组织工程化移植物的处理方法技术

本发明专利技术公开了一种组织工程化移植物的处理方法，它包括步骤：（ａ）在３７±２℃将骨移植物或软骨移植物和成骨诱导液或成软骨诱导液放置在一容器中２小时－１４天；和（ｂ）从容器中取出骨移植物或软骨移植物作为移植手术准备材料。所述的方法可短期保存移植物，它不会给移植物带来损伤，而且可以保持其良好的生理性能，同时成本低廉且便于操作。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学工程领域，尤其涉及组织工程化移植物的保存方法。技术背景组织工程移植物的产业化需要有大批量产品的生产和临床使用，更重要的 是，在组织缺损病人急需组织移植时，希望立即提供可移植的工程化产品。为 了縮短工程化移植物构建过程所需的时间，尽快提供可供移植的缺损组织或部 位的替代材料，必需解决组织工程化移植物的保存问题。根据保存温度不同，保存方式可以分为常温保存和低温保存。对于有活性 的组织工程产品，在其保存期间应尽量降低甚至关闭所有的生化反应，而温度 是控制生化反应的重要因素，降低储存温度可以极大地抑制组织内的生化反应。目前使用最多的低温保存温度是4t:和深低温(-196°C) 。 4'C条件下，细 胞内外仅存有少量生化反应，研究表明，4。C条件下，细胞的活性呈逐渐下降 的趋势，而且伴随着细胞水肿、核固縮、空泡形成等形态学的改变。可见，4 。C保存对细胞的活性还是有损伤，故临床主要应用于短时间内(24小时内)保 存组织和器官。在-196'C条件下，细胞内外的反应都会终止，但是由于低温冻 存操作相对复杂，对仪器以及冻存方案要求较高，而且在降温过程中细胞内形 成的冰晶会在降温和复温过程中对细胞造成冰晶损伤和溶质损伤，使其在组织 和器官保存中的应用受到很大限制，其在组织工程领域的使用也只限于种子细 胞冻存的研究阶段，目前尚未组织工程复合物低温冻存的研究和报道。在37t:下，细胞内大多数酶的活性都处于最高水平，各种酶促反应、氧化 反应也最为活跃，细胞活性、功能都维持在相对较高水平。但由于新陈代谢旺 盛，也会由此带来在体外细胞、组织的活性不能较长时间地保持的问题。因此 目前尚无理想的保存液与之配合，也没有在此温度下细胞、组织保存的研究报 道。目前常用的组织、器官保存液有Euro-Collins液、SackII液、UV液等。 主要用于4r下短时间内(24小时内)保存组织和器官，目前尚无保存液在常温下或者37C较长时间保存器官和组织。对于急需使用的移植物，如果仍然采用低温或深低温保存，不但耗时耗力、 成本极高，而且会因为要经过复苏等过程给细胞带来损伤。因此，本领域迫切需要一种可短期保存移植物的方法，它不会给移植物带 来损伤，而且可以保持其良好的生理性能，同时成本低廉且便于操作。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种。 本专利技术的另一个目的是提供成骨诱导液或成软骨诱导液的一种用途。在本专利技术的第一方面，提供了一种，它包括步骤(a) 在37土2'C将骨移植物或软骨移植物和成骨诱导液或成软骨诱导液放置 在一容器中2小时一14天；和(b) 从容器中取出骨移植物或软骨移植物作为移植手术准备材料。 在另一优选例中，所述骨移植物中单位体积中成骨样组织占30 — 80%;所述软骨移植物中单位体积中成软骨样组织占40 — 70%。在另一优选例中，步骤(a)中是将骨移植物或软骨移植物和新鲜配制的成骨 诱导液或成软骨诱导液放置在一容器中2小时—14天，且不更换诱导液。在另一优选例中，步骤(a)中所述容器是密封容器。在另一优选例中，步骤(a)中是将骨移植物或软骨移植物和新鲜配制的成骨 诱导液或成软骨诱导液放置在一容器中3 — 10天。在另一优选例中，步骤(a)中是将骨移植物或软骨移植物和新鲜配制的成骨 诱导液或成软骨诱导液放置在一容器中4一7天。在另一优选例中，在所述步骤(a)前还包括步骤 (a')移植物在诱导液中培养5 — 9天，每周换液2次。在另一优选例中，所述的骨移植物是骨髓基质干细胞和人脱钙骨复合物。在另一优选例中，所述的成骨诱导液中含有10±5nmol/L地塞米松，10± 5nmol/L P —甘油磷酸钠和50±20 y mol/L2 —磷酸抗坏血酸。在另一优选例中，所述的成骨诱导液中含有10土3nmol/L地塞米松，10± 3nraol/LP —甘油磷酸钠和50± 10 n mol/L2 —磷酸抗坏血酸。在另一优选例中，步骤(a)中的容器由运输工具由一地运送到另一地，所述的运输工具包括汽车、轮船、火车和/或飞机;一地至另一地的距离在500米一10000 公里。在本专利技术的第二方面，提供了一种成骨诱导液或成软骨诱导液在处理骨移 植物或软骨移植物中的应用。