本发明专利技术涉及高效液相色谱法测定庆大霉素普鲁卡因维B12颗粒中盐酸普鲁卡因含量的方法，该方法采用的色谱条件为：色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶柱，以水、乙腈、三乙胺体积比为85∶15∶0.02并用冰醋酸调pH为3.9作为流动相，柱温为35℃，检测波长为292nm，流速为1.0ml/min，进样量为20μl。本发明专利技术方法对庆大霉素普鲁卡因维B12颗粒中盐酸普鲁卡因含量测定结果准确、可靠，方法简便、科学。试验时间短，无干扰峰，理论塔板数达到2000以上，分离度、拖尾因子、不对称度均符合中国药典要求，检测结果良好。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物含量测定领域，具体涉及一种高效液相色谱法测定庆大霉素普鲁卡因维B12颗粒中盐酸普鲁卡因含量的方法。
技术介绍
庆大霉素普鲁卡因维B12颗粒为复方制剂，其主要成份为每袋含硫酸庆大霉素 20mg(20000单位)、盐酸普鲁卡因0. lg、维生素B12O. 02mg。硫酸庆大霉素对各种革兰阴性细菌、革兰阳性细菌及幽门螺杆菌均有抗菌作用，其作用机制是抑制细菌蛋白质的合成。盐酸普鲁卡因具有局部麻醉作用，其作用机制在于竞争性地与神经膜脂蛋白牢固结合，阻碍钠离子，阻碍神经纤维的传导。维生素A2是形成消化道正常上皮细胞必须的物质。三者可起到抗菌、止痛和促进胃黏膜修复的作用。原国家批准记载盐酸普鲁卡因采用紫外分光光度法(UV)测其含量，紫外分光光度法具有操作简便，快速易于普及推广等优点，但随着医药科技水平的不断进步，该检验方法在很多产品中发现其存在一些不足之处，针对在相同波长处均有吸收的活性成份其选择性差、灵敏度低、不能准确有效测定目标性成份， 容易给不法人员提供造假工具。采用高灵敏度的分离分析方法一高效液相色谱法可以避免上述技术上存在的不足，在多组份分析中可以把各组份逐一进行有效的分离，产生较强的特征信号进行色谱图记录并提供分析判断，因此，高效液相色谱法已成为目前国内药品检验技术普遍采用的方法。但是，目前尚未发现采用高效液相色谱法来测定庆大霉素普鲁卡因维A2颗粒中盐酸普鲁卡因含量的记载或应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，开创性地把高效液相色谱法应用于测定庆大霉素普鲁卡因维 B12颗粒中盐酸普鲁卡因的含量，以更准确可靠地测定庆大霉素普鲁卡因维^2颗粒中盐酸普鲁卡因的含量。为了实现上述目的，本专利技术提出的高效液相色谱法测定庆大霉素普鲁卡因维B12 颗粒中盐酸普鲁卡因含量的方法，该方法采用的色谱条件为色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶柱；以水、乙腈、三乙胺体积比为85 15 0.02并用冰醋酸调PH为3. 9作为流动相；柱温为;35°C；检测波长为流速为1. OmL/min ；进样量为20 μ L。3本专利技术方法对庆大霉素普鲁卡因维B12颗粒中盐酸普鲁卡因含量测定结果准确、 可靠，方法简便、科学。试验时间短，无干扰峰，理论塔板数达到2000以上，分离度、拖尾因子、不对称度均符合《CP2005年版二部》要求，检测结果良好。具体实施例方式1.仪器与试药采用LC-lOATvp日本岛津高效液相色谱仪，SPD-ΙΟΑνρ紫外检测器，美国制造P/ N(7725i)手动进样器，浙江大学N-2000数据工作站，电子天平为十万分之一分析天平。盐酸普鲁卡因对照品从中国药品生物制品检定所购买，庆大霉素普鲁卡因维B12颗粒样品自产(批号为100501、100801、10090三批次)，盐酸普鲁卡因原料由辽源市百康药业有限责任公司提供(批号090311)，乙腈为色谱级，水为双蒸馏水，其他为分析级试剂。2.色谱条件色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶柱，尺寸为250X4. 60mm，填料粒径为5 μ m。该色谱柱具有出色的HPLC技术——双子星(双晶)技术，在硅胶制造的最后阶段，在其上面移植了一层独特的硅胶-有机层，从而创造出了全新的复合粒子，保护了粒子免受化学物质的侵蚀。以水、乙腈、三乙胺体积比为85 15 0.02并用冰醋酸调PH为3. 9作为流动相， 水优先采用双蒸馏水。紫外检测器的检测波长为^2nm，流速为1. OmL/min，柱温为35°C，进样量为20 μ L0对于流动相的选择，进行了几次摸索试验，用水、乙腈、三乙胺的体积比为 90 10 0.02并用冰醋酸调PH为4. 2作为色谱流动相时，出峰时间推后，理论塔板数低于2000，拖尾稍严重，结果不是很理想，后选择水、乙腈、三乙胺的体积比为85 15 0. 