一种铁皮石斛组培菌根化种苗生产方法，其步骤分为：(1)采用固体或液体培养基对菌根真菌进行培养，菌根真菌采用菌根真菌LP1为毛壳菌属(Chaetomiumsp.)；(2)菌根细菌的培养，菌根细菌DP6为固氮菌(Azotobactersp.)；(3)铁皮石斛组培苗培养；(4)组培苗的水培炼苗。采用本发明专利技术提供的铁皮石斛组培菌根化苗的生产方法，不仅促进铁皮石斛组培种苗生长，而且组培苗明显粗壮。移栽后，成活率可达95%以上，生长量大，新芽分蘖多且长势迅猛，抗逆性强。与不接菌根真菌和细菌组培的铁皮石斛苗对照组相比，接菌的铁皮石斛苗比对照植株根系发达，植株节间明显膨大，鲜重提高10~20%。
【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
１．一种铁皮石斛组培菌根化种苗生产方法，其特征在于步骤如下：（１）菌根真菌的培养将菌根真菌ＬＰ１菌株自低温保藏的斜面试管菌种活化后，接于ＰＤＡ平皿中，于２３～２８℃恒温培养１０～１５ ｄ，在菌落边缘打孔成菌片，并以小块接入固体培养基或液体培养基；菌根真菌ＬＰ１为毛壳菌属（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍ ｓｐ．），该菌种保藏于中国药用微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为ＣＰＣＣ ４８０２８６；菌根真菌的固体培养基含有木质素、纤维素、碳、氮等营养素，由选自原料棉籽壳、木屑、碎玉米芯、阔叶树锯末、麦麸中的一种或几种组成，加水，水量为原料的１５０～２００ ｗｔ％；高压灭菌后分别接入经培养所得菌根真菌ＬＰ１，每１００ ｇ培养基接２～３片菌片；真菌用试管、锥形瓶或培养瓶等器皿静置暗培养，待菌丝大部分或全部长满培养基时取出备用；菌根真菌的液体培养基含有葡萄糖、无机盐类成分和天然添加物；菌根真菌的液体培养基用水配制，其中葡萄糖１８～２２ ｇ／Ｌ（优选２０ ｇ／Ｌ），ＫＨ２ＰＯ４ １８～２２ ｇ／Ｌ（优选２０ ｇ／Ｌ），ＭｇＳＯ４ １．２～１．８ ｇ／Ｌ（优选１．５ ｇ／Ｌ），维生素Ｂ１ ８～１２ ｍｇ／Ｌ（优选１０ ｍｇ／Ｌ），天然物：麦麸２５～３５ ｇ／Ｌ （优选３０ ｇ／Ｌ）（煮汁）或马铃薯１８０～２２０ ｇ／Ｌ（优选２００ ｇ／Ｌ）（使用其浸出液），培养基ｐＨ 值为５．６～６．５（优选ｐＨ＝６．０）；高压灭菌后接入经培养所得菌根真菌ＬＰ１，每１００ ｍＬ培养基接入１～２片菌片；真菌用三角瓶或其他容器通气暗培养，盛装量为５０％，置于２３～２５℃振荡，转速１００～１２０ ｒｐｍ，培养２０～３０ ｄ后收获；培养结束后得到液态菌根真菌，可直接使用或用匀浆机打碎培养产物备用；（２）菌根细菌的培养配制无氮培养基：葡萄糖８～１２ｇ／Ｌ，ＮａＣｌ ０．１８～０．２２ ｇ／Ｌ，ＫＨ２ＰＯ４ ０．１８～０．２２ ｇ／Ｌ，ＣａＳＯ４·２Ｈ２Ｏ ０．０８～０．１２ｇ／Ｌ，ＭｇＳＯ４ ０．１８～０．２２ｇ／Ｌ，ＣａＣＯ３ ４～６ ｇ／Ｌ，其余为水；调节ｐＨ值为６．９～７．