一种具有免疫调节作用的角燕提取物、制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种具有免疫调节作用的角燕有效组分提取物及制备方法和应用。本发明专利技术公开的角燕有效组分提取物是选用角燕头部部位，用盐溶液抽提，有机溶剂沉淀，干燥后获得蛋白质和多糖提取物。该提取物对机体具有免疫调节作用：该提取物经口给予动物３０天后，对动物体重无明显影响，在剂量为０．０８７、０．２６ｇ／ｋｇ的中、高剂量组，可明显提高小鼠的血清溶血素含量、增加脾细胞的溶血空斑数、明显增强小鼠的碳廓清能力、促进小鼠的迟发性超敏反应、促进ＣｏｎＡ诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力、提高ＮＫ细胞的杀伤活性及腹腔巨噬细胞的吞噬能力。提示角燕提取物可明显提高机体ＮＫ细胞活性、巨噬细胞吞噬能力、提高机体细胞免疫及体液免疫功能，因此对机体具有免疫调节作用。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及鱼类有效组分提取物及制备方法，具体涉及一种具有免疫调节作用的角燕有效组分提取物、制备方法和应用。角燕为晚近药材，在我国多种本草中提到了其药用价值。1976年林吕何编著的《广西药用动物》和1977年由中国人民解放军海军后勤部卫生部，上海医药工业研究院编写的《中国药用海洋生物》中最早收载了双吻前口蝠鲼，其后在《中国动物药》、《中国有毒鱼类和药用鱼类》、《中国动物药志》、《海洋趣谈》、《中药药名词典》等书籍均有收载。在上述著作中，对角燕的尾刺、肝、脑、鳃等的药用价值进行了详细的描述。角燕具有活血化瘀、消肿散结、清热透疹、解毒等功效，其尾刺可用来治疗牙痛、妇科疾病、疖疮、治乳腺炎、咽喉炎、痢疾等；肝可以制鱼肝油；脑可以浸酒服，治疗跌打损伤。特别是角燕鳃具有活血化淤、消肿散结、清热透疹、解毒等功效，在治疗小儿麻疹上有相当好的效果，还可治疮疖。但到目前为止，关于角燕的研究仅限于其分布、形态、解剖、化学成分分析等，关于角燕治疗各种疾病的作用机制的研究报道极少，仅有本专利技术人在中国专利申请02136089.8中公开了一种具有抗肿瘤活性成份的角燕提取物。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是采用现代生化技术，从角燕中分离纯化得到一种对机体具有免疫调节作用的有效组分。本专利技术公开的角燕有效组分提取物是选用角燕头部部位，用盐溶液抽提，有机溶剂沉淀获得的蛋白质及多糖类提取物。本专利技术所述角燕有效组分提取物中蛋白质含量大于40％，多糖含量大于0.3％。蛋白质含量按GB/T14771-1993规定的方法测定，多糖含量按卫生部内统法“保健食品中粗多糖的测定方法的实施细则”检验测定。本专利技术所要解决的另一技术问题是公开上述角燕有效组分提取物的制备方法。本专利技术角燕有效组分提取物是通过下述技术方案获得的取角燕头部，清洗干净后匀浆于2～5倍体积的含盐酸盐的缓冲溶液中，高速离心，得沉淀(一)及上清液；上清液用有机溶剂沉淀，得沉淀(二)；沉淀(一)用碱水解，酸中和后，有机溶剂沉淀，得沉淀(三)；合并沉淀(二)及沉淀(三)，加水溶解，真空冷冻干燥，即得角燕有效组分提取物。本专利技术所述的含盐酸盐的缓冲溶液可选用10mmol/L PB溶液或其它磷酸盐缓冲液，其中含0.1～2mol/L盐酸盐和1～5mmol/LEDTA；所述的盐酸盐可选自NaCl、KCl等；所述的有机溶剂可选用乙醇、丙酮等；碱可为NaOH、KOH等；酸可为盐酸、醋酸等。本专利技术所要解决的再一技术问题是公开上述角燕有效组分提取物在制备免疫调节功能药物中的应用。本专利技术所述角燕有效组分提取物具有增加NK细胞杀伤活性、巨噬细胞吞噬能力、提高细胞免疫及体液免疫活性的功能。本专利技术角燕有效组分提取物可作为机体免疫调节保健食品及药物的活性组分，根据保健及治疗需要，与食用及药用辅料制成各种制剂。本专利技术选用ICR小鼠为研究对象，根据角燕提取物的人体推荐剂量为每日0.52g/60kg，本次实验设立低、中、高三个剂量组，分别为0.043、0.087、0.26g/kg，分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍，对照组以蒸馏水灌胃。