一种苯酞类二聚体的用途制造技术

本发明专利技术涉及一种苯酞类二聚体化合物Ｌｅｖｉｓｔｏｌｉｄｅ　　Ａ（ＬＡ）在制备抗肿瘤药物组合物中的用途，该化合物具有广谱逆转肿瘤细胞对抗癌药物的多药耐药性，能有效增强抗癌药物杀伤瘤体细胞，并且对心血管和免疫系统毒副作用小。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种苯酞类二聚体，化合物Levistolide A(LA)在制备抗肿瘤药物组合物中的应用。
技术介绍
肿瘤多药耐药(multidrug resistance，MDR)的产生是化疗失败的重要原因。多药耐药是指肿瘤细胞能对多种化学结构、功能和作用机制不同的抗癌药物产生交叉耐药。从某种意义上说，90％死于肿瘤的病例都与原发性或获得性耐药有关。引起MDR的机制比较复杂，但肿瘤细胞膜上的主要“药泵”P-gp蛋白的过表达是MDR产生的重要原因。mdr1基因产物P-gp(p-glycoprotein)是一种跨膜糖蛋白，通过能量依赖机制，降低细胞毒药物在细胞内的积聚，获得多药耐药性。包括结肠癌、肾癌、肝癌、非小细胞肺癌、神经角质瘤和kaposis肉瘤等实体瘤，常被认为是抗药性的肿瘤，甚至可能在刚诊断时就有耐药性存在。这些肿瘤细胞有高水平的P-gp表达。如象急性髓细胞性白血病、急性淋巴细胞性白血病、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌等化疗敏感肿瘤，诊断时仅低水平表达P-gp，但治疗复发时会有P-gp的表达增加。针对P-gp的逆转剂是当前MDR研究的重点(参见Hilary Thomas et al.，Cancer Control，March/April 2003，Vol10，No.2；Reuter CW et al.，Blood.2000；96(5)1655-1669)。目前具有代表性的P-gp逆转剂有Verapamil，CsA，三氟拉螓、三苯氧胺等。根据对MDR逆转剂的研究，有效的MDR逆转剂分子均带有杂环结构，带正电荷，疏水性达logp≥-1。同时，具有较好的抗肿瘤作用的MDR逆转剂更为理想。但已知逆转剂在有效体内逆转浓度时，均存在着明显的毒副作用，临床应用十分受限。因此国内外自1981年以来一直致力于探寻临床有效但毒副作用小的MDR逆转剂。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种化合物Levistolide A(LA)在制备抗肿瘤应用。本专利技术化合物LA如式I所示 式I该式I化合物LA是一种苯酞(Phthalide，PA)衍生物的二聚体。本专利技术式I化合物制备的抗肿瘤药物组合物优选是一种抗肿瘤细胞多药耐药性的药物组合物，即式I化合物作为肿瘤细胞多药耐药性逆转剂。本专利技术的抗肿瘤药物组合物还可以优选是一种抗肿瘤血管生成的药物组合物。本专利技术的抗肿瘤药物组合物包含有效量的式I化合物以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。本专利技术制得的药物既可以单独作为抗肿瘤药使用，也可以和其它抗肿瘤药物联合使用。本专利技术式I化合物制备的抗肿瘤细胞多药耐药性的药物组合物，可与至少一种其它逆转剂联合使用，以达到提高逆转作用的目的；该逆转剂优选阿霉素、柔红霉素和长春新碱。优选本专利技术的抗肿瘤药物组合物是针对实体瘤的。本专利技术的式I化合物可按本领域已知方法配成肠道或非肠道组合药的制剂，如片剂、胶囊、颗粒剂、注射液等。根据本专利技术原理，化合物LA还可以制备成用于肿瘤化疗的辅助保健品。本专利技术的化合物具有广谱逆转肿瘤细胞对抗癌药物的多药耐药性(multidrug resistance，MDR)，它能有效增强抗癌药物杀伤瘤体细胞。LA与抗癌药物竞争性结合P-gp蛋白，从而抑制P-gp对药物分子的外排达到逆转目的。实验证明，它在对ADR(adriamycin，阿霉素)、DNR(daunorubicin，柔红霉素)等抗癌药作用于耐药肿瘤细胞具有类似于Verapamil的逆转效果，对VCR(Vincristine，长春新碱)的效果甚至比Verapamil高2-5倍以上。同时，LA类化合物没有Verapamil等已知逆转剂的心血管和免疫系统毒副作用。该化合物可使肿瘤细胞多药耐药性大为降低5-50倍，且效应快。在给予有效剂量时，无论是体外培养的原代正常细胞，还是体内喂养小鼠都无明显的毒副作用。