人用双价狂犬病纯化疫苗及其生产方法技术

本发明专利技术涉及人用狂犬病疫苗及其生产方法，主要解决现有的由单一毒种生产的疫苗免疫后所产生的中和抗体对于侵入人体的病毒的亲合性有一定的差异，导致免疫效果不尽相同，免疫结果不尽人意的缺点。本发明专利技术的产品含有由毒种ａＧ株及ＣＴＮ株两种单一毒株分别按常规方法制备的狂犬病纯化疫苗原液，以及保护剂。本发明专利技术的生产方法包括：（１）用ａＧ株及ＣＴＮ株两种单一毒株分别按常规方法制备疫苗原液；（２）将两种疫苗原液按一定的比例进行混合；（３）将混匀后的疫苗按液体剂型疫苗和冻干剂型疫苗进行分装；（４）将分装后的产品经成品检定后进行包装，即得到所需的人用双价狂犬病纯化疫苗。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及人用狂犬病疫苗及其生产方法。
技术介绍
全球各地的狂犬病毒分为四个已知血清型(血清I-IV型)及二个尚待定的病毒株(EBL1、EBL2)，同时根据分子生物学的基因分型，将其分为六个基因型，分别一一对应六个血清型，狂犬病毒的基因测序表明各病毒株之间的核蛋白(N)基因有高度保守性，同源性在98％-99.6％。而糖蛋白(G)基因相差较大，同源性一般在82％-90％。在我国分离的一些狂犬病野毒株和实验室的固定毒也进行过G基因的序列分析和比较，结果表明野毒株间和野毒株与固定毒或生产疫苗用毒株间均存在一定差异，如核酸和蛋白水平的同源性，上海分离株与广西分离株分别为93.1％和87.7％，与生产用aG株分别为88.5％和85.8％。二株宁夏分离株之间的核酸同源性较高为99.9％，氨基酸同源性为99.6％，但与aG株的同源性只有81.9％和90.5％，但与分离时间较短的CTN株的同源性则较高，分别为85.9％和92.4％。聚类分析可以将二株宁夏人分离株，一株广西犬毒株和CTN归于一类，而aG株和国外其他固定毒株(包括CVS株)归在另一类。各固定毒株G的氨基酸的同源性有差异，同源性最低的是aG/CVS为87％和SADB19/CVS为88.2％，同源性最高的是SADB19/ERA为99.4％，其他毒株之间的同源性在此范围内。而狂犬病毒糖蛋白(G)是狂犬病毒唯一能诱生宿主产生中和抗体的蛋白，它也能有效地刺激T淋巴细胞的增生。自然界的狂犬病毒抗原性是不完全相同的，据武汉生物制品研究所收集到的我国各地区的狂犬病毒街毒株，将其病毒滴度调至同一个水平，经甲醛灭活后再免疫小鼠，结果诱生的中和抗体效价不同，其诱生的抗体对其他病毒的中和活力不同，免疫小鼠的保护力也不同(朱家鸿、中华实验和临床病毒学杂志，1997，11；14)。同时1995年Kissi等报道，传统的狂犬病疫苗免疫的小鼠用死亡病人中分离的街毒攻击，部分小鼠不被保护而导致死亡，表明狂犬病毒街毒株与疫苗株之间的抗原性有变异。其自然界的狂犬病毒抗原性也在不断变异，无论是糖蛋白G还是核蛋白N。狂犬病疫苗是目前预防狂犬病发生唯一有效的药品，我国及全球当今使用的狂犬病疫苗多为组织细胞培养疫苗，其生产工艺已经接近成熟，只是不同的生产厂家所使用的毒种不同，且其所使用的都为单一毒株，正是由于不同的单一毒种其所制备的疫苗免疫后所产生的中和抗体对于侵入人体的病毒的亲合性有一定的差异，所以其免疫效果不尽相同，其免疫结果也不尽人意。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种人用双价狂犬病纯化疫苗，它含有由毒种aG株及CTN株两种单一毒株分别按常规方法制备的狂犬病纯化疫苗原液，以及保护剂。所说的保护剂有人血白蛋白、蔗糖、明胶、甘露醇、乳糖等。本专利技术的另一个目的是提供一种人用双价狂犬病纯化疫苗的生产方法，包括以下步骤(1)用aG株及CTN株两种单一毒株分别按常规方法制备疫苗原液；(2)将两种疫苗原液按一定的比例进行混合；、(3)将混匀后的疫苗按液体剂型疫苗和冻干剂型疫苗进行分装；(4)将分装后的产品经成品检定后进行包装，即得到所需的人用狂犬病双价纯化疫苗。