本发明专利技术公开了利用金针菇提取多糖后残渣生产真菌多糖的方法，属于生物活性物质的生产技术领域。该方法利用金针菇提取多糖后的残渣为原料，添加适量的葡萄糖、K2HPO4及MgSO4等营养物质，通过接种虫草菌种，经深层发酵、提取等步骤，从中生产出包含有金针菇多糖和虫草多糖的真菌粗多糖。本方法操作简单，充分利用了废弃资源，粗多糖得率提高2倍，且较传统酶解提取方法降低生产成本50％以上，大幅提高了金针菇的潜在价值。本发明专利技术可在食用菌栽培与加工地区推广应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生产生物活性物质的
，特别是利用金针菇提取多糖后的残渣为原料，经食药用菌发酵生产活性多糖的方法。研究背景金针菇(Flammulina velutipes)又名朴菇，冬菇，隶属真菌门，担子菌纲，伞菌目， 口蘑科，金针菌属。金针菇营养极为丰富，有增智菇和“一休菇”等美称，是世界上著名的食用菌，目前已发展成为第三大食用菌。在我国，金针菇的产量已经超过150万吨。金针菇清嫩爽口，鲜美味香，营养丰富，是一道极为高档的佳肴，具有较高的营养价值。研究报道，金针菇中含较高的蛋白质、碳水化合物和粗纤维、而含脂肪较低，是一种不可多得的高营养食PΡΠ O研究发现金针菇中含有丰富的抗肿瘤有效成分，如多糖、粘多糖、构菌蛋白原等， 其中多糖是金针菇子实体提取物中主要的有效成分之一。大量文献报道金针菇多糖具有免疫调节作用和抗肿瘤作用，而且金针菇多糖的抗肿瘤作用是通过增强免疫功能而介导的。 研究证实，金针菇多糖能增加荷瘤小鼠脾脏重量，提高NK细胞活性和淋巴细胞转化刺激指数，恢复和增强小鼠的免疫功能，促进正常小鼠和荷瘤小鼠的脾细胞分泌IL-2，增加正常小鼠的血清溶血素含量及促进脾细胞介导羊红细胞定量溶血分光光度试验(QSH)。金针菇目前的主要销售方式是鲜菇、软包装(清水、盐渍或调味)和干制，但由于这些产品的附加值比较低，而且很容易受到市场的影响，所以必须走深加工的道路。金针菇多糖国内市场的价格为每公斤1000多元，国际市场为每公斤2000元左右。以往食用菌多糖一般都采用酶解提取的方法，但是这种方法生产成本较高，条件要求比较苛刻；而且， 以往从金针菇中提取到的多糖只占其含量的20%左右，而其余大部分的多糖都仍滞留在残渣中，作为动物饲料或废弃掉，造成了很大的资源浪费。因此，开发利用金针菇提取多糖后的残渣作为原料，进一步从中生产出更多的多糖，是一项变废为宝，减少资源浪费的工作。 经检索利用金针菇提取多糖后的残渣为原料，经深层发酵以进一步生产出食用菌多糖的方法，目前在国内外尚未见有报道。
技术实现思路
本专利技术目的是，针对以往金针菇多糖采用酶解提取效率较低、资源浪费大，生产成本高的缺陷，提供一种利用金针菇提取多糖后的残渣为原料，进一步从中提取生产真菌多糖，以达到充分利用资源，变废为宝，降低生产成本的生产真菌多糖的方法。本专利技术目的通过以下技术方案来实现。，该方法按以下步骤进行(1)种子培养液与生产发酵液的配制所述培养液与发酵液的组分与各组分的重量百分比含量为1)种子培养液葡萄糖 2%,K2HPO4 0. 5%, MgSO4 0.2%，马铃薯 20% ；pH 值 6 ；2)生产发酵液葡萄糖0-2%，K2HPO4 0-0. 5%, MgSO4 0-0. 