本发明专利技术公开了一种诊断试验和方法，其包括将血液或另一种生物液样品与试验化合物混合，并将血液或生物液点样在滤纸上以便随后分析试验化合物对血液或生物液的作用。所述生物液可以是脑脊液、腹膜液、囊液、羊膜液、灌洗液、唾液、细胞提取液或组织提取液。试验化合物在以下中选择：氨基酸、肽、蛋白质、糖、寡糖、多糖、糖蛋白、脂质、脂蛋白、粘多糖、激素、类固醇、维生素，影响血液或生物液而导致它们组成改变的低分子量合成或天然化合物，例如毒素、变应原、自身抗原、细菌蛋白或多糖、病毒蛋白、真菌蛋白或多糖、寄生虫蛋白或多糖、细菌脂多糖或与疾病相关的任何其他化合物。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利
本专利技术公开了 一种诊断试验和方法，其用于将血液或者另 一种生物液(biological fluid)或样品与试验化合物混合，并将血液点样在滤纸上以便随 后分析试验化合物对血液或液体样品的作用。一般背景血液是主要由血浆和细胞组成的复杂的混合物(1-3)。通过离心和其 他技术可将血浆与细胞分离。如果将血浆静置，它将通过凝固凝结成块， 从而可分离血清与血凝块。可通过加入不同的抗凝剂(包括EDTA、 EGTA、 肝素、柠檬酸盐和其他剂)抑制凝固。血液的细胞包括树突细胞、巨噬细 胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞、 红细胞以及包括造血干细胞的各种干细胞。此外由巨核细胞产生的血小板 也大量存在。血浆含有上千种蛋白质，基本上含有人类蛋白质组的任何蛋 白(4， 5)。其中一些蛋白参与运输、血液凝块或免疫防御，而其他的起 到血液细胞和组织细胞间信号分子的功能。尤其，免疫系统的细胞(树突 细胞、巨噬细胞、T细胞、B细胞、自然杀伤细胞)的活性通过信号分子 (例如，白细胞介素、趋化因子、生长因子)、组织抗原和受体的复杂网 络来调控(3, 6-9)。免疫系统细胞的活性和特异性可通过几种方法和测定 来研究和定量。T细胞、B细胞和其他细胞可通过使用细胞表面标记分子 的抗体的荧光激活细胞分选术定量(10， 11)。特异的T细胞可通过细胞 毒性测定、铬释放测定和细胞因子释放测定(例如ELISPOT) (12-16)以 及通过使用不同的肽-主要组织相容性复合物(MHC )蛋白构建体(constmct) 来测量(17, 18)。 B细胞的活性可通过测定从B细胞释放的特异性抗体 的水平来测量(19， 20)。测量从血液细胞释放的信号分子中的主要问题是与定量相关的贮藏 和运输的问题。许多血液成分(例如细胞因子)是不稳定并短寿命的，导 致其在孵育、贝i藏和运输期间降解。由于这一原因，比较性分析和诊断试 验必须在中心实验室的血液收集和孵育后立刻完成。理想地，所有待比较 的样品应使用校准的仪器连续分析。这并不总是可行的，例如，当在偏远地区采集血液样品时，当进行体 外和体内时间性研究时或当比较来自大量不同个体的样品时。这一 问题的一种解决方法是在运输和贮藏时冷冻样品。然而，这一方法不能保证成分 的保存，需要巨大的冷冻、运输和贮藏容量，需要在每次进行分析时解冻、 并且容易受到电力供应短缺的损害。由于这一原因，需要血液和生物样品 保存的可靠方法，并且需要采用可靠的样品保存与样品处理结合的诊断试 验。使用滤纸进行血液点样以用于随后的分析是众所周知的，例如用于新 生儿血液样品的遗传代谢疾病分析(21)。这样的优点是血液成分的良好 保存、容易运输和容易长期lt藏。然而在与试验化合物孵育后使用滤纸以 及类似方法来干燥和贮藏血液样品以前尚未#皮^使用或描述过，可能因为这 被预期为不可能或不可行的。专利技术概述本专利技术公开了 一种诊断试验和方法，其用于将血液或另 一种生物液与 试验化合物混合，并将血液点样在滤纸上以便干燥、保存和随后在此后的 任何时间分析试验化合物对血液的作用。专利技术的详细公开内容本专利技术公开了 一种诊断试验和方法，其包括将血液或另 一种生物液样 品与试验化合物混合，并将血液点样在滤纸上以便随后分析试验化合物对血液的作用。所述生物液可以是脑脊液、腹膜液(peritoneal fluid)、嚢液(cyst fluid)、羊膜液(amniotic fluid)、灌洗液(lavage fluid)、唾液、细胞提取液或组织提取液。