改良的疫苗组合物制造技术

提供了包含长链烷基化合物作为结合同源免疫原性多肽免疫佐剂的改良的疫苗组合物。本发明专利技术的组合物可用于激活免疫系统，以一种预防方式赋予宿主以抗该免疫原的免疫力。（*该技术在2011年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及有改良之免疫原性的疫苗组合物。具体地说，本专利技术的组合物包含一种多肽免疫原，并结合有免疫佐剂功能的长链烷基化合物。众所周知，疫苗在预防疾病中是很重要的。疫苗的作用在于通过使宿主动物接触特定激活动物免疫系统的外来物质，而赋予宿主以对抗这种物质的免疫力，又不会使宿主患病。目前，已开发了大约20种商品疫苗。这些疫苗中大多数是使用不同方法对病原生物体或该生物体的蛋白质进行去毒性处理而制得的，这些方法包括分离生物体的特定非毒性部分或用化学物质、热或遗传减毒处理生物体的毒性部分。去毒性处理常常产生被未定组成之毒性付产物污染的异源产物。结果将会损害不纯去毒性疫苗作为免疫原性材料的效力。此外，有时还会出现持久性的有害付作用。一个众所周知的例子是使用完整的百日咳杆菌(B.Pertussis)作为预防儿童百日咳之疫苗的基础。目前在美国使用的疫苗基本上都是40年代引入的同一型式的疫苗。付作用包括从很小的不良反应到麻痹、持久性脑损伤甚至死亡。重组和其他尖端化学技术的出现有利地推动了较纯的，因而也更为安全的疫苗的开发。然而，因为这种改善的纯度常常意味着除去了天然性免疫刺激物，所以这些新疫苗较之它们的前体的作用弱，或者免疫原性较差。为了弥补上述缺陷，而在疫苗中联合使用免疫佐剂，以引发增高的抗体生成能力。目前仅使用了铝和钙盐作为商品疫苗的佐剂。但铝和钙盐并不是强有力的免疫佐剂。已发现钙盐只能有限地使用，而铝盐则可在注射部分引起暂时的或慢性局部肉芽肿。L.H.Collier(Lancet，pp.1364-1367，1970)提到，对破伤风之反应的发生率和严重程度取决于抗原的纯度以及铝佐剂的存在。铝佐剂的制备并不总是可以重复的。此外，铝可单独刺激IgE抗体的产生，后者可介导速发性超敏感反应(参见T.Matuwhasi，et al.，J.Infectious Disease，146，290(1982))。近年来已将注意力集中在使用有机化合物作为佐剂上。只有很少几种有机化合物能够以与商业上可接受的无机盐相似的方法发挥作用，即可作为一种缓慢释放载体或抗原(疫苗)存储材料，从而使抗原在注射部位长期缓慢释放。这类有机化合物的例子包括有机表面活性剂和乳化剂，如Pluronics和Tetronies，它们是由BASF公司生产的聚氧乙烯和聚氧丙烯的嵌段共聚物。这种佐剂性能的缓慢释放机制很早即被接受作人体使用，因为它可降低对免疫系统造成过度刺激的可能性。过度刺激免疫系统可导致如在使用强力免疫佐剂(如弗氏佐剂)时发生的自家免疫反应。因此，缓慢释放机制是更可取的机制。虽然已显示大多数有机佐剂是强有力的免疫刺激剂，但这类高活性佐剂是有毒性的，故不能用于人体。已知的有机佐剂有弗氏完全佐剂和胞壁酰二肽，它们都是强有力的免疫刺激剂，但考虑到毒性问题，两者均只限于在动物实验中使用。许多模拟铝盐的有机佐剂比铝盐的毒性更大。例如，据报导由D.Gall(Immwnology，11，369-386，1986)介绍的长链烷基胺即是一种可总地破坏胞膜结构的毒性化合物。已知不同组合物的大的高分子量异源抗原将与作为佐剂的不溶性有机分子相复合。这是一种非特异性结合现象，其中如果抗原材料是大的并且是完全不同的，便可与任何不溶性有机分子结合，不管其电荷及极性如何。有机佐剂与生物分子之间的复合作用是通过各种弱的非共价结合力，如疏水相互作用和氢键产生的。Overell的美国专利4，428，932号和Moloney等人的美国专利4，258，294号中介绍了这一现象。Overell公开了酪氨酸烷基酯作为一种佐剂，当与异源多组份高分子量变应原，如黑麦、草和花粉提取物相复合时，可用于变态反应的脱敏治疗。Moloney等人则教导当与异源多组份高分子量破伤风类毒素及Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型脊髓灰质炎病毒复合时，可用氨基酸的长链醇酯作为佐剂。