2%，金针菇提取多糖后经干燥、超微粉碎后的残渣粉末3%，用水补足至100% ；(2)菌种制作将虫草1号菌种接种在PDA斜面培养基上，于25°C恒温培养7天后，置4°C冰箱中备用；(3)菌种接种与培养将步骤( 菌种经活化培养后的菌丝体接入步骤(1) 1)种子培养液中，在下静止培养5天成菌种种子液；(4)生产发酵液的接种与培养将步骤C3)菌种种子液中的菌丝体在无菌条件下水洗、打碎后加入无菌水，配成菌丝体浓度为10mg/ml的菌丝悬浊液；按200mg/升的接种量将菌丝悬浊液接入步骤(1) 生产发酵液中，在25-30°C下震荡发酵培养7天；(5)真菌多糖的提取将步骤(4)的生产发酵液用胶体磨勻浆并加5倍水后，按超声波处理10-40分钟、升温至90-100°C浸提60分钟的工艺重复操作3次；用板框过滤并收集滤液，用旋转蒸发仪将该液减压浓缩至原体积的五分之一后，再加入3倍体积的95 %乙醇进行醇沉；按5000转/分离心10分钟，经干燥、粉碎后得到含金针菇多糖和虫草多糖的真菌粗多糖。所述超声波处理的频率为50-500HZ，功率为100-2000W。本专利技术的有益效果是1、本专利技术根据金针菇多糖提取后残渣的成分组成及虫草的生长特点，以金针菇多糖提取残渣为基础原料，采用接种虫草1号真菌进行深层发酵的方法来进一步生产真菌多糖，不仅利用真菌虫草在生长过程中产生的酶以进一步分解金针菇残渣，使更多残存的金针菇多糖能释放出来，并且能够生产出虫草多糖，获得的金针菇多糖和虫草多糖的真菌混合多糖产量较高；采用本专利技术方法生产的真菌混合多糖，不仅充分地利用了资源，而且较传统酶解提取方法生产成本降低50%以上，具有原料成本低，操作简单，最大程度提高了金针菇的潜在价值，达到了废物利用的目的，并适合规模化生产，具有很高的推广利用价值。2、在含金针菇残渣的生产发酵液中添加适量的营养物质葡萄糖、K2HPO4及MgSO4 后，有利于虫草菌的生长，以粗多糖得率最高的实施例5与实施例7相比较，多糖产量可提高2倍以上。附图说明图1利用金针菇提取多糖后残渣生产真菌多糖的程序框架示意图具体实施例方式通过以下实施例并结合附图对本专利技术作进一步的详细说明，但本专利技术的内容并不局限于此。虫草1号从山东省鱼台县食用菌研究所引进。实施例1 (1)该方法按以下步骤进行(1)种子培养液与生产发酵液的配制所述培养液与发酵液的组分与各组分的重量百分比含量为，其中1)种子培养液葡萄糖 2%,K2HPO4 0. 5%, MgSO4 0.2%，马铃薯 20% ；pH 值 6 ；2)生产发酵液葡萄糖0.5%, K2HPO4 O %，MgSO4 0. 05%,金针菇残渣粉末3 %，用水补足至100% ；(2)菌种制作将虫草1号菌种接种在PDA斜面培养基上，于25°C恒温培养7天后，置4°C冰箱中备用；PDA斜面培养基的具体配方马铃薯20%，葡萄糖2%，琼脂1.5%， 用水补足至100% ；(3)菌种接种与培养将步骤(2)菌种先接种在PDA培养基上，于25°C恒温活化培养7天后，再将其菌丝体接入步骤(1)1)种子培养液中，在下静止培养5天成菌种种子液；(4)生产发酵液的接种与培养用筛网将步骤C3)菌种种子液中的菌丝体进行过滤收集后，在无菌条件下用无菌水水洗3次，放入灭菌的试管中(含直径2毫米的玻璃珠)， 在旋涡混合仪内把菌丝体打成碎片(约2分钟)并配成菌丝悬浊液(在碎片中加入无菌水，使菌丝体的浓度为10mg/ml)，再按200mg/升的接种量将菌丝悬浊液接入步骤(1)2)生产发酵液中，在25°C下震荡发酵培养7天；(5)真菌多糖的提取将步骤(4)的生产发酵液用胶体磨勻浆并加5倍水后，按超声波(50HZ，100W)处理10分钟、升温至100°C浸提60分钟的工艺重复操作3次；用板框过滤并收集滤液，用旋转蒸发仪将该液减压浓缩至原体积的五分之一后，再加入3倍体积的 95%乙醇进行醇沉；按5000转/分离心10分钟，经干燥、粉碎后得含金针菇多糖和虫草多糖的真菌粗多糖，其得率为2. 