据此，本专利技术提供了一种可短期保存移植物的方法，它不会给移植物带来 损伤，而且可以保持其良好的生理性能，同时成本低廉且便于操作。附图说明图1显示了 DNA检测细胞在材料上增殖的情况。 图2显示了 ALP活性测定结果。 图3显示了 ALP比生成率结果。 图4显示了 OCN含量测定结果。 图5显示了0CN比生成率结果。 图6显示了葡萄糖代谢检测结果。 图7显示了乳酸代谢检测结果。 图8显示了氨代谢检测结果。图9显示了葡萄糖、乳酸和氨比生成率结果；其中A显示葡萄糖比生成率结果，B显示乳酸比生成率结果，C显示氨比生成率 结果。具体实施方式本专利技术经过广泛而深入的研究，意外地发现将组织工程化移植物放在新鲜配 制的、相应的诱导液中，可以在37'C保存7天左右。这一发现既能在保存期间使 移植物保持最佳生理活性，又能使移植物不会因为需要经过复苏等过程而遭受损 伤。如本文所用，组织工程化移植物、组织工程移植物和移植物 可互换使用，都是将具有分化潜能的种子细胞接种于生物可降解材料上，通过 体外培养生物材料部分或全部降解后所形成的。本专利技术的组织工程化移植物中优选组织工程化骨移植物或软骨移植物。本专利技术所用的组织工程化骨移植物中的种子细胞可以是本领域常用的，选 自骨髓基质千细胞、真皮成纤维细胞、脂肪干细胞、肌腱细胞、软骨细胞等。 优选骨髓基质干细胞。所述的生物可降解材料选自(i) 可降解性合成高分子材料，例如聚a-羟基酸(如聚乳酸PLA、聚羟基乙 酸PGA、聚羟基丁酸PHB等)、聚酸酐(polyanhydrides)、聚偶磷氮 (polyphosphazenes)、 聚氨基酸(polyamino acid)、 假聚氨基酸 (pesudo—polyamino acid)、 聚原酸酉旨(polyorthoesters)、 聚酉旨尿'院 (polyesterurethane)、聚碳酸酉旨(polycarbonate)、聚乙二醇、聚对二氧六环 酮(polydioxanone)等；(ii) 天然可降解材料，例如胶原(collagen)、明胶(gelatin)、糖氨聚糖 (glycosaminoglycan， GAGs)、壳聚糖(chitosan)、甲壳素(chitin)、海藻酸 盐、藻酸钙凝胶等；各种脱细胞基质；(iii) 可注射性材料，如Pluronic(—种市售的聚环氧乙丙烯商品)、藻酸 ,丐凝胶等；(iv) 上述材料的混合物或复合材料，尤其是高分子材料与天然材料的复合 材料，以及固体材料与可注射性材料的复合材料。如本文所用，和保存方法都是指使 移植物保持生理活性的方法。如本文所用，诱导液和诱导培养液可互换使用，都表示可促进种 子细胞进一步分化、增殖的溶液。本专利技术的诱导液优选本领域所常规使用的成 骨诱导液或成软骨诱导液。本专利技术提供的中将本领域常规使用的诱导 液作为相应移植物的保存液，其中所含成分是本领域常规的。在本专利技术的一个较佳实施例中，所述的用于保存骨移植物的诱导液中含有 10土5nmol/L地塞米松，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组织工程化移植物的处理方法，其特征在于，它包括步骤：　（ａ）在３７±２℃将骨移植物或软骨移植物和成骨诱导液或成软骨诱导液放置在一容器中２小时－１４天；和　（ｂ）从容器中取出骨移植物或软骨移植物作为移植手术准备材料。

【技术特征摘要】
1.一种组织工程化移植物的处理方法，其特征在于，它包括步骤(a)在37±2℃将骨移植物或软骨移植物和成骨诱导液或成软骨诱导液放置在一容器中2小时-14天；和(b)从容器中取出骨移植物或软骨移植物作为移植手术准备材料。2. 如权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述骨移植物中单位体积中 成骨样组织占30_80%;所述软骨移植物中单位体积中成软骨样组织占40 — 70%。3. 如权利要求1所述的处理方法，其特征在于，步骤(a)中是将骨移植物或 软骨移植物和新鲜配制的成骨诱导液或成软骨诱导液放置在一容器中2小时一14 天，且不更换诱导液。4. 如权利要求1所述的处理方法，其特征在于，步骤(a)中所述容器是密封 容器。5. 如权利要求1所述的处理方法，其特征在于，步骤(a)中是将骨移植物或 软骨移植物和新鲜配制的成骨诱导液或成...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔磊，曹谊林，刘广鹏，王衡健，
申请(专利权)人：上海国睿生命科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]