本发明专利技术涉及细菌递送系统，更具体地，本发明专利技术公开了包含药理学活性目标分子的基于螺杆菌的制剂，以及制备和使用所述制剂的方法。具体而言，提供了幽门螺杆菌载体，载体质粒和重组细胞，其包括有效用于针对疾病的治疗性处理和/或接种疫苗的药理学目标分子的序列。在黏膜表面诸如胃黏膜或鼻膜提供所述药理学活性分子的递送，从而提供药理学活性剂的有效和持续的递送。还提供载体和穿梭载体构建体。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物活性剂的体内递送。具体而言，本专利技术涉及使用用于将生物活性 剂直接体内递送到解剖位点的细菌递送系统来治疗，减轻或预防疾病。在一个实施方案中， 细菌递送系统包括螺杆菌属(Helicobacter)或显示将异源核酸递送到表达所述异源核酸 的动物或动物细胞中的螺杆菌特征的细菌。在另一个实施方案中，对所述螺杆菌进行改造 以包含编码异源核酸的DNA载体，其中在感染后，所述核酸载体表达从而将生物活性剂递 送到动物体，尤其是在黏膜上。
技术介绍
存在向患有先天的和获得性疾病的个体长期递送药剂和免疫试剂的持续的需要。 在大多数情形中，这包括每天数次，每日一次或以一定间隔重复施用治疗性化合物。然而， 要理解的是，任何长期治疗或预防性方案具有这样的问题诸如顺应性，副作用和药物抗性。 因此存在鉴定治疗的持续需要，所述治疗通常是100%有效的，无副作用并且是廉价的。近年来研究的用于各种治疗和预防性药剂的一种递送形式是微生物的使用。出于 指导(directing)这些微生物表达外源蛋白质或赋予某些理想的性质的目的，已经将来自 包括细菌、病毒、寄生虫以及哺乳动物的各种生物的目标基因克隆到多种细菌，病毒和分枝 杆菌中。已经将这些微生物用在接种疫苗的程序，基因替代治疗和治疗性组合物递送中。使用微生物体内转化动物(宿主)细胞。可以使用包含不可复制的病毒的基因递 送载体(见，例如美国专利号5，824，544)，裸DNA,(见例如美国专利号6，261，834)，包含重 组表达盒的脂质体(见例如美国专利号6，271，207)来完成宿主细胞的转化。其它的基于 分子的治疗性组合物递送方法包括使用被设计来表达异源表面蛋白质的不可复制的重组 病毒(见，例如美国专利号6，376，236)。最近，药物研究者还已经尝试使用基于重组生物的载体，无生命的载体和裸 DNA，开发用于体内治疗性组合物表达的方法。基于重组生物的载体实例包括重组细菌 (见例如美国专利号5，547，664)和病毒诸如甲病毒属(alphavirus)(见例如美国专利 号6，391，632)，牛痘病毒(vaccinia viruses)(见例如美国专利号6，267，965)，腺病毒 (adenovirus)(见例如美国专利号5，698，202)和腺病毒相关病毒(AAV)(见例如美国专利 号6，171，597)。无生命载体包括脂质基因递送载体构建体诸如DNA/阳离子脂质体复合 物，包封在中性或阴离子脂质体中的DNA和脂质体-包埋的，聚阳离子浓缩的DNA(LPDI和 LPDII)(见，Ropert，1999，Braz J Med Biol Res, 32 (2) 163-9) 已经由各种细菌递送的其它基因的实例包括将志贺氏菌(shigella)的侵入基 因克隆到正常情况下非侵入的大肠杆菌(E.coli)中，使大肠杆菌具有侵入性并因此更 适合于用作疫苗菌株，或将Plasmodium falciparum的疟疾基因克隆到鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonella typhimurium)中，其随后表达这些疟疾蛋白质并且在口服施用所述细菌后，在小鼠中针对疟疾激发诱导特异性细胞毒性T细胞免疫性和保护(见，例如Hone等， 1991，Vaccine,9 :810_816 ；Tacket 等，1992，Infect. Immun. ,60 :536_541 ；Hone 等，1992， J. Clin. Invest. ,90 412-420 ；Chatfield 等，1992，Vaccine, 10 :8_11 ；Tacket 等，1992， Vaccine, 10 443-446 ；禾口 Mims 等，1993，In =Medical Microbiology,Eds. ，Mosby-YearBook Europe Ltd. , London ；Sadoff 等，1988, Science, 240 :336_338 ；Aggrawal 等，1990, J. Exp. Med.