复合生物素化壳聚糖膜的制法及在牙周组织再生中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种复合生物素化壳聚糖膜的制法及其在牙周组织再生中的应用，复合生物素化壳聚糖膜中包含载人重组骨形成蛋白－２（ｒｈＢＭＰ↓［２］）壳聚糖微球和载碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）壳聚糖微球，ｒｈＢＭＰ↓［２］和ｂＦＧＦ均由壳聚糖微球包裹；ｒｈＢＭＰ↓［２］壳聚糖微球和ｂＦＧＦ壳聚糖微球均被包裹于复合生物素化壳聚糖膜中。也可以是ｒｈＢＭＰ↓［２］壳聚糖和ｂＦＧＦ壳聚糖中的任意一种壳聚糖微球被包裹于复合生物素化壳聚糖膜中。本发明专利技术能够较长时间控制释放ｒｈＢＭＰ↓［２］和ｂＦＧＦ，保护生长因子在牙周再生中发挥更好的作用，以实现牙周组织完全再生，恢复牙周功能。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种复合生物素化壳聚糖膜的制备及其在牙周组织再生中的应用。
技术介绍
牙周病是人类口腔两大类主要疾病之一，在我国和世界范围均有较高的患 病率，己成为成年人拔牙的首要原因。随着我国和世界人口老龄化，牙周病将 会有更突出的问题，严重影响人的生存质量和身体健康，人们对牙周治疗的要 求将明显增加。牙周病的治疗一直是临床重点研究领域之一。牙周病的治疗不仅在于炎症 消除，更重要的是在于使已破坏的牙周组织再生和形成牙周新附着 (new-attachments如何获得牙周组织完全再生，是至今尚未解决的难题，也 是牙周病研究领域中的重要课题和突破点。弓l导牙周组织再生(periodontal guided tissue regeneration, GTR)技 术是近年来根据Melcher提出的牙周组织再生潜能理论发展起来的牙周病治疗 新方法，被认为是目前最先进的牙周治疗方法。它是将屏障膜置于牙龈瓣和处 理过的根面之间，阻挡牙龈上皮和结缔组织与根面先接触，保证牙周前体细胞 优先占据牙根面，依靠牙周前体细胞迁移、分化、增殖，重新形成牙周组织，一 建立牙周新附着。目前，GTR屏障膜有多种，总体可分为三类(1) 不可吸收膜以膨体聚四氟乙烯(e-PTEE)为主要代表，已较广泛用 于实验研究和临床治疗。但此类膜需二次手术取出，且取出时间难以掌握，放 置时间过长会影响牙周组织再生和增加感染机会。(2) 可吸收性膜主要有聚合胶原膜、聚乳酸膜、乳酸一乙酸共聚体膜等。 此类膜的优点是能在体内逐渐降解，避免二次手术，减少了创伤。(3) 生物素化屏障膜上述两类GTR屏障膜均为单纯性屏障膜，仅能提供 物理性屏障作用，治疗后很难达到牙周组织完全再生，因此生物素化屏障膜逐 渐成为目前研究的趋势。生物素化屏障膜的含义是屏障膜不仅具备上述膜的作 用，还具有一定的生物活性，主动引导牙周组织前体细胞生长、分化、增殖。目前釆用的生物素化屏障膜设计模式是把可吸收性屏障膜材料、生物活性 因子和缓释载体三者复合起来。研究证实生物素化屏障膜的牙周治疗效果优于 单纯性屏障膜。但是，目前生物素化屏障膜的研究还处于探索阶段，缺乏系统 性。如何解决生物活性因子的载体问题及如何充分利用和调动GTR屏障膜材料、 生物活性因子、缓释载体的综合效应，是今后牙周病治疗和GTR技术发展的方 向。牙周组织的再生依赖于牙周前体细胞在多种生长因子的网络调控作用下， 完成分化、增殖和细胞外基质的生物合成。如何正确选用和组合生长因子一直 是研究中的难题。人们在研究中发现，人重组骨形成蛋白-2(rhBMP2)和碱性成纤 维细胞生长因子(bFGF)在生物学功能上有良好的互补性，共同参与骨和软骨 的生长代谢调节。体外试验发现，两者联合应用对牙周膜细胞的增殖有协同作 用。但它们在体内易被迅速弥散和降解，必须频繁给药，且应用效果较差。这 就需要将rhBMP2和bFGF加入到合适的载体/控释系统中，使其免受蛋白水解， 在需要的地方长时间可控释放，并保持生长因子的活性。壳聚糖(chitosan)是甲壳素(chitin)的脱乙酰基产物，是自然界第二 大类天然多糖，广泛存在于昆虫、甲壳类动物的外壳和真菌细胞壁中，无毒、 无免疫原性，具有良好的组织相容性、生物可降解性，被广泛应用生物医学和 药学的实验和临床研究。壳聚糖作为一种新型药用载体在缓释给药系统，特别 是在微球系统中的应用已引起人们广泛的关注。壳聚糖微球(chitosan microsphere, CM)有如下作用特点①控制释放，CM包封药物后具有明显的控 释和延长药效的作用。②增加药物的靶向性。③提高疏水性药物通过细胞膜， 壳聚糖微球可以改变膜转运机制，增加药物对生物膜的通透性。④增加药物的 稳定性。(D减少给药剂量，降低毒副反应，提高药物疗效。目前，还没有将壳聚糖微球包封生长因子应用于牙周组织再生中的报道； 也没有关于壳聚糖微球包封bFGF或rhBMP2的研究；及含壳聚糖微球的生物素化 壳聚糖膜的研究。
技术实现思路
