无仪器核酸提取装置及微量核酸的提取方法制造方法及图纸

本发明专利技术涉及一种无仪器微量核酸提取装置及微量核酸的提取方法。本发明专利技术的微量核酸提取装置包括管状主体１，管状主体一端设有用于与抽吸装置连接的接头２，另一端为插头３，用于与核酸结合的滤芯装置４安装于管状主体或插头内。本发明专利技术的微量核酸提取装置取代了高转速离心机，可在液相非均匀体系中达到良好的分离效果，并且成本低廉，操作简单，操作时间短，可广泛应用于实验条件相对较差的基层医院和急诊室的核酸快速诊断。本发明专利技术的核酸检测方法作为提取生物样本核酸的一种简捷手段，提取的样本纯度符合核酸扩增的要求，不需要其他仪器并且一次性使用，可广泛应用于病原体或宿主核酸提取，用于临床检测和诊断。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种无仪器微量核酸提取装置及微量核酸提取的方法。
技术介绍
临床常常需要从各种生物组织或细胞中抽提基因组DNA或RNA，应用核酸扩增技 术测定其成分，这是用于病症的辅助性分析和诊断的一种高度敏感，且最为直接的检测手 段。由于临床标本中含有蛋白质、脂类等物质，会干扰其下游扩增反应，故在进行检测反应 前必须进行生物样本的处理和核酸提取。由于样本的处理及保存对DNA和RNA(尤其是RNA) 的影响较大，因此在核酸标本的适当的预处理及保存对核酸模板的成功提取具有决定性作 用。临床常见的标本有全血、分泌物、棉拭子、脓液、体液、粪便等，这些临床标本的处理和保 存方法各有不同。不同临床标本的处理方法及步骤为一、痰标本痰属于分泌物，临床上常用作结核杆菌DNA测定样本，由于痰标本中含大量粘蛋 白和杂质，故在核酸提取时，一定要对标本进行前处理，即用液化液去除粘蛋白，然后用煮 沸或蛋白酶、酚/氯仿等经典法提取核酸。二、棉拭子用核酸扩增方法检测性病病原体时(衣原体、支原体、淋球菌、梅毒螺旋体、单纯 性疱疹病毒、人乳头状瘤病毒等)，临床标本一般为棉拭子。现在应用的处理棉拭子具体方 法为，用棉拭子取分泌物，置无菌试管或EP管内，在样本管中加无菌生理盐水，充分震荡混 勻后离心，弃上清，沉淀加无菌生理盐水1ml，打勻的离心，重复洗涤一次，弃上清，沉淀即可 用于核酸提取。三、体液体液标本，包括胸水、腹水、脑脊液、尿液等，可直接离心5分钟，取沉淀物提取核酸。血性胸腹水，可加等体积红细胞裂解液，震荡混勻后离心，可根据情况重复2-3 次，沉淀物用于核酸提取。四、脓液粘稠脓液同痰标本处理，先将其液化，再离心取沉淀提取核酸。水样脓液直接离心，沉淀用生理盐水洗2-3次后用于核酸提取。五、全血标本通常用来提取外周血单个核细胞核酸如基因组DNA、线粒体DNA、总RNA等。需要 采用前处理，即加适量的红细胞裂解液(破膜液)，裂解全血中的红细胞；随后再加适量的 细胞核裂液(破核液)，裂解白细胞中的细胞核，使核内核酸释放出来；最后再加SDS (十二 烷基硫酸钠)等去污剂，溶解脂蛋白，解聚核蛋白。核酸提取已经成为了分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作，但是目前核酸的提取方案纷繁浩渺。分子诊断市场的发展和测序市场、功能基因组计划的启动已经 为核酸提取市场加足了油，传统的操作流程已经被更为简便和自动化的化学溶液代替，现 在前市场上大部分核酸提取系统包括一个固体的纯化支持物，如离心柱里的薄膜，或者磁 珠。有一些则设计成方便使用的微孔板的形式。核酸在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在，在核酸提取过程中应根据不同研 究需要，保证核酸结构的相应完整性；尽量排除其它大分子成分(蛋白质、多糖等)的污染； 保证提取样本中不含对酶有抑制作用的有机溶剂及高浓度的金属离子。表1是对几种DNA 提取方法比较表1 各种DNA提取方法比较方法名称DNA提取适用范围方法评价传统法酚/氯仿等有机 溶剂抽提大多数标本DNA提 取纯化DNA纯度高、片段大、含量多，但比较费 时，步骤繁琐，使用有机溶剂，有损操 作者健康。螯合树脂法Chelex 100 树脂培养及各种临床标 本可用于培养标本和各种临床标本细菌及 部分病毒核酸的提取。旋转离心柱 法硅载体吸附大多数标本DNA提 取纯化DNA纯度高，但比较费时，步骤繁琐，洗 脱的效率是关键。玻璃粉法玻璃粉吸附，离 心分离土壤标本方法简便，可用于土壤中细菌芽孢DNA的 提取，不能彻底除去PCR抑制剂。磁珠法磁珠吸附，磁场 分离冰冻、陈旧组织简单、快速，整个过程不到加分钟，可 以获得较纯的DNA。适于少量样本。免疫亲和法抗原抗体反应， 磁场分离冰冻、陈旧组织， 样本含量很少的标 本DNA纯度高，含量多，适于样本含量少的 标本，抗DNA单克隆抗体的制备是关键。目前基因诊断试剂的发展有两个方向，一是高通量、自动化、精密而复杂的仪器设 备，满足高层次医院的需求；二是快速、低价、使用简单仪器或无仪器的诊断试剂，用于床边 快速诊断和基层医疗单位，直接服务于广大人民大众。目前大部分欧美国家的生物公司选 择开发利润丰厚的高端仪器，抢占高端市场。