抑制或治疗与细胞内形成蛋白纤维状内含体或聚集体相关的疾病的方法技术

携带包含哺乳动物细胞黏附序列的肽序列的治疗剂可以用来抑制或治疗与细胞内形成蛋白纤维状内含体或聚集体相关的疾病，用来抑制蛋白纤维状内含体或聚集体的细胞内形成，并且用来解聚预先形成的细胞内蛋白纤维状内含体或聚集体。在其表面上展示非丝状噬菌体ＲＧＤ细胞黏附序列而不是除所述ＲＧＤ细胞黏附序列之外的抗体或非丝状噬菌体抗原的丝状噬菌体是这样的治疗剂的优选实施方案。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及抑制细胞内蛋白纤维状内含体或聚集体，和溶解预 先形成的细胞内蛋白纤维状内含体或聚集体，和涉及用于抑制或治疗与细 胞内形成蛋白纤维状内含体或聚集体相关的疾病的方法和药物组合物。相关技术描述斑形成疾病特征在于在脑中存在淀粉状蛋白斑沉积物以及神 经变性。淀粉状蛋白沉积物由聚集成不溶团块的肽形成。在不同疾病中肽 的性质是不同的，但是在大部分情形中，所述聚集体具有P-褶皱的折叠结 构，并且用刚果红染料染色。除了阿尔茨海默病(AD)，其包括早期发作性 阿尔茨海默病、晚期发作阿尔茨海默病和症状发生前阿尔茨海默病，其它 以淀粉状蛋白沉积物为特征的疾病是，例如，SAA淀粉样变，遗传学冰岛 综合征，多发性骨髓瘤，和朊病毒疾病。在动物中的最常见的朊病毒疾病 是绵羊和山羊的痒病和牛的牛海绵状脑病(BSE) (Wilesmith禾B Wells， 1991)。在人类中己经鉴定了4种朊病毒疾病(i)库鲁病,(ii)克罗伊茨费 尔特-雅各布病(CJD)， (iii)格-施-沙病(GSS),和(iv)致命的家族性失眠症 (FFI) (Gajdusek, 1977;和Tritschler等.1992)。朊病毒疾病涉及正常细胞朊病毒蛋白(PrPC)向对应的痒病同 种型(PrPSc)的转化。分光镜测量表明，PrPC向痒病同种型(PrPSc)的转化 涉及主要的构象转变，暗示朊病毒疾病，同其它淀粉状蛋白生成疾病一样， 是蛋白构象紊乱症。从PrPC向PrPSc转变伴随着ot-螺旋二级结构的减少(从42%到30%)和卩-折叠含量的显著增加(从3%到43%) (Caughey等, 1991;和Pan等，1993)。这种重排与异常的生理化学性质相关，包括在非 变性去污剂中的不溶性和对蛋白质水解的部分抗性。先前的研究已经表明 与人PrP的残基106-126 (PrP106-126)同源的合成肽表现出PrPSc的一些 致病和生理化学特征(Selvaggini等，1993; Tagliavini等，1993;和Forloni等, 1993)。该肽表现出显著的构象多态性，在不同环境中获得不同的二级结构 (DeGioia等，1994)。在缓冲溶液中它倾向于采取(3-折叠构象，并且聚集成 淀粉状蛋白纤维，该淀粉状蛋白纤维部分抵抗蛋白酶消化。最近，抗体3F4 及其肽表位(Prpl04-113)的复合物的X-射线结晶研究提供了这一柔性区域 的结构图，该柔性区域被认为是对于发展朊病毒疾病所必需的构象重排的 成分(Kanyo等，1999)。参与折叠-解折叠和/或增溶-聚集过程的序列的种类 鉴定可以为斑形成疾病的治疗打开新的方向，其是基于防止聚集和/或诱导 解聚集(Silen和Agard， 1989; Frenkel等，1998; Horiuchi禾卩Caughey， 1999)。 阿尔茨海默病(AD)是导致老年痴呆的进展性疾病。广义来说， 该病分成两类晚期发作性，其在老年(典型地超过65岁)时发生，和 早发作性，其在老年期之前例如在35-60岁就充分发展。在这两种类型的 疾病中，病理是相似的，但是在从更早的年龄就开始的病例中，异常倾向 于更严重和广泛。该疾病特征在于在脑中的两种类型的损伤，老年斑和神 经原纤维缠结。