改进的疫苗组合物制造技术

由长链烷基化合物作为免疫佐剂与细菌多糖蛋白结合物组合构成的改进的疫苗组合物，本发明专利技术的组合物用于活化免疫系统以赋予宿主以免疫力，以预防的方式对抗免疫原。（*该技术在2011年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及具有改进的免疫原性的疫苗组合物。更具体地说，本专利技术的组合物包括与一蛋白质载体共价连接的细菌多糖和一长链烷基化合物相结合。该载体和烷基化合物的功能是佐剂。皆知，疫苗在疾病的预防上是很重要的。疫苗的作用是使宿主动物暴露于为活化免疫系统所设计的外来物质，以赋于宿主对该物质的免疫力而不致使宿主有罹病的危险。现今大约有20种疫苗已开发成商品。大多数这些疫苗是通过对引起机体或机体一部分致病的减毒作用，或通过对机体的特异性无毒部分的分离作用而制成的。后者的一个熟知实例是把脑膜炎和肺炎球菌的莢膜多糖分离出，作为细菌性脑膜炎和肺炎疫苗的基础。然而多糖疫苗是较差的免疫原，它对发育不好或受损伤的免疫系统的个体产生不了适当量的保护性抗体。免疫系统不完备的人群包括儿童，成人或有自体免疫疾病的人。而且，免疫应答的出现是不依赖于T细胞或是非记忆性的，这意味着个体接受了增强剂量的注射后，随着血清转化现象，不能呈现增强的免疫应答。T细胞的依赖性对于免疫球蛋白抗体和记忆细胞的诱导是必要的。由于血清转化，在反覆注射疫苗时，IgM和IgG抗体都会生成。而且当应答是T细胞依赖性时，抗体应答的幅度随着疫苗注射的次数而增加。多糖疫苗的免疫学由Jennings等在“多糖”(编者G.O.Aspinall)卷1，291-329(1982)作了综述。多糖结合于或共价键合于适当的蛋白质载体上，会由于发生了依赖于T细胞或记忆应答，而改善了免疫功能。在1987年12月美国批准了第一个人用的结合疫苗。它是由流感嗜血菌b的莢膜多糖共价结合于白喉类毒素的载体蛋白所构成。批准用于18个月的儿童，因为发售的多糖疫苗对此年龄段效果差。最近美国又批准另一个流感嗜血菌b的结合疫苗，是用不同的结合化学方法制成的。多糖和多糖-蛋白结合物是比较纯净的疫苗，因而与经典的全菌或病毒疫苗相比，比较安全。虽然整体细菌或病毒经化学剂、加热或遗传减毒处理已被生化减毒，但常常仍混杂有毒的副产物。然而，由于多糖和多糖-蛋白结合物的纯度增加，这常常意味着除去了天然的免疫刺激剂，因而这些新疫苗常常不是最理想的免疫原。天然的免疫刺激剂包括有细菌成分，例如脂质多糖，脂蛋白和胞壁酰二肽;这些都有毒性。此外，蛋白载体也可有某种程度的毒性，因此尽可能使用最小的量。例如白喉类毒素及相关的分子CRM197，通常用作人用结合性疫苗的载体分子。然而成人对这些载体分子会出现局部或全身性过敏。为了抵销这些作用，将佐剂与疫苗结合以增强抗体的形成，佐剂也可能对应答疫苗所产生的抗体的类型发生影响。例如，在用多糖-蛋白结合性疫苗进行免疫时，虽然会发生血清转化并随后产生了IgG抗体，但在小鼠的初步免疫应答是IgG1。增加IgG2a抗体的产生会是有益的，因为后者对于补体的活化作用而言，是最有效的小鼠抗体。补体路径对许多细菌感染提供了一个重要的防御机制。至于商用的佐剂，现今只用铝盐和钙盐。但铝和钙盐不是强力的佐剂。钙盐只有有限的应用，而铝盐对于其它疫苗有较广泛的应用，但对于多糖-蛋白结合型疫苗则几乎没有成功的报导。事实上，已报导氢氧化铝可抑制对流感嗜血菌b多糖-破伤风类毒素结合型疫苗的抗体应答;J.B.Robbins等，J.Pediatrics，112，695-702(1988)。J.B.Robbins等还观察到氢氧化铝对伤寒沙门氏菌多糖-霍乱毒素结合型疫苗的抗体应答有同样的抑制作用;J.Experimental Medicine，166，1510-1524(1987)。而且铝盐还会在注射部位引起暂时性的或慢性的局部肉芽肿;L.H.Collier在Lancet，1354-1367(1987)谈到，对破伤风类毒素疫苗反应的发生率和严重程度取决于铝盐佐剂的是否存在。铝佐剂的制备并非总是可重复的。而且铝可以单独刺激IgE抗体的产生，后者与调控直接过敏反应有关。这已被T.Matuhasi等在J.Infectious Disease，146，192(1982)中作了叙述。