所说的两种疫苗原液按抗原含量的混合比例为含有aG株的狂犬病纯化疫苗原液∶含有CTN株的狂犬病纯化疫苗原液＝1∶1。本专利技术的生产方法，前期利用我国目前所使用的两株毒种aG株及CTN株，分别生产狂犬病纯化疫苗原液，其生产工艺与现有生产工艺一样，后期按所含抗原量一定比例(1∶1)进行抗原混合，得到人用双价狂犬病纯化疫苗，从而尽可能增加抗原的覆盖范围。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术作进一步说明实施例两种单一毒株疫苗原液的制造工艺如下毒种库(aG、CTN)的建立，根据国家GMP管理规范，分别建立毒株的原始种子库、主种子库及工作种子库，细胞库(Vero细胞)的建立也是根据国家GMP管理规范，建立原始种子库、主种子库和工作种子库，也可只建立主种子库和工作种子库的两级种子库。原液制备时，先自细胞工作种子库中取出一支细胞进行复苏，然后进行细胞传代，然后用取自工作种子库的毒种对细胞进行种毒。种毒后置33℃-35℃培养5-7天，收取病毒原液，可连续收取三次，对收取的病毒原液进行病毒灭活然后超滤浓缩，再进行4000转离心30分钟去除细胞碎片，最后进行Sepharose分子筛柱层析获得纯化后的抗原，取样进行半成品检定，补加保护剂(液体剂型疫苗为人血白蛋白、冻干剂型疫苗为人血白蛋白及蔗糖与明胶)。进行半成品检定后的两种疫苗原液按抗原含量1∶1的比例进行混合，然后对于混匀后的疫苗按两种剂型进行分装液体剂型疫苗每剂1ml、冻干剂型疫苗每剂0.5ml，分装后的产品进行成品检定，对于合格的产品进行包装，即得到所需的人用双价狂犬病纯化疫苗。液体剂型疫苗的效期为一年，冻干剂型疫苗的效期为二年，其产品的免疫方式及免疫程序为暴露前三针免疫(0、7、21)暴露后五针免疫(0、3、7、14、28)，免疫部位为上臂三角肌，儿童可注射大腿外侧肌肉。用上述生产方法制成的产品进行了一系列的与单一毒株制品的小鼠对照实验，其结果如下1、不同的病毒原液攻击小白鼠结果 2、效力试验中小白鼠抗体检测 3、相同抗原量(80μg/ml)不同疫苗的的中和效价试验 4、相同效力疫苗的中和效价试验 上述一系列实验说明即使小鼠产生100％的中和抗体，但在用不同的毒株进行效力检定时，不同的疫苗所保护的小鼠的数量有一定的差异，但可以看出本专利技术产品的效力测定是最高的，其效果是明显的，因此本专利技术产品虽是在国内目前广泛使用的狂犬病疫苗生产的基础之上，进行两种疫苗的混合，但其从目前的技术上解决了不同的单一毒株所诱生的中和抗体效价不同，其诱生的抗体对其他病毒的中和活力不同，免疫后的保护力也不同的状况。其效果是明显的，将在狂犬病的防治中起到重要的作用。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人用双价狂犬病纯化疫苗，其特征是含有由毒种ａＧ株及ＣＴＮ株两种单一毒株分别按常规方法制备的狂犬病纯化疫苗原液，以及保护剂。

【技术特征摘要】
1.一种人用双价狂犬病纯化疫苗，其特征是含有由毒种aG株及CTN株两种单一毒株分别按常规方法制备的狂犬病纯化疫苗原液，以及保护剂。2.按权利要求1所述的一种人用双价狂犬病纯化疫苗，其特征是所说的保护剂有人血白蛋白、蔗糖、明胶、甘露醇、乳糖等。3.按权利要求1所述的一种人用双价狂犬病纯化疫苗的生产方法，其特征是包括以下步骤(1)用aG株及CTN株两种单一毒株分别按常规方法制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨晓明，孙文，刘俊生，卢颖，秦莉，
申请(专利权)人：武汉生物制品研究所，
类型：发明
国别省市：83[中国|武汉]