用于慢性疼痛的多蛋白酶治疗剂制造技术

本发明专利技术涉及用于慢性疼痛的多蛋白酶治疗剂。本发明专利技术包括含有至少两个轻链内肽酶结构域的梭菌属神经毒素衍生物，以及编码所述梭菌属神经毒素衍生物的核酸。在优选实施方案中，本发明专利技术包括用于通过使用所述梭菌属神经毒素衍生物治疗炎性病症(如关节炎)；慢性疼痛如神经性疼痛和炎性疼痛的方法和组合物，所述梭菌属神经毒素衍生物包括源自具有连接至LC/A内肽酶的LC/E来源的内肽酶的完整BoNT/A的那些。酶的LC/E来源的内肽酶的完整BoNT/A的那些。酶的LC/E来源的内肽酶的完整BoNT/A的那些。

【技术实现步骤摘要】
with a Neurotoxin to Improve Patient Function,美国专利号6,368,605(2002年4月9日)；Stephen Donovan,Method for Treating Cancer with a Neurotoxin,美国专利号6,139,845(2000年10月31日)；以及Mitchell F.Brin和Stephen Donovan,Methods for Treating Diverse Cancers,美国专利公布号2005/0031648(2005年2月10日)；
[0018]h)耳病症，参见例如，Stephen Donovan,Neurotoxin Therapy for Inner Ear Disorders,美国专利号6358926(2002年3月19日)；以及Stephen Donovan,Method for Treating Otic Disorders,美国专利号6265379(2001年7月24日)；
[0019]i)自主神经病症，参见例如，Pankai J.Pasricha和Anthony N.Kalloo,Method for Treating Gastrointestinal Muscle Disorders and Other Smooth Muscle Dysfunction,美国专利5,437,291(1995年8月1日)；
[0020]j)以及其他病症，参见例如，William J.Binder,Method for Treatment of Skin Lesions Associated with Cutaneous Cell
‑
proliferative Disorders,美国专利5,670,484(1997年9月23日)；Eric R.First,Application of Botulinum Toxin to the Management of Neurogenic Inflammatory Disorders,美国专利6,063,768(2000年5月16日)；Marvin Schwartz和Brian J.Freund,Method to Reduce Hair Loss andStimulate Hair Growth,美国专利6,299,893(2001年10月9日)；Jean D.A.Carruthers和Alastair Carruthers,Cosmetic Use of Botulinum Toxin for Treatment of Downturned Mouth,美国专利6,358,917(2002年3月19日)；Stephen Donovan,Use of a Clostridial Toxin to Reduce Appetite,美国专利公布号2004/40253274(2004年12月16日)；以及Howard I.Katz和Andrew M.Blumenfeld,Botulinum Toxin Dental Therapies and Procedures,美国专利公布号2004/0115139(2004年6月17日)；Kei Roger Aoki等人,Treatment of Neuromuscular Disorders and Conditions with Different Botulinum,美国专利公布号2002/0010138(2002年1月24日)；以及Kei Roger Aoki等人,Use of Botulinum Toxins for Treating Various Disorders and Conditions and Associated Pain,美国专利公布号2004/0013692(2004年1月22日)。
