黄花蝴蝶草的快速繁殖方法技术

本发明专利技术涉及一种黄花蝴蝶草的快速繁殖方法，包括以下步骤：（1）外植体消毒：采用65～75%乙醇和0.1%升汞消毒；（2）无菌苗的获得：采用调整后的MS培养基，培养15～30天，温度25±2℃，光照强度1500Lux，光照时间12小时/天；（3）诱导丛生芽发生：采用调整后的MS培养基，培养14～21天，条件同上；（4）诱导生根：采用调整后的MS培养基，培养7～14天，条件同上；（5）再生植株移栽：再生植株炼苗后移栽。本方法能够明显提高黄花蝴蝶草的无性繁殖系数，繁殖速度快而且操作简便，实现黄花蝴蝶草的规模化微繁殖，是获得大量优质种苗的有效途径。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种组织培养方法，具体地是涉及一种采用组织培养技术对黄花蝴蝶 草进行离体快速繁殖的方法。
技术介绍
植物组织培养是指用植物的任何器官、组织或细胞，在人工控制条件下进行无菌 培养生长发育的过程。该技术取材少，培养植物材料成本低，生长周期短，管理方便。利用 植物组织培养这种快速繁殖技术，能在短时间内繁衍出大量保持母本生物特性和遗传性状 的植株。据了解，我国快速繁殖的植物己有近千种。通常使用的基本培养基有数种，如MS， B5，White，N6等。在组织培养中，植物外植体要在植物生长物质的作用下，经过诱导脱分化、 恢复细胞分裂的能力、影响再分化、促进器官形成等过程。植物外植体繁殖系数的大小，直 接影响着生产后代植株的数量和质量。植物组织培养的基本过程为利用植物体离体的器官、组织或细胞，(如根、茎、叶、 花、果实、种子、胚、胚珠、子房、花药、花粉以及贮藏器官的薄壁组织、维管束组织等)在无菌 和适宜的人工培养基及光照、温度等条件下，诱导出愈伤组织再分化形成不定芽，或者直接 由植物离体组织或器官直接分化出丛生芽，然后诱导生根，最后形成完整的植株。再生植株 经炼苗后移栽，最终形成商品植株。黄花蝴蝶草(Tbre^ia flava Buch-Ham. Ex Benth)别名泡卜儿，为玄参科一年生 草本。国内分布于我国广东、广西、台湾等省区，国外分布于印度、缅甸、越南、老挝、柬埔寨、 马来西亚及印度尼西亚。黄花蝴蝶草全草可入药，有利水消肿和清肝明目之效，主要用于治 水肿和合成它类药物。同时由于其花色明艳，还经常用于美化花坛或用于盆栽。近年来由 于医疗保健行业的发展以及人们对生活环境需求的不断提高，人们对其需求量也不断的增 大。黄花蝴蝶草的繁殖方法主要靠扦插繁殖，但自然繁殖存在着繁殖系数低，在很大 程度上受到季节的限制。如能通过组织培养可以达到短时间内快速繁殖的目的，提高产量， 并且可以克服季节对繁殖的影响。但是，目前国内以黄花蝴蝶草为实验材料进行的研究还 处于起始阶段，只对离体培养条件进行了初步的研究。黄花蝴蝶草植株再生虽有报道，但不 是很多。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种，它能够明显提高黄花蝴 蝶草的无性繁殖系数，繁殖速度快而且操作简便，实现黄花蝴蝶草的规模化微繁殖，是获得 大量优质种苗的有效途径。为了达到上述目的，本专利技术所述的一种，包括如下步 骤(1)外植体消毒将黄花蝴蝶草顶芽或侧芽置于65 75%乙醇中浸泡20 60s (表示“秒”，下同)，0. 1%升汞中灭菌4 12min (表示“分钟”，下同)，再用无菌水冲洗3 6次；(2)无菌苗的获得将消毒后的黄花蝴蝶草顶芽或侧芽接种到MS培养基中培养15 30天获得无菌苗，培养条件为温度25士2 0°C，光照强度1500LUX，光照时间12h*d-l (表示 “小时/天”，下同)；(3)诱导丛生芽发生将剪成5mmX5mm大小的无菌苗叶片置于配方为MS+1.0 2. Omg/L 6-苄氨基腺嘌呤(简称6-BA) +0 1. 5mg/L萘乙酸(简称NAA)，MS+0. 01 0. 1 mg/L吡效隆(简称4-PU)或噻苯隆(简称TDZ)的培养基上培养14 21天获得丛生芽(高 度一般为2cm)，培养条件同步骤(2)；(4)诱导生根将步骤(2)所得到的无菌苗切取高0.5 1. Ocm左右的单芽，在1 1/4MSU/3MS+0 0. lmg/L吲哚丁酸(简称IBA)或NAA，的培养基上培养7 14天得到再 生植株，培养条件同步骤(2);(5)再生植株移栽将步骤(4)获得的再生植株经炼苗后，移栽入蛭石或者花卉土中， 用自来水或者1/4MS培养液浇灌。上述方法中，在步骤(3)中，培养基的优选方案是MS+1. 0 2. Omg/L 6-BA+l. 5mg/ L NAA, MS+0. 01 0. 1 mg/L 4-PU 或 TDZ，更优选的是 MS+2. Omg/L 6-BA+l. 5mg/L NAA。