口蹄疫全病毒基因工程疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术是一种口蹄疫基因工程疫苗及其制备方法。其结构表达式为：全病毒基因工程疫苗：ｐｈａｇｅ　　Ｔ４－Ｓｏｃ－Ｈｏｃ－ＦＭＤＶ－Ｐ１；亚单位基因工程疫苗：ｐｈａｇｅ　　Ｔ４－Ｓｏｃ－Ｈｏｃ－ＦＭＤＶ－Ｆ３。制备方法是：取Ｏ血清型口蹄疫病毒毒株，抽提总基因组ＲＮＡ；从血清毒株的ＤＮＡ测序合成两个ＤＮＡ核酸探针；用探针为引物，进行ＲＴ－ＰＣＲ链式ＤＮＡ扩增反应，获得病毒粒子Ｐ１基因；将Ｐ１基因与Ｔ４噬菌体质粒ｐＲＨ－Ｓｏｃ进行基因重组，得到Ｔ４噬菌体整合质粒ｐＲＨ－Ｓｏｃ－Ｐ１；将ｐＲＨ－Ｓｏｃ－Ｐ１与Ｔ４噬菌体载体ｐｈａｇｅ　　Ｔ４－ΔＳｏｃ＆Δ　　Ｈｏｃ进行同源重组，进入大肠杆菌Ｅ．ｃｏｌｉ．ＣＲ６３宿主菌体中，就得到本发明专利技术的基因工程疫苗株ｐｈａｇｅ　　Ｔ４－Ｓｏｃ－ＦＭ－ＤＶ－Ｐ１。本发明专利技术与灭活全病毒疫苗相比，不需灭活，保持全病毒抗原性但不具传染性。既可注射，也可口服，方便、快捷，免疫效果良好。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医疗卫生
，具体地说是应用T4噬菌体外源蛋白高效表达展示系统创制的口蹄疫基因工程疫苗及其制备方法。
技术介绍
口蹄疫是危害偶蹄兽及人类的重大传染病，国际兽医局及我国农业部列为A类烈性传染病，我国《动物防疫法》规定为第一类危害严重的传染病，疫苗免疫是防治口蹄疫的根本技术措施。目前，口蹄疫预防疫苗弱毒苗一般已停止生产(因恐弱毒株突变返回强毒株散布疫情)，各地用灭活全病毒疫苗，但因口蹄疫不同血清型病毒株变异性甚大(口蹄疫病毒株有7种血清型，70～80种次亚型之多)，一种某地毒株灭活苗难以覆盖预防不同疫区偶蹄动物不同亚型毒株感染。亚单位基因工程苗(如复旦大学研制)仅用O型毒株表面抗原表位的VP1(213个氨基酸)的局部小片段排列重组。目前世界科学家公认能预防口蹄疫强毒株攻击的理想疫苗应由全病毒颗粒表面蛋白的VP1、VP2、VP3所有片段共同参与形成免疫性立体空间结构，基因工程苗也需考虑到全病毒空间结构的原貌，否则，亚单位基因工程苗即使能产生免疫检测反应性，也难产生强毒攻击的保护性，结果，形成世界性口蹄疫分子生物学研究的实际格局只有研究价值，难有实际应用价值。T4噬菌体外源蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种口蹄疫基因工程疫苗，其特征在于其结构表达式为：全病毒基因工程疫苗：ｐｈａｇｅＴ４－Ｓｏｃ－Ｈｏｃ－ＦＭＤＶ－Ｐ１；亚单位基因工程疫苗：ｐｈａｇｅＴ４－Ｓｏｃ－Ｈｏｃ－ＦＭＤＶ－Ｆ３。

【技术特征摘要】
1.一种口蹄疫基因工程疫苗，其特征在于其结构表达式为全病毒基因工程疫苗phage T4-Soc-Hoc-FMDV-P1；亚单位基因工程疫苗phageT4-Soc-Hoc-FMDV-F3。2.如权利要求1所述的口蹄疫基因工程疫苗的制备方法，其特征在于由以下的方法获得1)取O血清型口蹄疫病毒毒株，用RNA抽提试剂盒抽提其总基因组RNA；2)从O血清型口蹄疫病毒毒株的核酸DNA测序信息设计、合成以下两个DNA核酸探针，使位于并覆盖口蹄疫病毒粒子表面全部结构蛋白基因的起、始位点为5’CTCAACGCAGAATGGAAAGCA 3’5’GGTCGAAGTTCAGAAGCTGTT 3’3)再用RT-PCR试剂盒，以抽得的口蹄疫基因组总RNA为底物，用以上探针为引物，进行RT-PCR链式DNA基因片断扩增反应，获得口蹄疫病毒粒子全部外壳结构蛋白完整的P1基因；4)将P1基因与T4噬菌体外源蛋白高效表达展示系统的质粒pRH-Soc进行基因重组，得到T4噬菌体整合质粒pRH-Soc-P1；5)将pRH-Soc-P...

【专利技术属性】
技术研发人员：任兆钧，
申请(专利权)人：任兆钧，大理三达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]