[0021]以下表2提供各种当前已知的肉毒杆菌相关的(BoNT和TeTX)梭菌属毒素的同种型的氨基酸序列。这些毒素彼此具有最少约35％氨基酸同一性且共享相同的功能性结构域组织和总体结构架构。天然存在的梭菌属毒素各自被翻译为约150kDa的单链多肽，所述单链多肽的二硫环随后被天然存在的蛋白酶(例如像内源性梭菌属毒素蛋白酶或环境中产生的天然存在的蛋白酶)通过蛋白水解切割作用而裂解。这种翻译后加工产生成熟双链分子，所述分子包含约50kDa轻链(LC)和约100kDa重链(HC)，二者通过单个链间二硫键和非共价相互作用结合在一起。
[0022]各成熟双链梭菌属毒素分子包含三个功能上不同的结构域：1)位于LC中的酶结构域，其包含含有特异性地靶向介导突触囊泡与细胞膜的融合的一种或多种SNARE蛋白的锌依赖性内肽酶活性的金属蛋白酶区；2)含于H链的氨基端半部(称为“H
N”)内的易位结构域，其促进毒素的至少LC链从内体释放至靶细胞的细胞质中；以及3)存在于H链的羧基端半部(H
C
)中的结合结构域，其决定毒素的结合活性和结合特异性。
[0023]H
C
包含H
CN
和H
CC
亚结构域(分别H
C
的N
‑
末端部分和C末端部分)。现在存在大量证据表明大多数或所有BoNT/X毒素使用“双重受体”结合靶细胞，其中毒素的包含H
CN
和H
CC
亚结
构域两者的H
C
部分结合某些细胞表面神经节苷脂和蛋白质受体(可能糖基化的)；所述蛋白质受体的结合有助于细胞内的毒素的内化。“X”意指肉毒杆菌毒素的任一血清型。虽然术语“BoNT/X”通常用于指示肉毒杆菌毒素的血清型，但所述术语还可包括其TeTX区。H
CC
结合在靶细胞的表面处复杂定位的受体。
[0024]应理解存在这些毒素的每种血清型的菌株或亚型；这些可在其氨基酸序列中、特别是(但非排他性地)在所指示毒素或毒素结构域的同一性或活性特征中无显著变化的非关键区(所谓的“可变”区)中在某种程度上不同。
[0025]在一些表1中，提供标准单字母和三字母氨基酸代码：
[0026]表1
[0027][0028][0029]表2
[0030][0031]本领域的普通技术人员认识到，梭菌属亚型毒素变体可存在于自然中，具有以上所示的氨基酸序列(或编码这些氨基酸序列的核苷酸序列)的变化。如本文所用，术语“天然存在的梭菌属结构域变体”意指由天然存在的过程产生的任何梭菌属结构域(内肽酶、易位和/或结合结构域)，包括但不限于由选择性剪接的转录物产生的梭菌属结构域同工型、由自发突变产生的梭菌属结构域同工型和梭菌属结构域亚型。如本文所用，天然存在的梭菌属结构域变体可与所述天然存在的梭菌属结构域变体所基于的参考梭菌属结构域实质上相同的方式起作用，且在本专利技术的任何方面中可取代参考梭菌属结构域。
[0032]天然存在的梭菌属结构域变体可取代来自所述天然存在的梭菌属结构域变体所基于的参考梭菌属结构域的一个或多个氨基酸、两个或更多个本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核酸，其具有包括核苷酸序列SEQ ID NO:5的单个开放阅读框核酸序列。2.如权利要求1所述的核酸，其中所述开放阅读框核酸序列由SEQ ID NO:5组成。3.一种多肽，其包括氨基酸序列SEQ ID NO:6。4.如权利要求3所述的多肽，其由氨基酸序列SEQ ID NO:6组成。5.一种多肽，其具有BoNT/A内肽酶活性和BoNT/E内肽酶活性，所述BoNT/A内肽酶活性和BoNT/E内肽酶活性源自包括氨基酸序列SEQ ID NO:6的多肽用凝血酶的蛋白水解消化。6.治疗性组合物在制备用于治疗慢性疼痛的药物中的用途，其中所述治疗性组合物包括权利要求5所述的多肽。7.如权利要求6所述的用途，其中所述慢性疼痛选自由以下组成的组：炎性伤害性疼痛和神经性疼痛。8.如权利要求7所述的用途，其中所述神经性疼痛选自由以下组成的组：癌症疼痛、术后疼痛、异常性疼痛、疱疹后神经痛、肠易激综合症以及其他内脏痛、骨痛、周围神经病变、循环系统附属疼痛以及头痛疼痛。9.如权利要求7所述的用途，其中所述慢性疼痛是炎性伤害性疼痛。10.如权利要求9所述的用途，其中所述慢性疼痛是关节炎疼痛。11.一种核酸，其包括：a)单个开放阅读框核苷酸序列，所述单个开放阅读框核苷酸序列编码具有下述的多肽：i)具有肉毒杆菌神经毒素血清型A(BoNT/A)H
C
细胞表面结合活性的结构域，ii)具有BoNT/A H
N
易位活性的结构域；iii)具有BoNT/A内肽酶活性的第一内肽酶结构...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：都柏林城市大学，
类型：发明
国别省市：