近年来用有机化合物作为佐剂已为人们注意。只有为数不多的有机化合物其佐剂的功能与市售的铝盐的作用相似;即随着缓慢释放媒介物或抗原(疫苗)库，从而抗原的释放在注射部位有一个比较长的时间。这类有机化合物的实例是有机表面活性剂和乳化剂，例如普卢兰尼克和特窗尼克，它们是非离子型的聚氧乙烯和聚氧丙烯的嵌段共聚物，BASF公司出品。这样一种辅佐剂的慢释放机理早已作为人用，因为它会减低过度刺激免疫系统的可能性。对免疫系统的过度刺激会导致自体免疫反应，如在用强力的免疫刺激剂例如弗洛因德佐剂时所发生的那样。因而该慢释放机理是优选的机理。由于大多数有机佐剂表明是强力的免疫刺激剂，这样高活性的佐剂会引起毒性，因而不能人用。作为强力免疫刺激剂的已知的有机佐剂是弗洛因德完全佐剂和胞壁酰二肽。这两个化合物都只限用于动物试验，系因毒性的考虑。许多模拟铝盐的有机佐剂比铝盐的毒性更大。例如D.Gall在Lmmunology，11，369-386(1966)中叙述的长链烷基胺，报导是毒性化合物，一般对细胞模结构有破坏作用。酪氨酸的十八烷醇酯已知是个佐剂。它有最低限度的免疫刺激性，但其功能是相当于铝佐剂的有机佐剂-慢释放的媒介物。即抗原会与酪氨酸十八烷醇酯发生复合，随着时间会从不溶解的佐剂上缓慢地释放或解吸附。抗原与佐剂之间的复合作用是通过各种弱的非共价键力发生的，例如疏水相互作用和氢键。这个现象见于Ouerell的美国专利4428932和Moloney等的美国专利4258029。Overell揭示了酪氨酸十八烷醇酯与过敏原如大麦、草和花粉提取液复合后，它的功能是作为脱过敏治疗的佐剂。Moloney等也指出，酪氨酸十八烷醇酯与破伤风类毒素和用福尔马林灭活的Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型脊髓灰质炎病毒形成复合后，其作用是疫苗的佐剂。这个现象又为A.Nixon-George等在J.Immunol-ogy，144，4798-4802(1990)中阐述，他们揭示酪氨酸十八烷醇酯和其它芳香族氨基酸的十八烷醇酯在与重组的肝炎B表面抗原复合后，它们的功能是肝炎B的候选疫苗的佐剂。因此，需要发展无毒的细菌多糖蛋白结合型疫苗-佐剂组合物，这种组合物具有改良的免疫原性。本专利技术重点是改良的疫苗组合物，其特征是，含无毒的细菌多糖-蛋白结合型疫苗和无毒的长链烷基佐剂。因此，根据本专利技术的一个方面，它提供了一种疫苗组合物，是由一个无毒的细菌多糖蛋白结合物和一个无毒的长链烷基化合物的佐剂所组成，该长链烷基化合物的有效含量可将多糖-蛋白结合物的免疫原性放大。本专利技术的另一方面是提供了一种能引起包括人在内的温血动物的免疫应答的方法，其特征是给宿主动物以有效量的本专利技术的疫苗组合物。本专利技术意外地发现，无毒的长链烷基化合物，特别是氨基酸或肽的酯类，可复合于多糖-蛋白结合型疫苗。由于这个复合作用，该长链烷基化合物的功能是缓慢释放的载体。即该长链烷基化合物在一较长的时间内将结合型疫苗释放到宿主动物体中。这与单用结合型疫苗相比，产生了增强的抗体应答。如前所述，辅佐性的这种机理与用铝盐和非结合型疫苗所观察到的机理是一样的。但也如前所述，铝盐对于细菌多糖-蛋白结合型疫苗而言，大部分都是无效的佐剂。因此不会预期本专利技术的长链烷基化合物借助同样的辅佐性机理，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种疫苗组合物，其特征是含有一个细菌多糖蛋白结合物和有效量的下式的至少一个佐剂＊＊＊式中Ｃ选自氢、氨基酸残基和肽残基组成的基团组；Ｄ选自氢和药用酸组成的基团组；Ｅ选自４－羟基苄基，苄基、４－羟基苯基，苯基，４－氨基丁基， 异丙基，甲基，氢和天然存在的氨基酸残基所组成的基团组；Ａ是（ＣＨ↓［２］）↑［ｎ］，氧或ＣＨ↓［２］Ｏ，Ｂ是（ＣＨ↓［２］）↓［ｎ］或氧，其中ｎ是０～４，前提是Ａ和Ｂ不能同时是（ＣＨ↓［２］）↓［ｎ］和氧；Ｒ是１２～２０个碳原子的烷 基。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯托弗L彭尼，弗朗西斯米琼，哈尔德J詹宁斯，
申请(专利权)人：北美疫苗公司，
类型：发明
国别省市：CA[加拿大]