包含免疫原性微颗粒的组合物制造技术

本发明专利技术提供了一种免疫原性的组合物，其包含至少一种结合于微颗粒（ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅ）的抗原，其中所述微颗粒有着和病毒一样的大小范围。另外，本发明专利技术也提供了疫苗组合物和在研究对象上引发免疫应答的方法。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种免疫原性组合物，疫苗组合物，在研究对象中引发免疫应答的方法和生产这些组合物的方法。
技术介绍
调控人和动物的免疫系统是一种得到广泛认可的避免或治疗某些疾病或情况的手段。免疫系统控制疾病的机理包括诱导中和抗体(一种体液免疫应答)和产生细胞或T细胞免疫应答。后者包括T辅助细胞(TH)和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。在病毒感染例如脊髓灰质炎或肝炎，抗体通过阻止病毒感染细胞而提供保护。通过利用杀菌机制和中和细菌毒素，抗体也能抵抗细菌如肺炎链球菌和葡萄球菌。当抗原的肽片段结合到称为MHC I或MHC II的分子(主要组织相容性复合物，I型或II型)并被呈递在专门的APC(抗原呈递细胞(antigen presenting cells))如DC(树突状细胞(dendritic cells))或巨噬细胞表面时，T细胞能被激活。T细胞含有的抗原受体能用于监视细胞表面的抗原肽片段的出现。TH细胞的抗原受体识别结合于MHC II分子的抗原肽。相反的，CTL的受体和呈现在I型分子的抗原反应。激活的T细胞放大免疫应答，这是因为当T细胞识别被病原体感染或包含它能识别的抗原决定簇的目标细胞时，链式事件被触发，这些最终导致感染的细胞的死亡。另外，一些T细胞能刺激分泌细胞因子或淋巴因子，这些反过来可最终导致病原体的失活或消除。尽管市场上有很多疫苗，但是对于大量的疾病或情况仍然需要生产更有效和广谱的疫苗。也仍然需要保护性对抗那些尚未获得疫苗或疫苗效果不佳的感染体或病原体。另外，需要一种有效的单剂量的疫苗，就经济、运输和患者或研究对象的顺从性等原因而言，它显得尤其需要。大多数疫苗的缺点为不能诱导最佳的、不同类型的体液和细胞应答的组合，以达到免疫学有效性。例如，当抗体和细胞应答两者同时存在会更有效时，一些疫苗只能刺激抗体应答。其他例子中，需要多剂的疫苗注射如追加注射才能抵抗相关的感染体。在一些其他的例子中，与所需要的免疫球蛋白如IgA、IgG和IgM一起被诱导产生的还有IgE。诱导IgE的疫苗是不利的，因该免疫球蛋白出现在过敏反应中。刺激IgA的生成对于经黏膜位置或表面进入感染的病原体是“第一线”防御。因此，能产生高IgA分泌的免疫应答而不增加IgE生成的疫苗也将是有用的。然而在其他例子中，尽管疫苗能刺激APC，免疫刺激的程度是不乐观的。例如，树突状细胞或DC被一系列的细胞亚群所特征化，它们能通过表面分子彼此区别开来，一些表面分子是能结合于T细胞受体的特异配体。因此，需要去生产一种疫苗能选择性地定向于DC的一类亚群，例如一类能有效地启动CD8 T细胞的亚群，因为这些T细胞在对抗许多细胞内病原体和肿瘤的保护性免疫中发挥重要作用，但其难于诱导是众所周知的。进一步，对于疫苗，就大多数细胞而言，细胞外的抗原传统地不进入MHC I处理途径。通常，利用死疫苗产生CTL免疫是不太可能的，尽管有人认为存在APC通过摄取凋亡细胞、免疫复合物和颗粒[1]来进行处理和呈递的I型的选择性途径。