柿叶提取物和它的制备方法及用途技术

一种柿叶提取物，其特征在于：是用柿科柿属植物柿（Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ　Ｋａｋｉ　Ｌ．）的叶，经水煮、醇沉、乙酸乙酯萃取、大孔树酯吸附、乙醇洗脱，所得的乙醇液回收乙醇后的浓缩液为柿叶提取物，提取物含总黄酮为７０～９０％（以提取物干品计）。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及来源于植物材料的药用提取物和制备方法及用途，具体地说是植物柿叶地提取物和它的制备方法及用途。
技术介绍
柿叶味苦、性寒。具有下气平喘、止渴生津、疗疮等功效，具有广泛的药理作用。国内外研究表明，以柿叶为原料制取的柿叶制剂、柿叶茶、柿叶提取物及柿叶黄酮甙具有降血压、抑菌、降血脂、降低胆固醇、止血， 活血化瘀、抑制癌瘤生长等多方面的生理功能。在柿叶总黄酮中含有的化合物很多，目前已发现的柿叶黄酮化合物有黄芪甙、异槲皮素、山萘酚3-o-β-D-葡萄糖甙、山萘酚、槲皮素、山萘酚3-o-α-L-鼠李糖甙、山萘酚3-β-D-木糖甙、山萘酚3-o-α-L-阿拉伯糖甙、槲皮素3-o--葡萄糖甙(、芦丁、金丝桃甙hyperin(槲皮素-3-半乳糖甙)、杨梅树皮甙、紫云英甙等，采用不同的提取方法所得黄酮的成分以及含量高低均存在较大差异。有文献报道对柿叶总黄酮的乙醇提取工艺进行研究。结果表明，用15倍柿叶重的50％乙醇水溶液，在75℃下浸提3h为最佳条件。但此提取方法仅得粗提取物，黄酮含量只有15％左右，难于获得高活性和低副作用效果。无法用于人体药用。又有报道用水提树酯吸附法提取分离柿叶黄酮的方法，它是通过提取溶剂和吸附树脂的筛选，选用pH为13的碱水作溶剂，从柿叶中提取黄酮，成本低，工艺安全，然后用YF-I树脂吸附，乙醇洗脱。提取获得的粗黄酮，其组份具有降血压功能及促进植物生长活性，但此方法得到粗提取物，杂质仍较多，无法用于人体药用。
技术实现思路
本专利技术的目的是通过新的提取制备方法，获得黄酮含量高的柿叶活性成分，用于制备能防治脑动脉硬化、冠心病心绞痛、神经功能退化症、脑卒中后遗症的药物。为了实施本专利技术的目的所采用的技术方案是用柿科(Ebenaceae)柿属(Diospyros L.)植物柿(Diospyros Kaki L.)的叶，经水煮、醇沉、乙酸乙酯萃取、大孔树酯吸附、乙醇洗脱，所得的乙醇液回收乙醇后的浓缩液为柿叶提取物，提取物含总黄酮为70～90％(以提取物干品计)。按本专利技术的提取方法，在总黄酮中含有槲皮素(quercetin)、山萘酚(kaempfetol)分别占提取物总重量的8～14％、12～23％(以提取物干品计)。其结构式为 R1 R2 R3 R4 R5 RQuercetin -OH-OH-OH -OH -H -OHKaempfetol-OH-OH-H -OH -H -OH柿叶提取物总黄酮和槲皮素和山奈素黄酮的含量检测采用中国药典附录的高效液相色谱法(HPLC)。本专利技术所说的柿叶提取物采用的制备方法是用柿科柿属植物柿(Diospyros Kaki L.)的叶为原料，加水煎煮1～3次，每次0.2～3小时，煎液过滤，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.2的清膏1，加乙醇沉淀，取上清液回收乙醇，所得浸膏2加水溶解后用乙酸乙酯萃取，萃取液回收乙酸乙酯后得稠膏3，用水溶解后上大孔树酯柱吸附，用乙醇溶液洗脱，收集乙醇液，回收乙醇后的浓缩物4为柿叶提取物。提取物由于含水量高，不好保存，为此，可以将提取物进一步干燥，得水分≤8的干燥粉，这样用干粉制备各种制剂时更方便且可保证药品的有效成分的含量。大孔树脂优选为聚酰胺型或聚苯乙烯树脂系列，上大孔树酯柱吸附、洗脱、回收乙醇后浓缩液4干燥的方法很多，可用高温烘干，也可用薄膜蒸发干燥或低温干燥等，本专利技术优选采用喷雾干燥法，其进风温度60～128℃，出口温度45～80℃，风速5～10m/s，压力0.02～0.1kPa。