为了能够较长时间控制释放rhBMP2和bFGF,保护生长因子在牙周再生中发 挥更好的作用，以实现牙周组织完全再生，恢复牙周功能，本专利技术的目的是提供 一种复合生物素化壳聚糖膜的制备及其在牙周组织再生中的应用。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的一种复合生物素化壳聚糖膜，其特征在于它包含人重组骨形成蛋白-2(rhBMP2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)，所述人重组骨形成蛋白-2和碱 性成纤维细胞生长因子均由壳聚糖微球包裹；人重组骨形成蛋白-2壳聚糖微球 和碱性成纤维细胞生长因子壳聚糖微球均被包裹于复合生物素化壳聚糖膜中。上述一种复合生物素化壳聚糖膜的制法，包括以下步骤1) 以壳聚糖微球包裹人重组骨形成蛋白-2，制成人重组骨形成蛋白-2壳 聚糖微球；2) 以壳聚糖微球包裹碱性成纤维细胞生长因子，制成碱性成纤维细胞生 长因子壳聚糖微球；3) 分别将人重组骨形成蛋白-2壳聚糖微球和碱性成纤维细胞生长因子壳 聚糖微球加入壳聚糖醋酸溶液中，干燥，制成复合生物素化壳聚糖膜。干燥时， 应在4'C条件下。上述一种复合生物素化壳聚糖膜在牙周组织再生中的应用。又一种复合生物素化壳聚糖膜，其特征在于它包括人重组骨形成蛋白-2， 所述人重组骨形成蛋白-2由壳聚糖微球包裹；人重组骨形成蛋白-2壳聚糖微球 被包裹于生物素化壳聚糖膜中。又一种复合生物素化壳聚糖膜的制法，包括以下步骤1) 以壳聚糖微球包裹人重组骨形成蛋白-2，制成人重组骨形成蛋白-2壳 聚糖微球；2) 将人重组骨形成蛋白-2壳聚糖微球加入壳聚糖醋酸溶液中，干燥，制 成复合生物素化壳聚糖膜。干燥时，应在4'C条件下。又一种复合生物素化壳聚糖膜在牙周组织再生中的应用。再一种复合生物素化壳聚糖膜，其特征在于它包括碱性成纤维细胞生长 因子，所述碱性成纤维细胞生长因子由壳聚糖微球包裹；碱性成纤维细胞生长 因子壳聚糖微球包裹于生物素化壳聚糖膜中。再一种复合生物素化壳聚糖膜的制法，包括以下步骤1)以壳聚糖微球包裹碱性成纤维细胞生长因子，制成碱性成纤维细胞生 长因子壳聚糖微球；2)将碱性成纤维细胞生长因子壳聚糖微球加入壳聚糖醋酸溶液中，干燥， 制成复合生物素化壳聚糖膜。干燥时，应在4'C条件下。再一种复合生物素化壳聚糖膜在牙周组织再生中的应用。 本专利技术利用rhBMP2和bFGF生物学功能及壳聚糖特点，以组织相容性良好的 壳聚糖微球作为rhBMP2和bFGF的载体/控释系统,制成一种载rhBMP2或载bFGF 或载rhBMP2和bFGF两种生长因子壳聚糖微球的新型GTR壳聚糖膜——复合生物 素化壳聚糖膜，为牙周病的治愈提供一种有效的方法，也为实现牙周组织完全再 生提供一种新的途径。本专利技术利用rhBMP2和bFGF生物学功能和壳聚糖微球的作用特点，通过 Berthold等的沉淀/凝聚法制成壳聚糖微球，用壳聚糖微球包封rhBMP2和bFGF， 形成rhBMP2和bFGF壳聚糖微球。将该微球均匀散布于壳聚糖醋酸溶液中，在一 定条件下成膜，从而制成生物素化屏障膜。因该膜中含有rhBMP2和bFGF壳聚糖 微球，能够较长时间控制释放rhBMP2和bFGF，保护生长因子在牙周再生中发挥 更好的作用。以实现牙周组织完全本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种复合生物素化壳聚糖膜，其特征在于：它包含人重组骨形成蛋白－２和碱性成纤维细胞生长因子，所述人重组骨形成蛋白－２和碱性成纤维细胞生长因子均由壳聚糖微球包裹；人重组骨形成蛋白－２壳聚糖微球和碱性成纤维细胞生长因子壳聚糖微球均被包裹于复合生物素化壳聚糖膜中。

【技术特征摘要】
1、一种复合生物素化壳聚糖膜，其特征在于它包含人重组骨形成蛋白-2和碱性成纤维细胞生长因子，所述人重组骨形成蛋白-2和碱性成纤维细胞生长因子均由壳聚糖微球包裹；人重组骨形成蛋白-2壳聚糖微球和碱性成纤维细胞生长因子壳聚糖微球均被包裹于复合生物素化壳聚糖膜中。2、 一种权利要求1所述复合生物素化壳聚糖膜的制法，包括以下步骤1) 以壳聚糖微球包裹人重组骨形成蛋白-2，制成人重组骨形成蛋白-2壳 聚糖微球；2) 以壳聚糖微球包裹碱性成纤维细胞生长因子，制成碱性成纤维细胞生 长因子壳聚糖微球；3) 分别将人重组骨形成蛋白-2壳聚糖微球和碱性成纤维细胞生长因子壳 聚糖微球加入壳聚糖醋酸溶液中，干燥，制成复合生物素化壳聚糖膜。3、 一种权利要求1所述复合生物素化壳聚糖膜在牙周组织再生中的应用。4、 一种复合生物素化壳聚糖膜，其特征在于它包含人重组骨形成蛋白 -2，所述人重组骨形成蛋白-2由壳聚糖微球包裹；人重组骨形成蛋白-2壳聚糖 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：卜寿山，许金菊，金颂良，
申请(专利权)人：江苏省人民医院，
类型：发明
国别省市：84[]