附图说明图1为从川芎或当归中分离纯化化合物LA的工艺流程图2A为实施例1中川芎提取物294nm检测的的HPLC图。图2B为川芎提取物294nm检测的的质谱3A为MTT法检测不同浓度(ug/ml)的LA对不同细胞系的毒性图3B为台盼兰拒染法检测LA对淋巴细胞和骨髓细胞的毒性图4A为FCM检测DNR在k562/adr中的积聚图4B为HPLC检测k562/adr对ADR的外排图5为不同浓度LA与3H-azidopine竞争性结合P-gp后放射自显影的结果其中1空白对照，无P-gp，加3H-azidopine；2阳性对照，有P-gp，加3H-azidopine；3有P-gp，加3H-azidopine和0.5ug/ml LA； 4有P-gp，加3H-azidopine和2ug/ml LA；5有P-gp，加3H-azidopine和6ug/ml LA；6有P-gp，加3H-azidopine和8ug/ml LA。图6A为LA腹腔给药的药代动力学结果图6B为LA尾静脉给药的药代动力学曲线具体实施方式实施例1LA的分离和鉴定从川芎或当归中分离纯化化合物LA的工艺步骤可参见图1的流程图。LA的分离方法可以参见wang PS等的文章(Phytochemistry 1984；23；2033-8和Chinese Pharmaceutical Industry 1988；19553-9)或Kaouadji M等(J Nat Prod 1986；49872-7)和Naito T等(Heterocycles1991；322433-42)两篇文章。本专利技术按图1的工艺步骤从川芎中所获物质为无色透明结晶，经LC-MS和HNMR鉴定。川芎提取物294nm检测的LC-MS的实时色谱数据见图2A和图2B。实施例2-7是对化合物LA的细胞学效用评价其中，所用的细胞系为k562(人慢粒髓性白血病细胞系)及k562/adr(k562经低剂量阿霉素长期诱导产生的耐阿霉素等化疗药的细胞系)；kb(人口腔上皮细胞系)及kbv200(kb经低剂量长春新碱长期诱导产生的耐长春新碱等化疗药的细胞系)。k562和k562/adr由浙江大学肿瘤研究所提供，kb和kbv200取自中国医学科学院血液学研究所药物室。k562/adr多药耐药细胞系以P-gp升高为主要耐药机制。对阿霉素耐药20倍，对长春新碱、柔红霉素、米托蒽醌、紫杉醇等交叉耐药。kbv200多药耐药细胞系，亦以P-gp表达升高为主要耐药机制。对长春新碱耐药100倍，对阿霉素、柔红霉素、紫杉醇等交叉耐药。所用的试剂和仪器如下LA溶液单晶用DMSO溶解，配成5mg/ml的工作液，用RPMI 1640配成工作液。阿霉素(ADR)，长春新碱(VCR)，RPMI 1640，MTT，小牛血清，柔红霉素(DNR)，Verapamil(Ver)，培养板，二氧化碳培养箱，酶标仪，高效液相色谱仪(HPLC)，流式细胞仪(FACS)，P-gp荧光抗体试剂盒UIU2(购自Immunotech A Coulter Company，France)。实施例2测定各耐药株主要耐药机理分别收集培养的5×106个k562、k562/adr、kb、kbv200细胞，PBS洗两次，按P-gp荧光抗体试剂盒(UIU2)的说明操作，进行FACS检测P-gp的表达，每个样本计数10,000个细胞。各耐药株主要耐药机理本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种式Ⅰ所示的化合物ＬＡ＊＊＊式Ⅰ在制备抗肿瘤药物组合物中的应用。

【技术特征摘要】
1.一种式I所示的化合物LA 式I在制备抗肿瘤药物组合物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物组合物是抗肿瘤细胞多药耐药性的药物组合物。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物组合物是抗肿瘤血管生成的药物组合物。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抗肿瘤药物组合物包含有效量的式I化...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈菲，王弢，吴一峰，张弘，钱凯先，
申请(专利权)人：王弢，陈菲，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]