老年斑是跨越多达150 mm的无组织嗜中性粒细胞的区域， 在中央有细胞外淀粉状蛋白沉积物，通过脑组织切片的显微镜分析可以看 到。神经原纤维缠结是tau蛋白的细胞内沉积，其由成对的彼此缠绕的两 个细丝组成。老年斑的主要组成要素是叫作淀粉状蛋白P(Af3)或P-淀粉状肽 ((3AP或(3A)的肽。淀粉状蛋白(3肽是叫作淀粉状蛋白前体蛋白(APP)的前 体蛋白的39-43个氨基酸的内部片段。在APP蛋白内部的一些突变与阿尔 茨海默病的存在相关(Goate等，(1991)，缬氨酸717到异亮氨酸；Chartier Harlan等，(1991),缬氨酸717到甘氨酸；Murrell等，(1991),缬氨酸717到 到苯丙氨酸；Mullan等，(1992),双突变，赖氨酸595-甲硫氨酸596变成天 冬酰胺595-亮氨酸596)。认为这样的突变通过增加或改变APP向(3-淀粉状蛋白的加工、特别是APP向增加量的长形式的P-淀粉状蛋白(即，A(31-42和A卩l-43) 的加工而引起阿尔茨海默病。认为在其它基因诸如早老蛋白基因，即PS1 和PS2中的突变间接影响APP的加工，产生增加量的长形式的(3-淀粉状 蛋白(参见Hardy, TINS 20, 154, 1997)。这些观察表明P-淀粉状蛋白，并且 特别是其长形式，是阿尔茨海默病中的病因要素。其它具有自我聚集迹象的肽或蛋白也是己知的，诸如，但不限 于，支链淀粉(Yoimg等，1994);铃蟾肽，蛙皮縮胆囊肽，縮胆囊素八肽，章 鱼唾腺精(eledoisin),胃泌素相关的五肽，胃泌素四肽，促生长素抑制素 (还原的)，物质P;和肽，促性腺素释放素，促生长素抑制素N-Tyr (Banks 和Kastin, 1992)。下表1提供与神经变性相关的一些构象疾病的列表。表l与神经变性相关的构象疾病 蛋白质病症 阿尔茨海默病 帕金森病 朊病毒疾病肌萎縮性侧索硬化病脊髓小脑共济失调(SCA1)脊髓小脑共济失调(SCA3)脊髓小脑共济失调(SCA6)脊髓小脑共济失调(SCA7)亨廷顿病Entatombral-pallidoluysian萎縮脊髓和延髓肌肉萎縮遗传性大脑淀粉状蛋白血管病家族性淀粉样变额颞叶痴呆英国/丹麦痴呆家族性脑病淀粉状蛋白-P(x-突触核蛋白PrPSODI共济失调蛋白-1 共济失调蛋白-3 转通道共济失调蛋白-7 亨廷顿蛋白(Huntington) 萎縮蛋白-1 雄激素受体半胱氨酸蛋白酶抑制剂-C的片段运甲状腺素蛋白/溶菌酶突变的tau蛋白突变的briPP蛋白片段突变的神经丝抑蛋白9关于淀粉状蛋白纤维的出版物表明圆柱形的(3-折叠是与一些x-射线和电子显微镜数据相一致的唯一的结构，并且阿尔茨海默A|3片段 和变体的纤维可能是由两个或三个同中心圆柱形P-折叠组成(Peretz等， 2002)。完整的A|3肽包含42个残基，恰好是为圆柱形外壳提供核心的准 确数目；这一发现和在不存在脯氨酸时在由A(3肽组成的P-折叠中的许多 可能的强静电相互作用解释了该Af3肽形成在阿尔茨海默患者中发现的细 胞外淀粉状蛋白斑的倾向性。如果这种解释是正确的，则淀粉状蛋白由具 有中央充满水的腔的狭窄的管(纳米管)组成。淀粉状蛋白斑体外生长的 可逆性提示在斑中和在溶液中的卩A之间的稳定状态平衡(Maggio和 Mantyh, 1996)。 (3A聚合作用对肽-肽相互作用形成|3-皱褶的折叠原纤维的 依赖性，以及其它蛋白对该反应的刺激影响，表明淀粉状蛋白形成可以进 行调节。已经进行了许多尝试来发现能够干扰淀粉状蛋白形成的物质。其 中研究最多的化合物是抗体、由(3-断裂者(breaker)氨基酸如脯氨酸组成的 肽、向识别基序上添加带电荷的基团和将N-甲基化的氨基酸用作构建组件 (由Gazit, 2002综述)。由交替的D和L残基组成的环肽形成这样的纳米管，该纳米 管通过将它们自身插入到膜中并且将它们去极化而杀死细菌(本文档来自技高网...

