本发明专利技术提供一种具心肌保护作用的黄芪有效组分的制备方法。药材通过加热提取，浓缩，硅胶柱分离，洗脱，洗脱液浓缩干燥，再用制备液相色谱继续分离，收集溶液，溶液经浓缩干燥后得到有效组分。本发明专利技术提供的黄芪有效组分可在制备治疗、预防心血管疾病药物中的应用。本发明专利技术方法设计合理，能快速准确地得到有效成分，在生产中更易于药物的质量控制。
Astragalus membranaceus effective component with myocardial protection function, preparation method and use
The present invention provides a preparation method of Astragalus effective component with myocardial protection function. The medicinal materials are extracted by heating, concentrated, separated and eluted by silica gel column. The eluent is concentrated and dried, and then separated by preparative liquid chromatography. The solution is collected and the solution is concentrated and dried to obtain the active components. The present invention provides an effective component of astragalus root which can be used in preparing medicine for curing and preventing cardiovascular disease. The method of the invention is reasonable in design and can obtain the effective component quickly and accurately, and is more convenient for the quality control of drugs in production.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属中药领域，涉及一种治疗心血管疾病的中药提取物，具体地说涉及从黄 芪中提取的有效组分及其制备方法与医药用途，该有效组分通过提取，硅胶柱中压分离，制 备液相分离而获得。
技术介绍
心血管疾病是危害人类健康的第一杀手，近年来，随着我国人口老年化以及人们 工作、生活、饮食结构及环境等的变化，冠心病等心脑血管疾病的发生率也逐年增多，严重 威胁着人民的身心健康。天然产物中许多活性物质具有抗心肌缺血、缺氧作用，其中一些已 开发成治疗冠心病和心绞痛的新药。因而从天然产物中寻找具有抗心肌缺血、缺氧生理活 性的有效物质，是发现、开发新药的有效途径之一。我国药用生物资源十分丰富，其生理活 性物质是研究和发现新药先导化学物，开发新药的天然宝库。目前，我国从天然产物中提取 活性物质，用于开发成治疗冠心病、安全性好、毒性低的新药还很少，从天然产物中提取活 性物质，开发成具有抗心肌缺血作用，用于治疗冠心病和心绞痛的新药，具有重要应用价值 和广阔发展前景。黄芪为豆科植物蒙古黄芪及膜荚黄芪的干燥根，是一种常用中药，味甘、性温，有 补气升阳、固表止汗、托毒排脓和生肌等功效。黄芪具有免疫调节作用，可使细胞的生理代 谢增强。近年来研究发现黄芪中含有的黄芪多糖、皂甙、黄酮等化合物具有较强的生物活 性。黄芪皂苷能通过扩张血管达到降压目的，黄芪的总黄酮和总皂苷等成分具有显著的抗 氧化活性，能抑制自由基的产生和清除体内过剩的自由基，故能有效地延缓衰老。因此，从黄芪中分离出有效组分，开发出治疗心血管疾病的现代中药具有重要的眉、ο
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种具有心肌保护作用的黄芪有效组分的制备方法，通过 以下步骤实现将黄芪药材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加热提取，将提取液浓缩成浸膏， 并将其与硅胶进行拌样，用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯作为洗脱 剂，得洗脱液I，弃之，然后改用氯仿和甲醇作为洗脱剂，得洗脱液II，将洗脱液II浓缩干燥 后得样品；用制备液相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件色谱柱为制备柱， 流动相为水和乙腈，梯度洗脱。优选的，本专利技术的黄芪有效组分制备方法，包括下列步骤取黄芪药材，将其粉碎 后加入体积比为1:1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流1小时，提取2次，滤液合并得提取液。 将提取液浓缩成浸膏，用正相硅胶柱对其进行分离，首先用体积比为50:1的石油醚和乙酸 乙酯作为洗脱剂，得洗脱液I，弃之，然后改用体积比为10:1的氯仿和甲醇作为洗脱剂，得 洗脱液II，将洗脱液II浓缩干燥后，用制备液相色谱继续分离得到的样品。制备色谱的分 离条件色谱柱为制备柱，流动相为水A和乙腈B，梯度洗脱程序如下0min时，流动相A为85%的水，流动相B为15%的乙腈溶液；40min时，流动相A为5%的水，流动相B为95%的 乙腈溶液；50min时，流动相A为5%的水，流动相B为95%的乙腈溶液；流速为lOml/min， 柱温为室温；样品经制备液相色谱分离，在30. (Γ40. Omin时间段收集溶液，溶液浓缩干燥 后得到有效组分。