所述化合物在以下中选择氨基酸、肽、蛋白质、糖、寡糖、 多糖、糖蛋白、脂质、脂蛋白、粘多糖、激素、类固醇、维生素、影响血 液而导致血液组成改变的低分子量合成或天然化合物，例如毒素、变应原、 自身抗原、细菌蛋白或多糖、病毒蛋白、真菌蛋白或多糖、寄生虫蛋白或 多糖、细菌脂多糖或与疾病相关的任何其他化合物。依照本专利技术的诊断试验和方法分析样品的细胞因子、趋化因子和生长因子和/或神经递质以及其他多肽和蛋白的含量，所述蛋白例如CRP、 IgG、 IgA、 IgM、 IgD、 IgE、特异性(即抗原特异性)抗体、运铁蛋白、白蛋白 和/或运曱状腺素蛋白。在诊断试验中，通过免疫测定、生物测定、质谱分析法、HPLC、 GC、 GC-MS来分析试验化合物的作用，这些测定和分析法例如ELTSA测定、 FLISA测定、DELFIA测定、Luminex测定、发光测定、电化学发光测定、 闪烁亲近测定(scintillation proximity assay)、》文射免疫测定、MALDI-MS 、 ESI-MS和开放式MS (ambient-MS)(例如DESI-MS )。本专利技术还公开了用于将血液或者另 一种生物液或样品与试验化合物 混合，并将所述混合物点样在滤纸上以便在随后分析试验化合物对所述血 液、生物液或样品的作用之前贮藏、运输和/或处理的方法。定义分析物意指可通过分析方法检测或定量的任何化合物。试验化合物的作用纟皮理解为其和血液或者任何其他生物液或样品的 成分相互作用以导致血液组成的任何种类的变化。干燥意指水的去除。滤纸意指适于收集、干燥并贮藏血液的任何一张纸、布或其他材料。PKU纸意指用于对新生儿的血液样品进行苯丙酮尿症筛选的纸/滤纸。点样意指将血液样品或者任何其他生物液或提取液或样品施加在一 张适于精确血液采样的标准化纸上。通过将固定体积的血液施加在一张纸 上或通过将血液施加于纸直到已界定的区域辟皮血液覆盖来进行点样。接下来，将所述纸完全千燥并在低湿度条件下直接贮藏或运输至贮藏处以便进 行随后的分析。试^Mt合物意指可与血液或者任何其他生物液或样品混合或者可被 加入其中的任何化学的、生物的或自然界的化合物或物质。试验样品意指试验化合物的任何制剂或混合物。使用了以下的缩写BCG意指卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin) BDNF意指脑源性神经营养因子 BSA意指牛血清白蛋白 CRP意指C反应蛋白DBSS意指干血斑点样品(dried blood spot sample)EGF意指表皮生长因子 ELISA意指酶联免疫吸附测定 ELISPOT意指酶:f关免疫斑点测定 ESI意指电喷雾电离FLISA意指荧光免疫吸附测定(fluorescence-linked immunosorbent assay)GC意指气相色语G-CSF意指粒细胞集落刺激因子GM-CSF意指粒细胞巨噬细胞集落刺激因子HPLC意指高效液相色语IFN意指干扰素Ig意指免疫球蛋白IGF意指胰岛素样生长因子Il意指白细胞介素 LPS意指脂多糖MALDI意指基质辅助激光解吸/电离 M-CSF意指巨噬细胞集落刺激因子 MCP意指单核细胞趋化蛋白 MHC意指主要组织相容性复合物 MIF意指巨噬细胞移动抑制因子 MIP意指巨噬细胞炎性/抑制蛋白 MMP意指基质金属蛋白酶 MS意指质谱分析法 NT意指神经营养蛋白PBS意指磷酸盐緩沖盐水(phoaphate-buffered saline)PCR意指聚合酶链反应PKU意指苯丙酮尿症(phenyl ketoneuria)PPD意指纯化蛋白衍生物TGF意指转化生长因子TNF意指肿瘤坏死因子TREM意指本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种诊断试验和方法，其包括将血液或另一种生物液样品与试验化合物混合，并将所述血液点样在滤纸上以便随后分析所述试验化合物对所述血液的作用。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：冈纳霍恩，大卫M霍加德，克里斯汀斯科哥斯特兰德，夏洛特斯瓦克约根森，
申请(专利权)人：国立血清研究所，
类型：发明
国别省市：DK[丹麦]
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