本专利技术所提供的提取物其用途是制备防治脑中卒后遗症和神经功能退化症、脑动脉硬化症、冠心病、心绞痛的药物和保健品。它可以用提取物加入各种辅料，如润滑剂、填充剂、粘合剂、崩解剂等，以常规的药物制剂工艺和制备食品的方法制备成颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂、丸剂和保健品等。下面用本专利技术所制得的柿叶提取物，用HPLC方法测定其含总黄酮为77.4％，水解后，用HPLC方法测定含槲皮素、山奈酚苷元分别为提取物总重量的13.6％，16.5％的产品进行如下试验。一、急性毒性和长期毒性试验小鼠急性毒性研究将120只19～21g NIH小鼠(雌雄各半)分成6组，每组20只，分别以五种不同浓度的柿叶提取物p.o.给药，NS阴性对照。观察小鼠的反应并记录每组小鼠的死亡数目，采用Microsoft Excel的线性回归软件，根据对数剂量与经验概率单位绘制直线，计算LD50。柿叶提取物对小白鼠P.O的LD50分别为32.88～38.50g/Kg大鼠长期毒性实验取Wistar大鼠120只雌雄各半分成4组，每组30只，分别P.O.给予250mg/Kg、50mg/Kg、10mg/Kg柿叶黄酮提取物(FLDK)，NS阴性对照P.O.生理盐水。连续给药90天，三个剂量组大鼠均未见明显血象、心肺肝肾功能及神经系统功异常，也未心、肺、脾、胃、大脑、肠等重要器官有明显病理变化。结论本专利技术的柿叶提取物毒性很低、安全性高。二、药效试验(一)、柿叶提取物对前脑缺血损伤神经元的保护作用1.实验材料柿叶提取物，用生理盐水配成合适浓度的混悬液；试验动物用健康雌性SD大鼠90只，体重180～220g，大鼠随机分为正常组(N组)、模型组(M组)，提取物(FLDK)低剂量、中剂量、高剂量组、对照组(天保宁)，每组10只。给药给药12天(缺血再灌注前4天，后7天)。腹腔灌胃水，每日2次。2.缺血再灌注损伤模型制备参照《药理实验方法学》Pulsinelli大鼠四血管阻断前脑缺血模型进行。前脑缺血再灌注用电凝椎基底动脉阻断椎动脉血流24小时后，用动脉夹夹闭两侧颈总动脉，阻断血流15分钟，造成前脑缺血。前脑缺血模型成功的大鼠立即出现翻正反射消失，瞳孔扩大等等。15分钟后去除动脉夹，恢复血流供应。恢复血流供应后30～50分钟内大鼠重新站立起来，恢复自主活动，全脑缺血再灌注造型成功。将大鼠置回笼中饲养，按给药方案给药。每天观察大鼠行为和存活情况。缺血再灌注7天后杀死动物，取大脑海马固定切片观察脑神经细胞凋亡和形态变化；并计算存活的锥体细胞密度(个/mm)。3.实验结果3.1.大鼠脑海马组织光学显微镜下组织形态低倍镜下，正常大鼠脑海马组织显“C”形，分为CA1、CA2、CA3区，CA1区有3～4层锥体细胞，排列整齐；高倍镜下，锥体细胞核大而园，有1～2个核仁，锥体细胞密度为185.5±17.1(图1，表1)3.2.缺血再灌注7天，可见明显大鼠脑海马组织细胞损伤。生理盐水组大鼠脑海马CA1区锥体细胞已大部分死亡，细胞碎片散乱分布(图2，表1)3.3.给予不同剂量的柿叶提取物，对缺血再灌注所致大鼠脑海马组织细胞损伤有一定剂量依赖性保护作用(图3-5，表1)。相当于人常用量的柿叶提取物组对缺血再灌注所致大鼠脑海马CA1区神经元损伤明显减轻，其活锥体细胞密度比对照组大鼠明显增加。动物整体状况改善，大鼠外观活动正常，皮毛光滑，体重减轻不明显。缺血再灌注后动物存活数比对照组明显多。表明柿叶提取物对急性缺血有保护作用。这为柿叶黄酮提取物治疗脑卒中及中风后遗症提供了实验依据。3.4.阳性对照药天保宁胶囊(100mg/kg，相当于人常用量)大鼠脑海马组织细胞形态基本正常，锥体细胞密度比生理盐水组明显增加(P＜0.05，附图天保宁，对缺血再灌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐安龙，贝伟剑，李楚源，陈矛，彭文烈，王德勤，陈薇，罗杰，
申请(专利权)人：广州白云山制药股份有限公司广州白云山中药厂，
类型：发明
国别省市：