乙型肝炎的表面蛋白或酵母逆转录蛋白颗粒构成的非感染性病毒样颗粒(VLP)已经显示能被巨噬细胞用于有效地加工以呈递MHC I来在体内和体外诱导CD8CTL细胞应答[2，3]。VLP是多亚基、包含脂质的蛋白颗粒，其中脂质成分构成超过干重的50％。然而，因为乙型肝炎核心蛋白颗粒不具有免疫原性，并具有较低的脂质成分，推测VLP的免疫原性不是因为其大小而是在于其生物化学成分。这与关于当抗原表现为包含脂质或去污剂的形式时，它们可能通过损坏细胞膜而与APC融合，然后进入细胞浆的假说一致。应用载有抗原的微球已经被试验作为一种可能的疫苗组合物。微球由可生物降解的乳酸和羟乙酸多酯(PLA和PLGA)构成。微球被构建成使得它们的大小和聚合物组合物能够控制其自身的降解速度。当微球降解后，其载有的抗原从中被释放，并提供了抗原的控释来刺激免疫应答。这些分子通过与蛋白颗粒一样的方式与免疫细胞接触和反应是不太可能的，蛋白颗粒的构造与细胞膜具有生物相容性。然而，这种形式的疫苗组合物的难点还包括抗原稳定性、微球大小和抗原释放的动力学，所有的这些仍需要去解决以生产出具有好的抗原性和永久免疫原性的疫苗，以生产出能经济地生产和施用的疫苗[4]。在美国专利No.4,225,581中，一种包含不同大小的异源性颗粒混合物的组合物被描述为对于将吸附于聚合物颗粒表面的抗原运输到体内是有用的。然而，这种疫苗的成功转运、抗原性和免疫原性没有被阐述或展示。特别的，没有证据显示诱导了CD8 T细胞应答，或甚至参与了MHC I型呈递途径。颗粒的聚合物材料认为和上面讨论的PLA或PLGA微颗粒具有相似的特性。因此，在本专利技术之前还不清楚，作为疫苗的一部分而被施用的颗粒，其本身的大小是否能诱导免疫原性应答。在形成本专利技术的工作中，专利技术者惊奇地发现结合于抗原的、与病毒大约一样大小的微颗粒能在研究对象上引起强烈的细胞和体液抗体应答。专利技术概述在本专利技术的第一部分提供了一种免疫原性组合物，其包含结合于微颗粒的至少一种抗原，其中微颗粒有着和病毒一样的大小范围。涉及免疫原性组合物使用的术语“包含”意思是组合物中包括抗原和微颗粒。也可以包括其他成分。术语“抗原”指的是任何能引起免疫应答的分子、成分或实体。免疫应答包括细胞和/或体液免疫应答。依赖于组合物设定的功能可以包含一种或多种抗原。抗原可以是一种肽、蛋白质、脂质、碳水化合物、核酸或其他类型的分子或任何的这些分子的组合。抗原可以来自病原体、组织、细胞、器官或分子，这依赖于组合物设定的功能。可以是纯化的抗原，或是重组来源的，生产于合适的载体如细菌、酵母菌或细胞培养。病原体例如可以是任何病原体、细胞内或细胞外的、抗原成分或它们的部分、病毒、细菌或原虫来源、如HIV、流感病毒、肝炎病毒、疟疾。特别的，本专利技术中采用的抗原例子如下花粉、丙型肝炎病毒、(HIV)核心、E1、E2和NS2蛋白、来自疟原虫属的抗原、如间日疟原虫和其他疟原虫属包括恶性疟原虫的环孢子蛋白(CS)和人恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫和三日疟原虫、TRAP、MSP-1、MSP-2、MSP-3、MSP-4、MSP-5、AMA-1、RESA、SALSA、STARP、LSA1和LSA3、HIV-gp120/160包膜糖蛋白、链球菌表面蛋白抗原、流感核蛋白、血凝素-神经酰胺酶表面感染、TcpA菌毛蛋白亚基、VP1蛋白、LMCV核蛋白、硕大利什曼原虫表面糖化蛋白(gp63)、百日咳博德特氏菌表面蛋白、狂犬病病毒G蛋白、链球菌M蛋白、葡萄球菌蛋白或幽门螺旋杆菌蛋白、合胞体病毒(RSV)F或G蛋白、Epstein