酵母展示脂肪酶催化合成维生素E琥珀酸酯的方法技术

本发明专利技术公开了一种酵母展示脂肪酶催化合成维生素E琥珀酸酯的方法，包括：将维生素E和琥珀酸酐溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50～60℃反应10～14小时，分离、纯化制得维生素E琥珀酸酯；将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；本发明专利技术通过将脂肪酶展示在细胞外，利用该酶制剂催化合成维生素E琥珀酸酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种酵母展示脂肪酶催化合成维生素E 琥珀酸酯的方法。
技术介绍
天然维生素E (生育酚)，是人体内具有多种生理功能的重要脂溶性维生素和天然抗氧化剂，它具有显著的抗氧化、消除体内自由基、消除性障碍、促进血液循环、防止早衰、 预防癌症发生、提高机体免疫力等功能，是一种极其重要的医药和保健原料。然而天然维生素E很容易被氧化，市场上的维生素E产品大多是经过酯化的稳定衍生物。维生素E醋酸、 酯维生素E琥珀酸单酯是主要的维生素E酯化衍生物。其中维生素E琥珀酸单酯(vitamin E succinate)除了具有一般维生素E的功能外，还具有有一些独特的药理功能，如它是良好的催乳激素和生长激素的分泌促进剂，因此生育酚琥珀酸单酯的市场价格远高于一般的维生素E，将α-生育酚转化成琥珀酸酯，是提高维生素E产品附加值的有效途径。目前实现这一转化有化学法和生物酶法，由于化学法存在转化条件苛刻(强酸、碱催化、高温高压)、 无特异性、产物复杂、副产物多、分离难、安全性差等弊端，生物酶法越来越受青睐。脂肪酶是目前维生素酯合成中使用最广泛的酶，但是生产成本高、固定化过程繁杂费本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种酵母展示脂肪酶催化合成维生素Ｅ琥珀酸酯的方法，包括：将维生素Ｅ和琥珀酸酐溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于５０～６０℃反应１０～１４小时，分离、纯化制得维生素Ｅ琥珀酸酯；所述的酵母展示脂肪酶通过如下方法制备：将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａ　ｐａｓｔｏｒｉｓ）ＧＳ１１５，将所得转化子接种于ＢＭＭＹ培养基中，诱导培养７２～１４４小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；所述的重组质粒由原始载体ｐＰＩＣ９Ｋ和依次插入原始载体ｐＰＩＣ９Ｋ中ＭＦα１信号肽下游的脂肪酶基因和毕赤酵母ＧＳ１１５的细胞壁α凝集素基因组成。

【技术特征摘要】
1.一种酵母展示脂肪酶催化合成维生素E琥珀酸酯的方法，包括将维生素E和琥珀酸酐溶于有机溶剂中，加入酵母展示脂肪酶，无氧条件下于50 60°C反应10 14小时，分离、纯化制得维生素E琥珀酸酯； 所述的酵母展示脂肪酶通过如下方法制备将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia paSt0riS)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72 144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母展示脂肪酶；所...

【专利技术属性】
技术研发人员：阮晖，徐娟，地里热巴，周陈伟，王睿之，林吉恒，何国庆，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86