02 并用冰醋酸调PH为3. 9作为流动相时结果比较理想满意。对于紫外检测器的检测波长选择，用含量项下的对照液和供试液在200 400nm 波长段扫描，发现在波长处均有最大的吸收值。故选择该波长为检测波长。3.样品含量测定对照品溶液的制备精密称取经105°C干燥至恒重的盐酸普鲁卡因对照品 10. 20mg置IOOmL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，精密吸取5mL置25mL量瓶中， 加流动相至刻度，摇勻，为对照品溶液。供试品溶液的制备；分别取庆大霉素普鲁卡因维B12颗粒样品5包(批号为 100501、100801、100901)，研细，分别精密称取细粉 0. 4841 , 0. 4816 ，0. 5008 ，置 IOOmL量瓶中，加流动相溶解并稀释到刻度，摇勻，过滤，精密吸取滤液5mL置25mL量瓶中， 加流动相至刻度，摇勻，为供试品溶液。原料样品溶液的制备；精密称取盐酸普鲁卡因原料(批号090311) 10.52mg，置 IOOmL量瓶中，加流动相溶解并稀释到刻度，摇勻，再精密从中吸取5mL，置25mL量瓶中，加流动相至刻度，摇勻，为原料样品溶液。在上述色谱条件下，取对照品溶液、供试品溶液和原料样品溶液各20 μ L，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，再经分析计算得出盐酸普鲁卡因的含量，结果如表1所示。表1样品含量测定结果办匕号 090311 100501 100801 100901 -------含量 99.60% 100.40% 100. 90% 99. 70%用照紫外分光光度法(现行标准)测得3批样品含量结果见表2。表2UV法测定结果批号 100501 100801 100901含量 98.50% 97. 50% 98.60%按照CP2005年版二部盐酸普鲁卡因项下含量测定方法(永停滴定法)测得盐酸普鲁卡因(批号090311)的含量为99.4%。由此可见，用高效液相色谱法测定庆大霉素普鲁卡因维B12颗粒中盐酸普鲁卡因的含量准确而且稳定，方法简单且科学，高效液相色谱法能够用于该含量项目的检验。4.专属性试验对照品溶液的制备精密称取经105°C干燥至恒重的盐酸普鲁卡因对照品IOmg置 IOOmL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，精密吸取5mL置25mL量瓶中，加流动相至刻度，摇勻，使其浓度为20μ g/mL，为对照品溶液。供试品溶液的制备；取庆大霉素普鲁卡因维B12颗粒样品5包内容物，研细，精密称取细粉0. 5g置IOOmL量瓶中，加流动相溶解并稀释到刻度，摇勻，滤过，精密吸取滤液5mL 置25mL量瓶中，加流动相至刻度，摇勻，使其浓度为20 μ g/mL,为供试品溶液。空白样品溶液的制备按国家标准中的庆大霉素普鲁卡因维B12颗粒处方制得不含盐酸普鲁卡因的阴性样品颗粒，按供试品溶液的制备方法制成空白样品溶液。精密吸取对照品溶液、供试品溶液及空白样品溶液各20 μ L，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果表明空白样品不干扰供试品的含量测定。5.线性考察储备溶液的制备精密称取经105°C干燥至恒重的盐酸普鲁卡因对照品10. 24mg 置IOOmL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇勻，为储备溶液。分别精密吸取储备溶液0. 5mL、l. OmL,3. OmL,5. OmL,7. OmL,9. OmL 置 25ml 量瓶中加流动相至刻度摇勻，即得各浓度溶液。分别精密吸取20 μ L，注入高效液本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．高效液相色谱法测定庆大霉素普鲁卡因维Ｂ１２颗粒中盐酸普鲁卡因含量的方法，所述方法采用的色谱条件为：色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶柱；以水、乙腈、三乙胺体积比为８５∶１５∶０．０２并用冰醋酸调ＰＨ为３．９作为流动相；柱温为３５℃；检测波长为２９２ｎｍ；流速为１．０ｍＬ／ｍｉｎ；进样量为２０μＬ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：艾建高，孙伟东，
申请(专利权)人：宁波双伟制药有限公司，
类型：发明
国别省市：33
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