生产重组生物产品的方法技术

生产重组生物产品的方法，该方法采用哺乳动物生产细胞培养物，包含下述步骤：在细胞培养初期制备哺乳动物生产细胞的生物量，一旦达到希望的哺乳动物生产细胞浓度，造成哺乳动物生产细胞内一种或多种表１中的ｍｉＲＮＡ分子水平的增加。该方法也可以包含下述步骤：在培养初期开始时或在培养初期过程中，增加哺乳动物生产细胞内一种或多种表１中的ｍｉＲＮＡ分子的抑制剂的水平。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及制备中国仓鼠卵巢(CHO)细胞培养物的方法，和使用CHO 细胞培养物生产重组生物药物产品的方法。本专利技术也涉及重组CHO细胞系。
技术介绍
中国仓鼠卵巢细胞(CHO)是用于生产药用重组蛋白质的最广泛使用的细 胞系，而且涉及CHO变体的方法占大量年收入(Andersen和Krummen, 2002)。 尽管缺少完全测序的基因组，已经使用非-CHO阵列(Baik等人，2006)或专 有的CHO cDNA阵列(Wong等人，2006 )进行了许多重要的CHO转录特性 研究。这些研究已经描述了在CHO培养过程中低温和诱导细胞凋亡的效应。 类似地，许多蛋白质组学研究已经研究了 CHO的蛋白质组和培养条件例如温 度引起的蛋白质表达的变化(Baik等人，2006; Champion等人，1999; VanDyk 等人2003; Kaufmann等人，1999; Lee等人，2003)。这些研究已经增加了对 CHO功能的调节的总体理解，特别是对于降温效应。已经证实，重组生产CHO细胞系的低温培养会导致持续的生存力和增加 的比生产力(Al-Fageeh等人，2006; Fogolin本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生产重组生物产品的方法，该方法采用哺乳动物生产细胞培养物，该方法包含下述步骤：修饰哺乳动物生产细胞培养物，以调控细胞培养物中至少一种ｍｉＲＮＡ在生长周期中的水平。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】IE 2006-8-4 S2006/05871、一种生产重组生物产品的方法，该方法采用哺乳动物生产细胞培养物，该方法包含下述步骤修饰哺乳动物生产细胞培养物，以调控细胞培养物中至少一种miRNA在生长周期中的水平。2、 一种生产重组生物产品的方法，该方法釆用哺乳动物生产细胞培养物， 该方法包含下述步骤(a) 在细胞培养初期开始时或过程中，制备哺乳动物生产细胞的生物量；和(b) —旦达到希望的哺乳动物生产细胞浓度，造成哺乳动物生产细胞内一 种或多种表l中的miRNA分子水平的增加。3、 如权利要求1或2所述的方法，其中用一种或多种表1中的miRNA分子瞬时转染所述哺乳动物生产细胞。4、 如权利要求3所述的方法，其中所述miRNA分子是合成的miRNA前体分子。5、 如权利要求3或4所述的方法，其中使用脂质体递送、电穿孔或磷酸钙 介导所述转染。6、 如权利要求l或2所述的方法，其中用在转录启动子控制下的包含编码 表1中的miRNA分子的核酸序列的表达载体瞬时转染所述细胞。7、 如权利要求6所述的方法，其中所述核酸序列编码表l中的miRNA分 子的前体。8、 如权利要求6或7所述的方法，其中所述转录启动子是组成型或诱导型 启动子。9、 如权利要求1或2所述的方法，其釆用工程化成具有在诱导型启动子控 制下稳定整合到细胞基因组中的表1中的miRNA分子的编码序列或其前体的 哺乳动物生产细胞，且其中该方法包含，在细胞周期的生长停滞期开始时或即 将开始之前，诱导miRNA分子的表达。10、 如权利要求9所述的方法，其中所述启动子是温度诱导型启动子。11、 如任一项前述权利要求所述的方法，其中所述miRNA分子选自包含 hsa-miR-21和hsa-miR-24的组。12、 如权利要求l所述的方法，其包含下述步骤在培养初期开始时或在 培养初期过程中，提高哺乳动物生产细胞内一种或多种表1中的miRNA分子 的抑制剂的水平。13、 如权利要求l所示的方法，其中所述至少一种miRNA是初始的、前 体、或成熟的表1中的miRNA。14、 如权利要求12所述的方法，其采用工程化成具有在诱导型启动子控制 下稳定整合到细胞基因组中的抑制剂编码序列的哺乳动物生产细胞，且其中该 方法包含，在培养初期开始时或在培养初期过程中，诱导抑制分子的表达。15、 如权利要求14所示的方法，其中表达由表达诱导物的存在或表达阻抑 物的缺失来诱导。16、 如权利要求14或15所述的方法，其中一旦达...

【专利技术属性】
技术研发人员：帕克加梅尔，尼奥布鲁恩，马丁科莱尼斯，
申请(专利权)人：都柏林城市大学，
类型：发明
国别省市：IE[爱尔兰]