用柳氮磺吡啶干涉神经元的死亡的组合物和方法技术

本发明专利技术提供了柳氮磺吡啶作为治疗神经元死亡的有效药剂的新用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及柳氮磺吡啶(sulfasalazine)的新用途，具体来说，涉及通过给予柳氮磺吡啶防止脑疾病中神经元的死亡的方法。对N-甲基-D-天冬氨酸酯敏感的离子化谷氨酸盐受体(NMDA受体)的过度激活会造成神经元的死亡并且还已知可介导各种神经疾病。在大脑受到缺氧-局部缺血性损伤时兴奋神经递质谷氨酸盐会大量累积，它会激活可渗透Ca2+和Na+的离子化谷氨盐受体，然后引起神经元的死亡。NMDA受体的拮抗剂可以显著缓解低血糖、缺氧或缺氧-局部缺血后的脑损伤。因此，NMDA受体拮抗剂就具有保护大脑不受低血糖、缺氧和缺氧-局部缺血损伤的治疗潜力。兴奋毒性似乎对创伤性脑损伤(TBI)后的神经变性起作用。在患有TBI的患者中一种NMDA受体的内源性激动剂喹啉酸的水平会增加到5-到50-倍。喹啉酸在脑脊液中增加并且与TBI患者的死亡率有关。在脑创伤的动物模型中，谷氨酸盐和天冬氨酸盐的水平显著增加。。在碰撞创伤后的鼠脊髓中也可以观察到谷氨酸盐的释放。NMDA受体拮抗剂能够缓解创伤性脑或脊髓损伤后的神经元的死亡。谷氨酸盐在癫痫发作的诱导和传播中起着重要作用。NMDA受体拮抗剂已经在各种癫痫模型中显示出起着抗惊厥药和镇癫痫药的作用。肌萎缩性侧索硬化(ALS)伴有上下运动神经元的变性并且表现为神经萎缩、衰弱和自发性收缩。当ALS的病理仍在研究时，已经预期到兴奋毒性参与了ALS的过程。特别是，ALS患者表现出细胞外谷氨酸盐的水平增加并且在谷氨酸盐的转运中损失。给予兴奋毒性在ALS患者的脊髓中有类似的病理变化。拮抗NMDA受体似乎已被用于帕金森疾病(PD)的治疗。好几种NMDA受体的拮抗剂能够保护多巴胺能神经元不受神经毒素MPTP(1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶)的损害。NMDA受体拮抗剂也能改善左旋多巴所诱发的运动障碍，因此可以提高左旋多巴的治疗效果。两种NMDA受体拮抗剂美金明胺和右美沙芬已经被证实具有益于对PD患者的治疗。亨廷顿舞蹈病(HD)是进行性神经变性疾病主要影响到小型和中等内神经元但却没有使用纹状体中含有somatostatin和神经肽NADPH-黄递酶神经元。HD的这些病理特征可以在纹状体内注射奎宁酸或培养的纹状体神经元暴露于NMDA后观察到，从而提高了NMDA受体介导的神经毒性对HD中选择性的神经元的死亡其作用的可能性。<游离的自由基和脑疾病>游离的自由基可以在缺氧-局部缺血性或创伤性脑和脊髓损伤后在变性脑区内产生。抗氧化剂或清除自由基的措施能够缓解由缺氧-局部缺血或创伤性损伤引起的脑损伤。广泛的证据支持游离自由基在经过神经变性疾病变性而在大脑区内产生，可能由于在ALS中Cu/Zn过氧化物歧化酶的点突变，在PD中增高了谷胱甘肽水平和增高了铁离子水平、在AD中累积铁离子或在HD中线粒体功能障碍。所以，抗氧化剂已经是神经保护防止这种神经变性疾病。。<锌和脑疾病>Zn2+能够介导在癫痫、局部缺血、创伤和阿尔茨海默疾病(AD)所观察到的神经变性过程。癫痫诱导的兴奋毒素卡因酸盐的中枢给药会引起Zn2+易位到好几个前脑区的突触后的变性神经元。用Ca-EDTA阻断Zn2+易位缓解暂时前脑局部缺血或创伤性脑损伤后神经丧失。在AD的细胞外空斑和变性神经元中可以观察到Zn2+，它可能在AD的神经元变性中起作用。本专利技术提供了柳氮磺吡啶的用途和保护中枢神经元免遭中枢神经系统(CNS)的急性或慢性损伤的方法，它包括给有CNS损伤的患者或哺乳动物给予适当剂量和形式的柳氮磺吡啶。本专利技术还提供了柳氮磺吡啶的用途和通过给予适当剂量和形式的柳氮磺吡啶来减少CNS损伤中神经元死亡的方法，其中柳氮磺吡啶能同时防止NMDA-、Zn2+和游离自由基-介导的神经毒性，所述的CNS损伤包括局部缺血、缺氧、低血糖、创伤性脑损伤、创伤性脊髓损伤、癫痫、亨廷顿舞蹈病、帕金森氏疾病、阿尔茨海默疾病或肌萎缩性侧索硬化。