结果显示，本品对动物体重无明显影响，在剂量为0.087、0.26g/kg的中、高剂量组，可明显提高小鼠的血清溶血素含量、增加脾细胞的溶血空斑数、明显增强小鼠的碳廓清能力、促进小鼠的迟发性超敏反应、促进ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力、提高NK细胞的杀伤活性及腹腔巨噬细胞的吞噬能力。提示角燕提取物可明显提高机体NK细胞活性、巨噬细胞吞噬能力、提高细胞免疫及体液免疫功能。下面通过本专利技术角燕有效组分提取物的详细功效试验，进一步描述本专利技术角燕提取物的免疫调节作用。1.样品性状样品为角燕提取物，内容物为灰色或浅褐色粉末。2.动物来源ICR种小白鼠，合格证号02-22-1，体重18～22克，雄性，由复旦大学实验动物部提供的清洁级动物(SPF动物房饲养)。实验动物饲养温度为22±2℃，相对湿度50-70％，动物房合格证号02-28，动物饲养料，由苏杭实验动物科技发展公司提供。3.剂量设计角燕提取物的人体推荐剂量为每日0.52g/kg，本次实验设立低、中、高三个剂量组，分别为0.043、0.087、0.26g/kg，分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍，对照组以蒸馏水灌胃。4.样品处理取角燕提取物0.043、0.087、0.26g分别加蒸馏水至20ml，即为低、中、高三个剂量组的供试液。5.给样途径灌胃，灌胃容积为0.4ml/20g.d。6.实验方法和结果7.体重动物称重，按体重随机分组，分为16组，每组10只，每四组为一实验组，按剂量设计连续喂养30天，在实验中期和实验末分别称重一次，结果见表1-4。表1角燕提取物(免疫一组)对动物体重(克)的影响组别动物数(只) 初始体重 中期体重 终期体重 增重对照10 20±1.1 27±1.132±1.512±1.1低剂量 10 19±1.2 26±1.031±1.112±0.6中剂量 10 19±1.1 27±1.432±2.113±1.3高剂量 1019±1.026±0.830±1.611±1.8由上表可见，角燕提取物各剂量组与对照组相比，均无显著性差异。表2 角燕提取物(免疫二组)对动物体重(克)的影响组别动物数(只) 初始体重 中期体重 终期体重 增重对照10 19±1.326±1.430±1.811±0.7低剂量 10 19±1.426±1.331±1.612±0.7中剂量 10 20±1.327±2.132±3.212±2.4高剂量 10 19±1.626±2.130±2.813±1.8由上表可见，角燕提取物各剂量组与对照组相比，均无显著性差异。表3 角燕提取物(免疫三组)对动物体重(克)的影响组别动物数(只) 初始体重 中期体重 终期体重 增重对照10 19±1.327±1.032±2.013±2.0低剂量 10 19±1.026±0.731±1.012±0.9中剂量 10 19±1.026±1.131±1.812±1.8高剂量 10 19±1.226±1.231±1.712±0.7由上表可见，角燕提取物各剂量组与对照组相比，均无显著性差异。表4 角燕提取物(免疫四组)对动物体重(克)的影响组别动物数(只) 初始体重 中期体重 终期体重 增重对照10 19±1.026±1.132±2.2 13±2.3低剂量 10 19±1.327±1.432±2.4 13±1.4中剂量 10 20±1.127±1.233±1.8 13±1.6高剂量 10 20±1.427±2.032±2.0 12±0.7由上表可见，角燕提取物各剂量组与对照组相比，均无显著性差异。6.2血清溶血素试验动物连续给样30天后，眼眶采血，颈椎脱臼处死，分离血清。在96孔微量血凝板上加25μl血清，以后各排对倍稀释，每孔加1％SRBC1滴，振荡后室温放置3小时，当血球出现沉落后观察结果。表5 血清溶血素试验结果组别 动物数(只)时间(天) 抗体积数对照 103075.4±35.1低剂量103090.8±25.7中剂量1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种角燕有效组分提取物，其特征在于该提取物是选用角燕头部部位，用盐溶液抽提，有机溶剂沉淀，干燥后获得蛋白质和多糖提取物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋定文，沈先荣，贾福星，储智勇，李树林，陈美华，周菊珍，张敏，
申请(专利权)人：上海澳博海洋生物技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]