防治蔬菜土传病害的AR156合剂制造技术

一种防治蔬菜土传病害的生防复合菌剂ＡＲ１５６合剂，属于植病生防技术领域。该菌剂由三种生防细菌组成，分别是ＡＲ１５６（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｓｐ．）、ＸＹ２１（Ｓｅｒｒａｔｉａ　　ｓｐ．）和ＳＭ２１（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｓｐ．）。三种细菌分别在ＰＤＡ培养液３７℃１８０ｒｐｍ振荡培养２０～２４小时，然后４０００ｇ离心１０ｍｉｎ，取湿菌与菌体保藏液按１∶４０（ｇ／ｍｌ）配成菌剂，再按１∶１∶１比例混匀，成品中活菌总浓度为１×１０↑［９］～１×１０↑［１２］ｃｆｕ／ｍｌ。对茄科作物青枯病温室与田间防效分别为９０％和７０％以上，茄科作物疫病防效为６５％以上，对蔬菜根结线虫病的防效为６０～８５％，增产可达５０～２００％，同时该菌剂还可以改善土壤板结现象。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种防治蔬菜土传病害的复合生防菌剂AR156合剂，属于农作物防病治 病
，专用于多种蔬菜土传病害的无公害防治。二、 技术背景植物土传病害多为土壤习居菌，如引起茄科作物青枯病的i /加m'a w/aacean'簡， 弓l起多种植物禾古、黄萎病的Fw.ran'wmowon'w附，PfeW/7/Zwm daWae/，以及近年来在各地 危害越来越严重的根结线虫病害(Afe/oWogy^ spp.)等。茄科作物青枯病属世界性病害， 病原细菌可侵染50多科200多种植物，全球范围内造成的经济损失多达120亿美元；辣 椒疫病户/^o;^加/zwfl c/n7/在我国蔬菜生产上常年造成巨大损失；根结线虫 Ufe7oiVo^77e spp.)侵染保护地蔬菜，致使寄主常年减产15-25%，有时达70%以上，严 重地制约了蔬菜的生产和出口创汇，有的甚至到了无法种植的地步。据估计，我国农作 物的生产每年因土传病害而遭受的经济损失达数十亿元以上。而生产上，这些病害往往 同时发生，如番茄大棚土壤中根结线虫和细菌性青枯、真菌性枯萎、黄萎同时发生复合 侵染，造成的损失非常严重。这些土传病害都有寄主范围广、抗逆性强、难以根除等特点，对复合侵染防治尤其 困难。生产中往往既缺乏优良的抗病品种，又缺乏有效的化学防治药剂。而过多施用化 学农药会带来一系列生态和社会问题，如病虫草产生的抗性，对非靶标生物的直接危害， 对土壤、水、大气的污染，生物富集作用对人健康的影响，国际贸易对农药残留农产品 的限制等。早在1992年世界环境与发展大会就要求在全球范围内控制化学农药的销售 和使用，不能过份依赖化学农药已成为人类的共识。研究与开发生防制剂，利用生防细菌和PGPR细菌是一种比较有效的防治手段，通 过空间位点竞争和营养的竞争，直接分泌胞外酶降解作用，产生抗生素抑制病原，诱导 植物产生抗病性等机制，既可以减少化学农药使用带来的环境污染，提高农产品的价值， 又可以改善土壤微生态环境，压低有害生物的种群数量，利于农作物的可持续生产，为 我国无公害绿色蔬菜的生产提供有力保障。现有技术中按照本实验室的菌体保藏液专利 (公开专利号CN1358838，公开日2002年7月17日)方法，菌体可室温保存2 3年。三、
技术实现思路
技术问题本专利技术的目的是针对当前防治植物土传病害使用的化学农药污染严重、使用成本过 高的缺陷，并且现有技术中的对多种植物土传病害没有同时具有较高防效的生防制剂，开发一种防治多种蔬菜土传病害的复合生防菌剂，该菌剂的防效可达45%以上，并且有显著的促生作用。 技术方案本专利技术为一种防治多种蔬菜土传病害的复合生防菌剂AR156合剂，含三种细菌成分 分别是菌株AR156，为芽孢杆菌属(泡w77iAssp.)于2007年01月26日保藏于中国微 生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCN0.1929;菌株XY21 为沙雷氏菌属(5e/ratia A于2007年05月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理 委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.2059;菌株SM21属芽孢杆菌属 (fec/77w w.)，于2007年05月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微 生物中心，菌种保藏号为CGMCCN0.2058。 复合生防菌剂AR156合剂的制备方法为1) 将以上所述的三种菌株接种到PDA培养液中分别培养37tU80rpm， 16 20小时后在超净工作台中分别取样测600nm处的0D值，测定过程中以未接菌的培养液来调零；2) 当培养至OD值在0.5 0.8之间时，将种子菌液以l: IOO体积比加入PDA培养 液中，30°C 180rpm振荡培养20 24小时，然后4000g离心10min，每1000ml培养液获 得13 16g湿菌，每克湿菌含4X10 10'5个菌体；3) 取湿菌与菌体保藏液(公开专利号CN1358838，公开日2002年7月17日)按lg: 40ml配成三种细菌单剂，再将三种细菌单剂按l: 1: l混合均匀，即得复合生防菌剂，成品中活菌总浓度为lX109 lX10'2cfu/ml ，用于防治蔬菜土传病害。其中所用PDA培养液配制方法为用200克土豆削皮后切成小块放入水中，沸腾后 至少煮20分钟以上，用四层医用纱布过滤，滤液加20克普通蔗糖，定容至1000毫升， PH值调至7.2-7.4，然后12rC15个大气压灭菌20分钟。