２，于１２０℃高压灭菌２０ ｍｉｎ后，放入４℃冰箱备用，保存不超过半年；将菌根细菌ＤＰ６自低温保藏的斜面试管菌种活化后，接于上述配制的无氮培养基中，２０～３０℃水浴静止培养１６ ｈ，或者２０～３０℃水浴摇床，转速１００～１２０ ｒｐｍ培养８～１０ ｈ；菌根细菌ＤＰ６为固氮菌（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．），保藏于中国林业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为ＣＦＣＣ１６０５； （３）铁皮石斛组培苗培养本步骤在培养室中培养，温度为２３～２７℃，采用组培特定光谱节能灯（红光：波长６４０～６５０ ｎｍ，蓝光：波长４５０～４６０ ｎｍ）作为光源，每天光照１０～１４ ｈ（优选１２ ｈ）；取野生的生长一年的铁皮石斛的茎进行灭菌处理，将灭菌的石斛茎切成带有茎节的段，接种于诱导培养基 （１／２－１）Ｎ６＋ＢＡ ２．５ ｍｇ／Ｌ，诱导茎节发芽；将芽接种于培养基（１／２－１）Ｎ６＋ＢＡ ２．５ ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ，诱导出大量原球茎；将原球茎接种于培养基（１／２－１）Ｎ６＋ＢＡ １．５ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ １．２ ｍｇ／Ｌ＋５ ｗｔ％香蕉汁，诱导原球茎分化成小芽；将小芽接种于培养基（１／２－１）Ｎ６＋ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ １．５ ｍｇ／Ｌ＋７．５ ｗｔ％香蕉汁中，在此培养基中同时加入备好的液体菌根真菌１．５～３．０ ｍＬ／Ｌ或固体菌根真菌１．５～３．０ ｇ／Ｌ，以及细菌培养液１～２ ｍＬ／Ｌ，在此培养基中小芽生长成小植株；再加入培养液ＢＡ ０．７５ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ２．０ ｍｇ／Ｌ＋１０ ｗｔ％香蕉汁＋蔗糖３ ｗｔ％＋液体菌根真菌１．５～３．０ ｍＬ／Ｌ或固体菌根真菌１．５～３．０ ｇ／Ｌ＋细菌培养液１～２ ｍＬ／Ｌ，其ｐＨ＝５．８，待小芽生长成中植株；最后加入培养液ＢＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ２．５ ｍｇ／Ｌ＋１２．５％ ｗｔ香蕉汁＋３ ｗｔ％蔗糖＋液体菌根真菌１．５～３．０ ｍＬ／Ｌ或固体菌根真菌１．５～３．０ ｇ／Ｌ＋细菌培养液１～２ ｍＬ／Ｌ，其ｐＨ＝５．８，待中植株生长成大植株；（４）组培苗的水培炼苗营养液由以下组分构成：硝酸钾１．０～１．２ ｗｔ‰（优选１．１ ｗｔ‰），硫酸铵０．１８～０．２２ｗｔ‰（优选０．２ ｗｔ‰），硝酸铵０．０８～０．１２ ｗｔ‰（优选０．１ ｗｔ‰），硫酸镁０．１～０．１４ ｗｔ‰（优选０．１２ ｗｔ‰），磷酸二氢钾０．０８～０．１２ ｗｔ‰（优选０．１０ ｗｔ‰），氯化钙０．０４～０．０８ ｗｔ‰（优选０．０６ ｗｔ‰），硫酸锰０．０１～０．０３ ｗｔ‰（优选０．０２ ｗｔ‰），硫酸亚铁０．０２～０．０４ ｗｔ‰（优选０．０３ ｗｔ‰），硫酸锌０．００４～０．...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：赵兴兵，张苏锋，梁经军，高正龙，吴维佳，黄生云，崔晓娟，李杰，
申请(专利权)人：梁经军，
类型：发明
国别省市：43
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