84g/L。实施例2 (2)本例中，步骤(1)生产发酵液的配方为葡萄糖0.8% ,K2HPO4 0. 2%，MgS040%，金针菇残渣粉末3%，用水补足至100% ；步骤(4)生产发酵液接菌种后在^rc下震荡发酵培养7天；步骤(5)按超声波Q00HZ，300W)处理20分钟、升温至90°C浸提60分钟的工艺重复操作3次；其余步骤工艺同于实施例1，该例真菌粗多糖的得率为3. 85g/L。实施例3 (本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．利用金针菇提取多糖后残渣生产真菌多糖的方法，其特征在于按以下步骤进行：（１）种子培养液与生产发酵液的配制：所述培养液与发酵液的组分与各组分的重量百分比含量为：１）种子培养液：葡萄糖２％，Ｋ２ＨＰＯ４ ０．５％，ＭｇＳＯ４ ０．２％，马铃薯２０％；ｐＨ值６；２）生产发酵液：葡萄糖０－２％，Ｋ２ＨＰＯ４ ０－０．５％，ＭｇＳＯ４ ０－Ｏ．２％，金针菇提取多糖后经干燥、超微粉碎后的残渣粉末３％，用水补足至１００％；（２）菌种制作：将虫草１号菌种接种在ＰＤＡ斜面培养基上，于２５℃恒温培养７天后，置４℃冰箱中备用；（３）菌种接种与培养：将步骤（２）菌种经活化培养后的菌丝体接入步骤（１）１）种子培养液中，在２８℃下静止培养５天成菌种种子液；（４）生产发酵液的接种与培养：将步骤（３）菌种种子液中的菌丝体在无菌条件下水洗、打碎后加入无菌水，配成菌丝体浓度为１０ｍｇ／ｍｌ的菌丝悬浊液；按２００ｍｇ／升的接种量将菌丝悬浊液接入步骤（１）２）生产发酵液中，在２５－３０℃下震荡发酵培养７天；（５）真菌多糖的提取：将步骤（４）的生产发酵液用胶体磨匀浆并加５倍水后，按超声波处理１０－４０分钟、升温至９０－１００℃浸提６０分钟的工艺重复操作３次；用板框过滤并收集滤液，用旋转蒸发仪将该液减压浓缩至原体积的五分之一后，再加入３倍体积的９５％乙醇进行醇沉；按５０００转／分离心１０分钟，经干燥、粉碎后得到含金针菇多糖和虫草多糖的真菌粗多糖。...
【技术特征摘要】
1.利用金针菇提取多糖后残渣生产真菌多糖的方法，其特征在于按以下步骤进行(1)种子培养液与生产发酵液的配制所述培养液与发酵液的组分与各组分的重量百分比含量为1)种子培养液葡萄糖2%,K2HPO40. 5%, MgSO4 0. 2%，马铃薯20% ;pH值6 ；2)生产发酵液葡萄糖0-2%，K2HPO40-0.5%, MgSO4 0-0. 2%，金针菇提取多糖后经干燥、超微粉碎后的残渣粉末3%，用水补足至100% ；(2)菌种制作将虫草1号菌种接种在PDA斜面培养基上，于25°C恒温培养7天后，置 4°C冰箱中备用；(3)菌种接种与培养将步骤( 菌种经活化培养后的菌丝体接入步骤(1)1)种子培养液中，在下静止培养5天成菌种种子液；(4)生产发酵液的接种与培...
【专利技术属性】
技术研发人员：范雷法，张作法，吕国英，潘慧娟，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：86
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