【技术保护点】
抑制或治疗与蛋白纤维状内含体或聚集体的细胞内形成相关的疾病的方法，所述方法包括向需要其的哺乳动物受试者施用有效量的治疗剂，所述治疗剂携带被展示的包含哺乳动物细胞黏附序列的肽序列，以能够将所述治疗剂内在化在细胞内，从而抑制或治疗所述疾病。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2006-7-21 60/832,2291.抑制或治疗与蛋白纤维状内含体或聚集体的细胞内形成相关的疾病的方法，所述方法包括向需要其的哺乳动物受试者施用有效量的治疗剂，所述治疗剂携带被展示的包含哺乳动物细胞黏附序列的肽序列，以能够将所述治疗剂内在化在细胞内，从而抑制或治疗所述疾病。2. 权利要求1的方法，其中所述治疗剂是在其表面上展示包括所述哺乳动物细胞黏附序列的所述肽序列的丝状噬菌体，其中所述丝状噬菌体不 展示除了所述肽序列之外的抗体或非丝状噬菌体抗原。3. 权利要求2的方法，其中所述丝状噬菌体选自由M13、 fl、禾口 fd 噬菌体、以及它们的混合物组成的组。4. 权利要求2的方法，其中所述丝状噬菌体是M13。5. 权利要求2的方法，其中约150个拷贝的所述肽序列被展示在所述 丝状噬菌体的表面上。6. 权利要求2的方法，其中所述丝状噬菌体是保留其丝状结构的UV-灭活的丝状噬菌体。7. 权利要求2的方法，其中有效量的所述丝状噬菌体是鼻内施用的。8. 权利要求2的方法，其中所述哺乳动物细胞黏附序列是Arg-Gly-Asp (RGD)细胞黏附序列。9. 权利要求l的方法，其中所述哺乳动物细胞黏附序列是Arg-Gly-Asp (RGD)细胞黏附序列。10. 权利要求9的方法，其中包括所述RGD细胞黏附序列的所述肽序 列是环形的。11. 权利要求10的方法，其中所述肽序列包括序列为SEQ ID N0:1 的所述RGD细胞黏附序列。12. 权利要求10的方法，其中所述肽序列包括序列为SEQ ID NO: 2 的所述RGD细胞黏附序列。13. 权利要求1的方法，其中所述疾病是阿尔茨海默病。14. 权利要求1的方法，其中所述疾病是具有雷维小体的痴呆症。15. 权利要求l的方法，其中所述疾病是帕金森病。16. 权利要求1的方法，其中所述疾病是肌萎縮性侧索硬化病。17. 权利要求1的方法，其中所述哺乳动物受试者是人。18. 抑制蛋白纤维状内含体或聚集体的细胞内形成的方法，所述方法 包括使治疗剂与能够形成蛋白纤维状内含体或聚集体的细胞内肽或多肽 接触，以抑制蛋白纤维状内含体或聚集体的细胞内形成，所述治疗剂携带 被展示的包括哺乳动物细胞黏附序列的肽序列，以能够将所述治疗剂内在 化在哺乳动物细胞内。19. 权利要求18的方法，其中所述治疗剂是在其表面上展示包括所述哺乳动物细胞黏附序列的所述肽序列的丝状噬菌体，其中所述丝状噬菌体 不展示除了所述肽序列之外的抗体或非丝状噬菌体抗原。20. 权利要求19的方法，其中所述丝状噬菌体选自由M13、 fl、和fd 噬菌体、以及它们的混合物组成的组。21. 权利要求19的方法，其中所述丝状噬菌体是M13。22. 权利要求19的方法，其中约150个拷贝的所述非丝状噬菌体肽序 列被展示在所述丝状噬菌体的表面上。23. 权利要求19的方法，其中所述丝状噬菌体是保留其丝状结构的 UV-灭活的丝状噬菌体。24. 权利要求18的方法，其中所述哺乳动物细胞黏附序列是 Arg-Gly-Asp (RGD)细胞黏附序列。25. 权利要求18的方法，其中所述哺乳动物细胞黏附序列是 Arg-Gly-Asp (RGD)细胞黏附序列。26. 权利要求25的方法，其中包括所述RGD细胞黏附序列的所述肽 序列是环形的。27. 权利要求63的方法，其中所述肽序列包括序列为SEQ ID NO:l 的所述RGD细胞黏附序列。28. 权利要求26的方法，其中所述肽序列包括序列为SEQ ID NO: 2 的所述RGD细胞黏附序列。29. 解聚预先形成的细胞内蛋白纤维状内含体或聚集体的方法，所述 方法包括使治疗剂与预先形成的细胞内纤维状内含体或聚集体接触，以解 聚预先形成的细胞内蛋白纤维状内含体或聚集体，所述治疗剂携带被展示的包括哺乳动物细胞黏附序列的肽序列，以能够将所述治疗剂内在化在细 胞内。30. 权利要求29的方法，其中所述治疗剂是在其表面上展示包括所述 哺乳动物细胞黏附序列的所述肽序列的丝状...

【专利技术属性】
技术研发人员：贝卡所罗门，诺亚沙仑，奥代德格林斯泰因，
申请(专利权)人：台拉维夫大学拉莫特，
类型：发明
国别省市：IL[以色列]