步 骤(4)中培养基的优选配方是采用1/2 1/4MS和1/3MS+0. 05 0. lmg/L IBA或NAA，更 优选的是 1/3MS+0. 05mg/L NAA。本专利技术具有如下的优点和效果1、经实验证明，在本专利技术所述方法的步骤(3)中不定芽的诱导率最高可达100%，每个 外植体都可以分化出多个不定芽，其中以2. Omg/L 6-BA+l. 5mg/L NAA的培养基中的不定芽 最多，平均每个外植体的不定芽大于20个。2、经实验证明，在本专利技术所述方法的步骤(4)中，采用IBA、NAA进行诱导，生根率 100%，而且长势良好，保证了试管苗不定根质量。3、与现有的繁殖技术相比，本专利技术所述方法使黄花蝴蝶草的繁殖效率高，周年可 以大量生产，克服了现有技术受季节对繁殖的影响。4、本专利技术所述方法无需专有设备，操作简便。具体实施例方式材料及试剂黄花蝴蝶草，来源于广东省肇庆市鼎湖山自然保护区。试剂MS培养基、6-BA、NAA、4_PU、TDZ、IBA，均为市售商品，购自广州威佳科技有 限公司。实施例1 (1)外植体的消毒取黄花蝴蝶草顶芽或侧芽置于70%乙醇中浸泡30s，0.1%升汞中灭 菌6min，再用无菌水冲洗5次；(2)无菌苗的获得将消毒后的黄花蝴蝶草外植体接种到MS培养基中培养15天获得无 菌苗，培养条件为温度25士2°C，光照强度1500LUX，光照时间12h.d_l (表示“小时/天”， 下同)。(3)芽的分化一个月后接种到MS+1. Omg/L 6-BA+l. 5mg/L NAA的培养基上，培养14天，不定芽分化率为97. 62%，能分化的每个外植体有12个不定芽，培养21天，不定芽分 化率为100%，能分化的每个外植体不定芽大于30个。(4)根的形成形成的小苗，转接入附加0. 05mg/L IBA的1/3MS培养基上，培养7 天时，生根率为93. 33%，且每个外植体均有5 6条诱导根，诱导根呈细小絮状，培养14天 后，生根率可达100%，每个外植体的诱导根均有8 9条，诱导根生长变长，呈成放射状，且 有大量根毛。苗的生长状况良好。(5)试管苗移栽在诱导根实验培养20天后，将试管苗炼苗后转入蛭石或营养土 中，以1/4MS培养液浇灌，15天后苗生长良好，成活率100%。实施例2:其它操作同实施例1，所不同的是步骤(1)中，取黄花蝴蝶草顶芽或侧芽置于75%乙 醇中浸泡60s，0. 1%升汞中灭菌12min，再用无菌水冲洗3次；步骤((2)中，培养时间为30 天；步骤((3)中，培养基配方为2.0 mg/L 6-BA的MS培养基上，培养14天，不定芽分化率 为94. 64%，每个外植体有8个不定芽，培养21天，不定芽分化率为100%，能分化的每个外植 体不定芽大于20个；步骤((4)中，培养基改为0. lmg/L NAA的1/3MS培养基上，培养7天 时，生根率为93. 54%,且每个外植体均有6 7条诱导根，培养14天后，生根率可达100%， 每个外植体的诱导根大于11条，呈成放射状。苗的生长状况良好。步骤(5)中，蛭石改为 花卉土，以自来水浇灌，15天后，苗生长良好，成活率为100%。实施例3 其它操作同实施例1，所不同的是步骤(1)中，取黄花蝴蝶草顶本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种黄花蝴蝶草的快速繁殖方法，其特征在于，包括如下步骤：（１）外植体消毒：将黄花蝴蝶草顶芽或侧芽置于６５～７５％乙醇中浸泡２０～６０秒，０．１％升汞中灭菌４～１２分钟，再用无菌水冲洗３～６次；（２）无菌苗的获得：将消毒后的黄花蝴蝶草顶芽或侧芽接种到ＭＳ培养基中培养１５～３０天，获得无菌苗，培养条件为温度２５±２℃，光照强度１５００Ｌｕｘ，光照时间１２小时／天；（３）诱导丛生芽发生：将剪成５ｍｍ×５ｍｍ大小的无菌苗叶片置于配方为ＭＳ＋１．０～２．０ｍｇ／Ｌ　６－苄氨基腺嘌呤＋０～１．５ｍｇ／Ｌ萘乙酸，或者ＭＳ＋０．０１～０．１　ｍｇ／Ｌ吡效隆，或者ＭＳ＋０．０１～０．１　ｍｇ／Ｌ噻苯隆的培养基上培养１４～２１天，获得丛生芽，培养条件同步骤（２）；（４）诱导生根：将步骤（２）所得到的无菌苗切取高０．５～１．０ｃｍ左右的单芽，在１／４　ＭＳ～１ＭＳ，或者１／３ＭＳ＋０～０．１ｍｇ／Ｌ　吲哚丁酸，或者１／３ＭＳ＋０～０．１ｍｇ／Ｌ萘乙酸的培养基上培养７～１４天得到再生植株，培养条件同步骤（２）；（５）再生植株移栽：将步骤（４）得到的再生植株炼苗后，移栽入蛭石或者花卉土中，用自来水或者１／４ＭＳ培养液浇灌。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈刚，王瑛华，陈雄伟，林媛，
申请(专利权)人：肇庆学院，
类型：发明
国别省市：44