目前市场上已经出现一些利用固性吸附载体，将核酸吸附后再对固性吸附载体进 行洗脱，从而达到提取核酸的目的。但已有技术中，核酸提取装置普遍都体型庞大，并且价 格昂贵。专利申请号为200580016159. 1的专利技术申请公开了一种提取核酸的方法和装置，该 装置结构复杂，是一种高通量、自动化的仪器，适用于高层次的医院以及研究院所。专利申 请号为200710103868. 4的专利技术申请，公开了一种核酸提取装置，该装置含有两个相互连通的容器、送入/送出溶液的机构以及两个加压减压器，该专利技术的核酸提取装置较为小型，但 是结构仍然比较复杂，使用也不是十分方便需要先采用送入/送出溶液的机构将待测样 本送入，并且在使用时需要通过加压减压装置同时采取一边加压、一边减压的操作。因此，目前市场上仍然需要一种结构简单、操作方便并且廉价的核酸提取装置。
技术实现思路
本专利技术要解决的首要技术问题在于提出一种无仪器微量核酸提取装置。本专利技术要解决的第二技术问题在于提出一种无仪器微量核酸提取的方法。本专利技术要解决的第三技术问题在于提出一种无仪器提取微量核酸的试剂盒。为完成本专利技术的专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为本专利技术涉及一种无仪器微量核酸提取装置，所述的无仪器微量核酸提取装置包括 管状主体1，管状主体一端设有用于与抽吸装置连接的接头2，另一端为插头3，用于与核酸 结合的滤芯装置4安装于管状主体或插头内。本专利技术的第一优选方案为所述的管状主体与插头为一体或由管状主体与插头两 个部件连接而成，其中，所述插头为锥状。本专利技术的第二优选方案为所述的滤芯装置4包括一个与管状主体或插头内壁相 适应的中空的套筒和设置在套筒内部的滤膜，套筒两端为设置有挡板6的网状结构。本专利技术的第三优选方案为所述的滤芯装置的挡板5位于底面的中心，挡板的面 积大于插头下孔的面积。本专利技术还涉及一种无仪器微量核酸提取的提取方法，所述的提取方法包括以下步 骤(1)裂解将待测样本加入裂解液，混勻；(2)吸附将本专利技术中的微量核酸提取装置与加压减压装置连接，抽吸待测样本， 待测样本中的核酸成分吸附在滤膜上，弃去滤液；(3)清洗用微量核酸提取装置抽吸清洗液，清洗滤膜，弃去滤液；(4)洗脱用微量核酸提取装置抽吸洗脱液，洗脱液流经滤膜将吸附在膜上的核 酸成分洗脱，得到核酸水溶液；(5)核酸扩增。其中，优选的，裂解液选自异硫氰酸胍、盐酸胍或肌酸胍。裂解液的浓度为2 6mol/L，裂解液与待测样本的体积比为1 5 1，优选为1 1。清洗液为pH为4 8的Tris缓冲液，浓度为0. 01 lmol/L，洗脱液为pH为7 10 的 10mmol/L 的 Tris-HCl 溶液。本专利技术还涉及一种无仪器提取微量核酸的的试剂盒所述试剂盒包括本专利技术所述 的微核酸提取装置、抽吸装置、细胞裂解液、清洗液及洗脱液。本专利技术涉及所述的试剂盒在传染病病原体、宿主或病原体基因突变和单核苷酸多 态性检测中的用途。下面对本专利技术的
技术实现思路
进行详细描述本申请人选择不同的发展方向，致力于开发研制满足快速核酸诊断和基层医疗单 位的系列本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种无仪器微量核酸提取装置，其特征在于，所述的微量核酸提取装置包括管状主体（１），管状主体一端设有用于与抽吸装置连接的接头（２），另一端为插头（３），用于与核酸结合的滤芯装置（４）安装于管状主体或插头内。

【技术特征摘要】
1.一种无仪器微量核酸提取装置，其特征在于，所述的微量核酸提取装置包括管状主 体(1)，管状主体一端设有用于与抽吸装置连接的接头O)，另一端为插头(3)，用于与核酸 结合的滤芯装置(4)安装于管状主体或插头内。2.根据权利要求1所述的微量核酸提取装置，其特征在于，所述的管状主体与插头为 一体或由管状主体与插头两个部件连接而成，其中，所述插头为锥状。3.根据权利要求1所述的微量核酸提取装置，其特征在于，所述的滤芯装置4包括一个 与管状主体或插头内壁相适应的中空的套筒和设置在套筒内部的滤膜，套筒两端为设置有 挡板(5)的网状结构。4.根据权利要求1所述的微量核酸提取装置，其特征在于，所述的滤芯装置的挡板(5) 位于底面的中心，挡板面积大于插头下孔的面积。5.根据权利要求1所述的微量核酸提取装置，其特征在于，所述的滤芯装置位于插头 端到管状主体总长的1/2处，优选靠近插头端的管状主体总长的1/4处到1/2处。6.一种无仪器微量核酸提取的提取方法，其特征在于，(1)裂解将待测样本加入裂解液，混勻；(2)吸附将权利要求1 5所述的微量核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡林，尤其敏，徐高连，石坚，王宏莹，钟华燕，贾子冬，祁军，
申请(专利权)人：杭州优思达生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]