因此，需要发展一种无毒性的疫苗一佐剂组合物，其应具有改善了免疫原性，并且其中的免疫原和佐剂均没有毒性。本专利技术涉及含有同源免疫原性多肽及无毒性长链烷基免疫佐剂的改良疫苗组合物。因此，根据本专利技术的一个方面，其提供了一种含有同源免疫原性多肽和作为佐剂之长链烷基化合物的疫苗组合物，其中的佐剂化合物的量足以放大免疫原多肽的免疫原性。根据本专利技术的另一个方面，其提供了一种引发免疫反应的方法，该方法包括给包括人在内的温血动物使用有效量的本专利技术的疫苗组合物。已令人惊奇地发现，根据本专利技术，无毒性、带正电荷的长链烷基化合物，特别是氨基酸或肽的酯能够以一种选择性方式结合同源多肽。这种一种依赖于以不溶性酯之形式存在的氨基酸的类型及同源性多肽之类型的特异性现象。这种未曾预料的特异性是根据本专利技术所使用之同源多肽的特征，且未能由相似分子量的多糖表现出来。根据本专利技术还发现，当用无毒的长链烷基化合物，特别是长链烷基氨基酸酯代替常规含铝佐剂时，在所产生的抗体异型方面可表现出一种或多种效应。一种效应涉及IgE抗体的产生。具体地说，当使用本专利技术的长链烷基佐剂化组合物时，IgE抗体的水平基本上没有升高，且可保持在不使用佐剂时所观察的水平;相比之下，当使用含铝佐剂时则观察到IgE水平升高。IgE抗体可介导即刻超敏感反应。曾报导在用含铝佐剂疫苗免疫时，由于IgE的产生而出现过敏反应甚至导致死亡(参见上文提到的Matuhasi等人的报导)。因此，用本专利技术的长链烷基佐剂化组合物观察到的减低IgE产生的水平，将有益于治疗效果。另一种效应是当在本专利技术的组合物中使用长链烷基佐剂时，IgG2a抗体对IgG1的比例比使用铝佐剂时高，而且两抗体异型水平均增加。这一比例增高也对疗效有利，因为就激活补体和抗体依赖性细胞胞毒性机制以及对肿瘤和寄生物的抗性来说，IgG2a抗体是最为有效的小鼠抗体。本文中用于限定本专利技术疫苗组合物中所用多肽使用的术语“同源”，是指一种免疫原性多肽基本上是由化学合成或生物合成制备之致病因子的一个或多个抗原决定基组成的。如果存在一个以上抗原决定基时，同源抗原性多肽将包含一个或多个免疫优势抗原决定基。当存在一个抗原决定基时，一般利用化学合成，而当存在一个以上抗原决定基的情况下，则可使用化学或生物学合成。同源多肽可包含致病因子的其他部分，这些部分是无毒的，并且不会对同源多肽的抗原性有不利影响。无毒性佐剂最好是氨基酸或肽的带正电荷的酯，特别是氨基酸，二肽或三肽的含14至20个碳原子之烷基醇酯。用于本专利技术组合物中的同源免疫原性多肽是无毒的，并且能够在宿主体内引发免疫反应。免疫原多肽主要由衍生于爱滋病、甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎、破伤风、脊髓灰质炎、百日咳(淋巴细胞增多促进因子(LPF)毒素)、单纯性疱疹、呼吸道合胞病毒、麻疹、流感病毒、狂犬病、雷萨热(lassa faver)、轮状病毒、腺病毒、鼻病毒、口蹄疫、牛和猫白血病病毒、牛疫病毒、革登热病毒、蜱传播的脑炎、疟疾和付流感病等病原因子的一个或多个抗原决定基组成的。在许多情况下，可望修饰天然存在之多肽免疫原的氨基酸序列，以制得更适用于疫苗组合物的同源多肽，而又不改变其免疫原性质。这些改变的例子包括修饰氨基酸侧链，以模拟转译后修饰，或改变免疫原的化学性质。修饰多肽以改善免疫原的体内寿命也是可能的。此外，还可能在多肽的氨基或羧基末端加上一个半胱氨本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种疫苗组合物，含有同源免疫原性多肽及有效量的下列通式的至少一种佐剂：＊＊＊其中Ｃ选自氢、氨基酸残基，和肽残基；Ｄ选自氢和医药上可接受的酸：Ｅ选自４－羟苄基、苄基、４－羟苯基、苯基、４－氨丁基、异丙基、甲基、氢和天然存在 的氨基酸残基；Ａ是（ＣＨ↓［２］）↓［ｎ］、氧或ＣＨ↓［２］Ｏ，且Ｂ是（ＣＨ↓［２］）↓［ｎ］或氧、这里ｎ是０至４，条件是Ａ和Ｂ的（ＣＨ↓［２］）↓［ｎ］和氧不是一样的；且Ｒ是有１２至２０个碳原子的烷基。↓↓。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：查里斯拖夫L佩尼，
申请(专利权)人：北美疫苗公司，
类型：发明
国别省市：CA[加拿大]