，172 1083-1090)。已经将减毒的或毒性更少的志贺氏菌(见，例如Noriega等，1994，Infect. Immun. ,62 :5168_5172 ；美国专利申请号 20020176848)，沙门氏菌(Salmonella)(见例如 美国专利号6，531，313 ；美国专利申请号20030170211)，利斯特氏菌(Listeria)(见例 如，Schafer 等，1992，J. Immunol.，149 :53_59 ；美国专利申请号 20030008839)，和其它的 细菌口服给药以针对随后用这些细菌的更具毒性的形式进行的感染产生免疫性。同样，减 毒的细菌和分枝杆菌生物诸如 Bacille Calmette-Guerin(BCG) (Lagranderie 等，1993， Vaccine, 11 :1283_1290 ；Flynn, 1994, Cell. Molec. Biol.，40(Suppl. 1) :31_36)已经进行 肠胃外给药以针对相关生物诸如M. tuberculosis给出保护。已经被用作载体的一些其它细菌种类包括小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)(van Damme 等，1992， Gastroenterol. ，103 :520_531)禾口 霍舌L 弧 菌(Vibrio cholerae) (Levine 等，1994, In :Vibrio cholerae, Molecular toGlobal Perspective' s, Wachsmuth 等，Eds, ASM Press, Washington, D. C. , 395-414 页)。尽管所有的研究，所有的上述细菌递送系统具有技术难度，需要在这些可以体内 应用前克服这些困难。实际上，大多数细菌系统需要细菌本身产生功能性分子并且取决于 充分减毒从而对于在人中使用是安全但是仍然能够产生生物活性剂的细菌。然而以前使用 的所有的减毒细菌菌株不能够在不导致副作用的前提下，在体内存活过长的时期。更重要 的是，许多这些细菌物种不能将治疗性或预防性药剂递送到动物的黏膜上皮细胞。然而，许 多最重要的治疗性药剂通过黏膜进行吸收；因此，存在对于能够直接将生物活性剂递送到 黏膜的细菌递送系统的需要。授权给Powell等的美国专利号5，877，159，描述了可以在不建立产毒性感染或导 致疾病的情况下侵入黏膜细胞的活细菌由此引入能够由动物细胞表达的编码抗原的真核 表达盒。尽管该方法容许将DNA疫苗递送到黏膜表面，包括易于给药，涉及在发展中国家中 的疫苗递送，其不具有提供可扩增的编码目标基因的mRNA的优势。此外，在Powell等中公 开的细菌不能持续递送。在过去，将非致病性的，非建群性的(non-colonising)，非侵入性的食品等级 的细菌乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)用于将药剂递送到黏膜(见例如英国专利 GB-2278358B)。然而，尽管乳酸乳球菌是非侵入性的，其不能建立能直接将治疗性药剂持续 递送到黏膜上皮细胞的慢性感染。因此，存在对于这样的递送系统的本文档来自技高网...
【技术保护点】
组合物，其包括含有核酸的螺杆菌属细胞，所述核酸包含：（ａ）至少一种编码与分泌信号肽连接的非螺杆菌的药理学活性目标分子的非螺杆菌序列；和（ｂ）能控制所述非螺杆菌序列在所述螺杆菌属细胞中表达的调节序列；其中所述螺杆菌属细胞不是ＤａｐＥ突变菌株。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：巴里·J·马沙尔，
申请(专利权)人：巴里J马沙尔，
类型：发明
国别省市：AU
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