本专利技术的另一个目的是提供所述有效组分在制备治疗和预防心血管疾病药物中 的应用。经药理实验证明，本专利技术提供的黄芪有效组分对心肌细胞有保护作用。本专利技术的黄芪有效组分可以作为活性成分，加入药剂学上接受的辅料，按照药剂 学上记载的制剂的制备方法制成制剂。所述的制剂包括注射液、滴注液、粉针剂、颗粒剂、片剂、冲剂、散剂、口服液、糖衣 片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口含剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、 丹剂、喷雾剂、滴丸剂、崩解剂、口崩片、微丸等。本专利技术的有益效果为提供的制备方法设计合理，能快速准确地得到有效成分，在 生产中更易于药物的质量控制。根据本专利技术方法制备获得的黄芪有效组分可在制备治疗和 预防心血管疾病药物中的应用。具体实施例方式下面将结合实施例进一步详细说明本专利技术的实质内容和有益效果，该实施例仅用 于说明本专利技术而非对本专利技术的限制。实施例一黄芪有效组分的制备将黄芪药材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加热提取，将提取液浓缩成浸膏，并将其与硅 胶进行拌样，用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯作为洗脱剂，得洗脱液 I，弃之，然后改用氯仿和甲醇作为洗脱剂，得洗脱液II，将洗脱液II浓缩干燥后得样品；用 制备液相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件色谱柱为制备柱，流动相为水 和乙腈，梯度洗脱。实施例二黄芪有效组分的制备取黄芪药材，将其粉碎后加入体积比为1:1的乙酸乙酯和乙醇，加热回流1小时，提取 2次，滤液合并得提取液。将提取液浓缩成浸膏，用正相硅胶柱对其进行分离，首先用体积比 为50:1的石油醚和乙酸乙酯作为洗脱剂，得洗脱液I，弃之，然后改用体积比为10:1的氯 仿和甲醇作为洗脱剂，得洗脱液II，将洗脱液II浓缩干燥后，用制备液相色谱继续分离得 到的样品。制备色谱的分离条件色谱柱为制备柱ZORBAX SB C18； 21. 2mm χ 250mm, 7 μηι ，流动相为水A和乙腈B，梯度洗脱程序如下Omin，15%B ；40min, 95%B ；50min, 95%B ；流速为 lOml/min，柱温为室温；样品经制备液相色谱分离，在30. (Γ40. Omin时间段收集溶液，溶液 浓缩干燥后得到有效组分。实施例三滴丸制剂的制备取黄芪有效组分0. 5g与10. 5g聚乙二醇-20000混合均勻，加热熔融，化料后移至滴丸 滴灌中，药液滴至6、°C液体石蜡中，除油，制得滴丸400粒。实施例四冻干粉针剂的制备取黄芪有效组分0. 5g、葡萄糖4. 5g、硫代硫酸钠0. 9g和蒸馏水1000ml，上述组分混合 均勻后，分装400支，冷冻干燥，即得。实施例五黄芪组分的活性评价实验1.黄芪组分对H2O2损伤心肌细胞的保护作用体外培养H9C2心肌细胞，培养液为DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需氨基酸+0. 1%双 抗。取对数生长期细胞置于96孔细胞培养板上，恒温培养24 h后，加入200 μ mol/mL H2O2 损伤心肌细胞30 min,再加入终浓度为50 μ g/mL的黄芪组分孵育24 h，采用MTT法测定细 胞活力。结果表明，该组分对H2O2损伤心肌细胞的保护率为14.97%。2.黄芪组分对缺氧复氧损伤心肌细胞的保护作用体外培养H9C2心肌细胞，培养液为DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需氨基酸+0. 1%双 抗。取对数生长期细胞置于96孔细胞培养板上，恒温培养24 h后，在缺氧小室中培养6 h。 缺氧结束后，取出细胞培养板加入经无糖Hank’ s稀释的终浓度为50 μ g/mL的黄芪组分，在 正常培养条件下孵育6 h，取细胞培养上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)含量。结果表明，该组 分对缺氧复氧损伤的心肌细胞保护率为35. 06%。权利要求1.一种具心肌保护作用的黄芪有效组分的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现 将黄芪药材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加热提取，将提取液浓缩成浸膏，并将其与硅胶进 行拌样，用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯作为洗脱剂，得洗脱液I，弃 之，然后改用氯仿和甲醇作为洗脱剂，得洗脱液II，将洗脱液II浓缩干燥后本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种具心肌保护作用的黄芪有效组分的制备方法，其特征在于，通过以下步骤实现：将黄芪药材粉碎后加入乙酸乙酯和乙醇，加热提取，将提取液浓缩成浸膏，并将其与硅胶进行拌样，用正相硅胶柱对其进行分离，首先用石油醚和乙酸乙酯作为洗脱剂，得洗脱液Ｉ，弃之，然后改用氯仿和甲醇作为洗脱剂，得洗脱液ＩＩ，将洗脱液ＩＩ浓缩干燥后得有效组分；用制备液相色谱继续分离得到的样品；制备色谱的分离条件：色谱柱为制备柱，流动相为水和乙腈，梯度洗脱。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：程翼宇，王毅，瞿海斌，葛志伟，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：86
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