图2是一幅绘制了短暂暴露于300μM NMDA后24小时内柳氮磺吡啶抗神经元死亡的剂量-反应作用图。将鼠皮质神经元和神经胶质(DIV12-14)的共培养物暴露于300μM的NMDA或者含有10-1000μM柳氮磺吡啶包涵物的300μM的NMDA 10分钟。通过测定24小时后LDH向洗涤介质中的流入来分析神经元的死亡，平均值±S.E.M.(n＝每个条件8-16个培养基)，换算成相应于暴露于500μM NMDA24小时后所诱导的接近-完全神经元死亡的LDH平均值(＝100％)。Asterisk在使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls试验p＜0.05显示出与相关对照(只有NMDA)有显著差异。图3是一幅绘制的柳氮磺吡啶依赖于剂量对抗NMDA神经毒性的神经保护作用图。将皮质细胞培养物暴露于30-1000μM的NMDA或者在300或1000μM的柳氮磺吡啶存在下暴露于30-1000μM的NMDA 10分钟。通过测定24小时后LDH向洗涤介质中的流入来分析神经元的死亡，平均值±S.E.M.(n＝每个条件8-16个培养基)，换算成相应于暴露于500μMNMDA24小时后所诱导的接近-完全神经元死亡的LDH平均值(＝100％)。Asterisk在使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls试验p＜0.05显示出与相关对照(只有NMDA)有显著差异。图4是一幅绘制柳氮磺吡啶抗NMDA所诱发的细胞内游离Ca2+累积的作用图。将皮质细胞培养物(DIV12)暴露于虚假(sham)洗液(对照)或100μM的NMDA120秒，只用NMDA(实圈)或含有300μM柳氮磺吡啶的包涵物(空圈)。在处理后迅速在填充fluo-3的神经元中分析，平均值±S.E.M.(n＝在每种条件下4-6个玻璃平皿中的55-94随机选择的神经元)，在虚假对照后换算出(＝100％)。Asterisk在使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls试验p＜0.05显示出与相关对照(只有NMDA)有显著差异。图5是一幅绘制的柳氮磺吡啶对NMDA所诱发的45Ca2+摄取的作用图。将皮质细胞培养物(DW12-14)暴露于虚假洗液(对照)或300μM的NMDA，只用NMDA或含有30-100μM柳氮磺吡啶的包涵物。10分钟后通过测定45Ca2+的流入来分析Ca2+的流入，平均值±S.E.M.(n＝在每种条件下12个培养基)。Asterisk在使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls试验p＜0.05显示出与相关对照(只有NMDA)有显著差异。图6是一幅绘制的暴露于50μM的Fe2+24小时后柳氮磺吡啶对神经元的死亡的剂量-反应作用图。将皮质细胞培养物(DIV12-14)暴露于50μM的Fe2+或含有3-100μM柳氮磺吡啶的50μM的Fe2+。24小时后通过测定释放到洗涤介质中的LDH来评价神经元的死亡，平均值±S.E.M.(n＝在每种条件下4-12个培养基孔)。Asterisk在使用ANOVA和Student-Neuman-Keuls试验p＜0.05显示出与相关对照(只有Fe2+)有显著差异。图7是一幅绘制柳氮磺吡啶对暴露于10mM BSO24小时后神经元的死亡的剂量-反应本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种保护中枢神经元免遭中枢神经系统（ＣＮＳ）的急性或慢性损伤的组合物，它在可药用的载体中含有有效保护中枢神经元免遭ＣＮＳ损伤的量的柳氮磺吡啶。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭秉周，柳宝凛，李英爱，
申请(专利权)人：纽若泰克，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]