计软件包)17. 0软件进行分析。获得的原始数据均转化为抑制指数^(inhibitoiT rate)，作为化感作用指标进行统计分析，数据取平均值，按(1)式[1]计算抑制率A = (1-B/C) X100%(1)式中，A-抑制率(IR)，B-处理组稗草的发芽率或根长或苗长，C-对照组稗草的发芽率或根长或苗长，IR > 0为抑制作用，IR本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种具有抑草功能的水稻的实验室快速筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：（１）水稻种子的消毒处理分别取待检测抑草性能不同的水稻种子各４０粒分别装入不同的网袋中，再用１－１．５ｍｏｌ／ＬＨＮＯ３浸泡２８－３２ｍｉｎ后，用蒸馏水洗多次，然后用８－１２％的Ｈ２Ｏ２处理１０ｍｉｎ－２０ｍｉｎ，再用蒸馏水洗多次次后，待用；（２）水稻种子的浸种催芽将经步骤（１）消毒处理过的水稻种子，连同网袋一起浸入装有蒸馏水的大烧杯中，置于２７－３０℃的恒温箱中浸种，浸种到种子即将破胸时取出，置于放有滤纸的培养皿中，并放置在２７－３０℃左右的恒温箱中催芽，直到根和芽的长度约为粒长的一半左右时，停止催芽，从恒温箱中取出供试验所用；（３）培养基配制将琼脂条或琼脂粉加入到蒸馏水中，并加热煮沸使琼脂溶化，然后再分装在培养瓶里，放置，冷却，制得所需的培养基，要求：每１００ｍｌ蒸馏水中，加入琼脂条或琼脂粉１．８－２．２克，每个培养瓶中装入培养基９８－１０２毫升；（４）水稻培养选取步骤（２）芽已催好的不同水稻材料种子各１８－２２粒，整齐排列于装有培养基的培养瓶中，置于人工气候培养箱中光照培养，培养箱中的温度为２９－３０℃，湿度为７４－７６％，待供试水稻长到苗期，约１２天，收集供试的不同水稻根与根际琼脂各１８－２２毫升，待用；（５）供试水稻根与根际琼脂提取液的制备将步骤（４）收集的根与根际琼脂分别装入另一培养瓶中，再向每个瓶中加入３８－４２ｍｌ蒸馏水，让根与根际琼脂浸泡在蒸馏水中，将所有的培养瓶置于人工气候培养箱里，人工气候培养箱温度为２９－３０℃，当根与根际琼脂在蒸馏水中浸泡７２小时后，将培养瓶从人工气候培养箱里取出，将瓶中的琼脂搅拌均匀，再离心分离，取上层清液，得根与根际琼脂提取液，将提取液放入冰箱种保存，供生物测试用；（６）提取液的生物检测选取步骤（５）提取的不同水稻的根与根际琼脂提取液各９－１０ｍｌ，放入装有滤纸的不同培养皿内，每皿放５０粒稗草种子，以蒸馏水为对照，将培养皿放入人工气候培养箱（温度２９℃，湿度７５％），每隔２４小时记录萌发情况，５天后，测量每皿的发芽率、根长、苗长，试验设３个重复；（７）统计分析与数据处理所有数据用ＳＰＳＳ１７．０软件进行分析，获得的原始数据均转化为抑制指数ＩＲ（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｒａｔｅ），作为化感作用指标进行统计分析，数据取平均值，按（１）式计算抑制率：Ａ＝（１－Ｂ／Ｃ）×１００％ （１）式中，Ａ－抑制率（ＩＲ），Ｂ－处理组稗草的发芽率或根长或苗长，Ｃ－对照组稗草的发芽率根长或苗长，ＩＲ＞０为抑制作用，ＩＲ＜０为促进作用。...
【技术特征摘要】
1.一种具有抑草功能的水稻的实验室快速筛选方法，其特征在于包括以下步骤(1)水稻种子的消毒处理分别取待检测抑草性能不同的水稻种子各40粒分别装入不同的网袋中，再用1-1. 5mol/LHN03浸泡后，用蒸馏水洗多次，然后用8_12 %的H2A处理 10min-20min，再用蒸馏水洗多次次后，待用；(2)水稻种子的浸种催芽将经步骤(1)消毒处理过的水稻种子，连同网袋一起浸入装有蒸馏水的大烧杯中，置于27-30°C的恒温箱中浸种，浸种到种子即将破胸时取出，置于放有滤纸的培养皿中，并放置在27-30°C左右的恒温箱中催芽，直到根和芽的长度约为粒长的一半左右时，停止催芽， 从恒温箱中取出供试验所用；(3)培养基配制将琼脂条或琼脂粉加入到蒸馏水中，并加热煮沸使琼脂溶化，然后再分装在培养瓶里， 放置，冷却，制得所需的培养基，要求每IOOml蒸馏水中，加入琼脂条或琼脂粉1. 8-2. 2克， 每个培养瓶中装入培养基98-102毫升；(4)水稻培养选取步骤( 芽已催好的不同水稻材料种子各18-22粒，整齐排列于装有培养基的培养瓶中，置于人工气候培养箱中光照培养，培养箱中的温度为^-30°C，湿度为74-76%，待供试水稻长到苗期，约12天，收集供试的不同水稻根与根际琼脂各18-22毫升，待用；(5)供试水稻根与根际琼脂提取液的制备将步骤(4)收集的根与根际琼脂分别装入另一培养瓶中，再向每个瓶中加入38-4aiil...
【专利技术属性】
技术研发人员：张瑛，滕斌，吴跃进，程太平，吴敬德，宣红，
申请(专利权)人：安徽省农业科学院水稻研究所，
类型：发明
国别省市：34
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