有益效果本专利技术的优点和积极效果表现在本专利技术是专门针对蔬菜土传病害开发的生防制剂， 在防治蔬菜土传病害方面与目前其他广谱生物杀菌剂相比防治效果显著提高。由于是生 物制剂，完全没有因化学农药的使用所带来的一系列问题，因而有利于蔬菜的无公害生 产，农民可以不用或减少化学农药的用量，这不仅可为农民节省开支，而且有利于蔬菜 的出口。同时，该菌剂还有增产功能，可为农民增加收入。该菌剂用湿菌与本实验室的菌体保藏液按1: 40(g/ml)配成菌剂，可室温保存2 3年。温室实验表明该菌制剂能显著促进辣椒生长的作用，对多种病原有良好防效(表l 3)。温室大棚实验表明使用该菌剂对多种蔬菜土传病害根防治效果可达50 85%，增 产可达5096以上(表4 7)。该菌剂可以在温室移栽前倒入有机肥中制成堆肥，然后随肥料在整地过程中埋到土 里，也可以在移栽时灌根使用。对茄科作物青枯病温室与田间防效分别为90%和70%以上， 茄科作物疫病防效为65%以上，对蔬菜根结线虫病的防效为60 85%，增产可达50 200%，同时该菌剂还可以改善土壤板结现象。 四具体实施方式本专利技术为一种防治多种蔬菜土传病害的复合生防菌剂AR156合剂，含三种细菌成分-分别是菌株AR156，为芽孢杆菌属(^a^ w.)于2007年01月26日保藏于中国微 生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCN0.1929 (保藏证明已 于专利技术专利提交申请号200710021376.0防治温室蔬菜根结线虫病的生防菌株申请日 2007.4.10); XY21为沙雷氏菌属(5ferraa J，于2007年05月24日保藏于中国微 生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.2059;菌株SM21 为芽孢杆菌属(fec/77^卬.)，于2007年05月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委 员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCN0.2058。AR156菌株，为芽孢杆菌属(fe77ys砂.)分离自南京紫金山森林土，在LB培养基上 12h产生单菌落，培养24h菌落乳白色，质地均一，圆形，干燥，中间隆起，表面粗糙，菌 体为直杆状，G+，该菌株还可分泌产生蛋白酶。XY21菌株，为沙雷氏菌属(5e汀afia印J;分离自镇江森林土壤，XY21在LB培养基 上10h产生单菌落，培养24h菌落乳白色，质地均一，圆形，湿润，中间隆起，表面光滑， 菌体为短直杆状，G—，该菌株还可分泌产生蛋白酶。SM21菌株，为芽孢杆菌属(feoz'M5; .)，分离自镇江森林土壤，SM21在LB培 养基上10h产生单菌落，培养24h菌落乳黄色，质地均一，圆形，干燥，中间隆起，表 面粗糙，菌体为短直杆状，G'，该菌株还可分泌产本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种防治多种蔬菜土传病害的ＡＲ１５６合剂，含三种细菌成分：分别是菌株ＡＲ１５６，为芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．）于２００７年０１月２６日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为ＣＧＭＣＣＮＯ．１９２９；菌株 ＸＹ２１为沙雷氏菌（Ｓｅｒｒａｔｉａｓｐ．），于２００７年０５月２４日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为ＣＧＭＣＣＮＯ．２０５９；菌株ＳＭ２１属芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｐ．），于２００７年０５月２ ４日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为ＣＧＭＣＣＮＯ．２０５８。

【技术特征摘要】
CN 2007-8-24 200710130837.81. 一种防治多种蔬菜土传病害的AR156合剂，含三种细菌成分分别是菌株AR156，为芽孢杆菌(Bacillus sp.)于2007年01月26日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.1929；菌株XY21为沙雷氏菌(Serratiasp.)，于2007年05月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.2059；菌株SM21属芽孢杆菌(Bacillus sp.)，于2007年05月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCCNO.2058。2、 权利要求1所述的一种防治多种蔬菜土传病害的复合生防菌剂AR156合剂的制备 方法，其特征在于，1) 将权利要求1所述的三种菌株接种到PDA培养液中分别培养37。C180rpm， 16 20小时后在超净工作台中分别取样测600nm处的0D值，测定过程...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘红霞，李师默，郭坚华，
申请(专利权)人：南京农大生物源农药创制有限公司，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]