本发明专利技术涉及针对结合因子ＶＩＩＩ的Ｃ１结构域的因子ＶＩＩＩ抑制性抗体的抗独特型单克隆抗体，还涉及产生这种抗独特型单克隆抗体的细胞系，涉及所述抗独特型单克隆抗体作为药物的用途，以及更特别地涉及它用于制造用于治疗血友病Ａ的药物的用途。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】中和针对因子Vl I I的C1结构域的抑制性抗体的抑制活性的抗独特型抗体现有技术和引言本专利技术涉及针对因子VIII抑制性抗体的单克隆抗独特型抗体，所述因子VIII抑 制性抗体结合因子VIII的Cl结构域，以及涉及产生这种单克隆抗独特型抗体的细胞系，涉 及这种单克隆抗独特型抗体作为药物的用途，以及更特别地，涉及其用于制造治疗血友病A 的药物的用途。血友病A是与染色体X的异常相关的遗传疾病，其在受影响的人中显示了自身不 能凝结。这种疾病是涉及凝结的蛋白质因子VIII (FVIII)蛋白的基因上突变的结果，其决 定了血液中因子VIII的完全缺乏，或者其部分不足。血友病A是影响血液凝固的最常见的功能不全在法国，5000人中1名男性是患 病的，其代表了患有血友病的患者的80 %。另一种类型的血友病，血友病B，影响患血友病 的20%的患者它起因于其他凝结因子，称为因子IX中的缺乏。血友病(A或B型)的当前的治疗包括静脉内施用缺乏的或缺失的凝结因 子。在法国，用于治疗血友病患者的因子VIII可以以分级和生物技术法国实验室 (Laboratoire Fran9&lS du Fractionnement et desBiotechnologies) (LFB)或国际药 物实验室提供的血液衍生的药物的形式，或以通过遗传工程方法制备的重组药物的形式 来获得。编码因子VIII的ADN已经被有效地分离并在哺乳动物细胞中表达(Wood等， Nature (1984) 312 330-337)，它的氨基酸序列从ADNc推导出。分泌的因子VIII (FVIII)是分子量300KDa(2332个氨基酸)的糖蛋白，在内部凝 结途径的活化中起到关键作用。无活性的FVIII由六个区域组成A1 (残基1-372)、A2(残 基 373-740)、B (残基 741-1648)、A3 (残基 1649-2019)、Cl (残基 2020-2172)和 C2 (残 基2173-2332)，从N-末端到C-末端。在被分泌之后，FVIII作用于von Willebrand因子 (vffF)，其保护FVI11对抗血浆蛋白酶。FVIII在被凝血酶裂解时从vWF上解离。这种裂解 引起了 B结构域的消除和异二聚体的形成。FVIII以这种形式在血浆中循环。这种异二聚 体由重链(A1、A2)和轻链(A3、C1、C2)组成。当FVIII注入到血友病患者中时，它与患者的血液循环中的vonWillebrand因子 结合。活化的因子VIII作为活化的因子IX的辅助因子起作用，加速因子X向活化的因子 X的转变。活化的因子X将凝血酶原转变成凝血酶。然后凝血酶将纤维蛋白原转化为纤维 蛋白，发生凝结。因子VIII施用遭遇的主要问题是在患者中针对因子VIII的抗体的出现，称为“抑 制性抗体”。这些抗体中和了因子VIII的促凝血活性，其在注入时就失活了。因而，施用的 凝结因子在可以停止出血之前被破坏了，其导致严重的并发症，因而引起治疗失效。进一步 的，某些遗传学的非血友病患者可能发展出针对内源因子VIII的抑制物这称为获得性血 友病。研究显示了抗因子VIII免疫反应是多克隆IgG型的，主要属于IgG4和IgGl亚 类，更罕见地属于IgG2。IgG3亚类从不出现。轻链通常是Kappa型的。IgG4的过量呈递对于具有长期的建立的抑制物的血友病患者是更显著的。FVIII分子的C2和A2结构域是免 疫反应的有帮助的目标，尽管在某些情况下，检测到针对A3结构域的抗体。当血友病患者 的血浆穿过具有固定的FVIII的免疫吸附柱时，有可能纯化总抗FVIII抗体。回收的数量 通常高于 100 μ g/10mg 总 IgG(Gilles JG 等(1993)Blood ;82 :2452_2461)。