Barr virus(EBV)gp340或核抗原3A、血凝素、博氏疏螺旋体外表面蛋白(Osp)A、结核分支杆菌38kD脂蛋白或30kD蛋白(Ag85)、10kD或65kD蛋白、脑膜炎奈瑟菌I型外蛋白、水痘带状疱疹IE62和gp1、风疹病毒壳体蛋白、乙型肝炎病毒前S1抗原、疱疹单纯病I型糖化蛋白G或gp D或CP27、墨累灰牛流域脑炎病毒E糖蛋白、甲型肝炎病毒VP1、脊髓灰质炎病毒壳体蛋白VP1、VP2、VP3和VP6、沙眼衣原体表面蛋白、乙型肝炎病毒包膜前S2抗原、人鼻病毒(HRV)壳体、人乳头状瘤病毒来自癌基因E6和E7的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种免疫原性组合物，其包含至少一种结合于微颗粒的抗原，其中所述微颗粒具有和病毒一样的大小范围。

【技术特征摘要】
AU 2000-9-14 PR0117;AU 2001-5-10 PR4888;AU 2001-5-1.一种免疫原性组合物，其包含至少一种结合于微颗粒的抗原，其中所述微颗粒具有和病毒一样的大小范围。2.一种疫苗组合物，其包含至少一种结合于微颗粒的抗原，其中所述微颗粒具有和病毒一样的大小范围。3.权利要求1或2的组合物，其中所述微颗粒的大小基本上是均一的。4.权利要求1到3中任一项的组合物，其中所述微颗粒包含一实心的核心。5.权利要求1到4中任一项的组合物，其中所述微颗粒直径是大约0.03-0.05μm。6.权利要求1到5中任一项的组合物，其中所述微颗粒由乳胶、亚铁分子、金、玻璃、磷酸钙、聚苯乙烯、聚赖氨酸G或其他可生物降解的和生物相容性的聚合物构成。7.权利要求1到6中任一项的组合物，其中所述抗原被吸附于、结合于、或共价偶联于所述微颗粒。8.权利要求1到7中任一项的组合物，其中所述抗原可以是一种肽、蛋白质、重组的肽或蛋白质、脂质、碳水化合物、核酸或其他类型的分子或这些物质的任意组合。9.权利要求1到8中任一项的组合物，其中所述抗原来源于病原体、组织、细胞器或分子并选自花粉、丙型肝炎病毒、(HIV)核心、E1、E2和NS2蛋白、来自疟原虫属如间日疟原虫和其他疟原虫属的抗原，包括恶性疟原虫的环孢子蛋白(CS)和人恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫和三日疟原虫的TRAP、MSP-1、MSP-2、MSP-3、MSP-4、MSP-5、AMA-1、RESA、SALSA、STARP、LSA1和LSA3、HIV-gp120/160包膜糖蛋白、链球菌表面蛋白抗原、流感核蛋白、血凝素-神经酰胺酶表面感染、TcpA菌毛蛋白亚基、VP1蛋白、LMCV核蛋白、硕大利什曼原虫表面糖化蛋白(gp63)、百日咳博德特氏菌表面蛋白、狂犬病病毒G蛋白、链球菌M蛋白、葡萄球菌蛋白或幽门螺旋杆菌蛋白、合胞体病毒(RSV)F或G蛋白、Epstein Barr virus(EBV)gp340或核抗原3A、血凝素、博氏疏螺旋体外表面蛋白(Osp)A、结核分支杆菌38kD脂蛋白或30kD蛋...

【专利技术属性】
技术研发人员：玛格达莱娜普莱班斯基，
申请(专利权)人：奥斯汀研究院，
类型：发明
国别省市：AU[澳大利亚]