已经开发了动 物模型来研究因子VIII的抑制物的形成；用人类重组因子VIII免疫的大鼠显示了多克隆 型的快速免疫反应(Jarvis 等，Thromb Haemost. 1996 Feb ；75 (2) :318_25)。抗因子 VIII 抗体干扰因子VIII的功能的机制有很多，包括干扰因子VIII的蛋白水解裂解、干扰因子 VIII与不同配体例如von Willebrand因子(vWF)、磷脂(PL)、因子IX、活化的因子X(FXa) 或APC (活化的蛋白C)的相互作用。容许减弱这种免疫反应的后果的几种治疗是可用的，治疗的实例例如，涉及去氨 加压素(desmopressin)，去氨加压素是刺激因子VIII的产生的合成激素，凝结促进剂，例 如凝血酶原复合物的浓缩物或活化的凝血酶原复合物的浓缩物，重组因子Vila，血浆取出 法和大量或中间数量的因子VIII的输注。尽管如此，这些方法是非常昂贵和低效力的。由于这种免疫多克隆反应的体内分析的复杂性，针对因子VIII的某些结构域的 单克隆抗体已经被某些科研小组分离。就此，已经分离了 IgG4kappa型的人类单克隆抗体 LE2E9。这种抗体针对因子VIII的Cl结构域，并且抑制因子VIII的辅助因子活性和它与 von Willebrand 因子的结合(Jacquemin 等，(2000)Blood 95 156-163)。以同样的方法，分 离了针对因子VIII的C2结构域的人类单克隆抗体，称为B02C11 (IgG4kappa)，从患有血友 病A、具有抑制物的患者的记忆B细胞的库产生(Jacquemin等，Bloodl998 Jul 15 ；92 (2) 496-506)。B02C11识别因子VIII的C2结构域，抑制它与von Willebrand因子和与磷脂的 结合。它完全地抑制天然的和活化的因子VIII的促凝结活性。单克隆抗体的进一步的实 例是针对因子VIII的A2结构域的B0IIB2抗体。B0IIB2抗体抑制99%的因子VIII活性。 通过与A2结构域结合，它可以干扰并抑制FIXa的结合，它在FVIII的这个区域内含有低亲 和性结合位点，因而抑制FIXa的酶活性。作用的第二种设想的途径是干扰FVIII的异二聚 形式(A2:A1和A3:C1:C2)与FVIII的异三聚形式(A2和Al和A3 Cl C2)之间的平衡，通 过加速这些复合物的A2结构域的解离，使得它们无功能。(Ananyeva匪等，(2004)Blood Coagul Fibrinolysis. Mar. 15(2) 109-24. Review)。借助于这些新的工具，进一步的、更新近的针对因子VIII抑制物抗体的策略考 虑施用中和抑制物抗体的抗独特型抗体(具有与其他抗体的可变区相互作用的能力的抗 # ) (Saint-Remy JM 等，(1999) Vox Sang ;77 (suppl 1) :21_24)。小鼠抗独特型抗体，称为 14C12，在文献W02004/014955中公开，在体内以剂量依赖性方式中和抗因子VIII目标抗 体(单克隆抗体B02C11)的抑制性质，所述抗因子VIII目标抗体针对因子VIII的C2结构 域。抗因子VIII免疫反应是多克隆的，还开发了针对因子VIII的A2结构域的小鼠抗独特 型抗体(在专利申请FR 05 08320中描述)。A2结本文档来自技高网...
【技术保护点】
针对因子Ⅷ人类抑制性抗体的单克隆抗独特型抗体，所述抑制性抗体针对因子Ⅷ的Ｃ１结构域，其特征在于所述抗体的每条轻链的至少一个ＣＤＲ区域（互补决定区）含有与选自序列ＳＥＱＩＤＮＯ：１２、ＳＥＱＩＤＮＯ：１３、ＳＥＱＩＤＮＯ：１４的序列具有至少７０％同一性的肽序列，以及其中所述抗体的每条重链的至少一个ＣＤＲ区域具有与选自序列ＳＥＱＩＤＮＯ：９、ＳＥＱＩＤＮＯ：１０、ＳＥＱＩＤＮＯ：１１的序列具有至少７０％同一性的肽序列。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
【专利技术属性】
技术研发人员：JG吉尔斯，MG杰奎明，JM圣雷米，C贝伦斯，
申请(专利权)人：LFB生物科技公司，
类型：发明
国别省市：FR[法国]
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